重度苯中毒患者胸腺输出近期功能明显低下

本研究目的在于分析重度苯中毒患者外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环 (T cellreceptorexci sionDNAcircle ,TREC)的含量 ,从而了解其初始 (naive)T细胞的含量和胸腺近期输出功能。利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 8例重度苯中毒患者和 16例正常人外周血单个核细胞 (PBMNC)中TREC的水平。结果显示正常人中TREC含量为 :6 .6 9± 4 .79 10 0 0PBMNC ;而重度苯中毒患者则为 1.0 3± 0 .4 4 10 0 0PBMNC ,显著低于正常人TREC水平 (P <0 .0 1) ,并持续苯中毒的全过程 ,即使在外周血血象基本恢复正常时 ,TREC水平仍处于较低状态。结论 :重度苯中毒患者胸腺近期输出功能明显低下 ,苯中毒明显损伤T细胞免疫功能。

实时定量PCR分析CML患者胸腺近期输出功能

目的 了解慢性粒细胞白血病 (CML)患者CD3+ 、CD4 + 和CD8+ 细胞中T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量 ,从而推测CML患者的胸腺近期输出功能。方法 利用实时定量PCR(Taq Man)方法检测 8例CML患者外周血单个核细胞、3例CML患者CD4 + 和CD8+ 细胞中TRECs的水平。并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+ 细胞中TRECs水平。 9例正常人外周血作为对照。结果 CML患者中TRECs含量为 0 .1± 0 .2 2 / 10 0 0T细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0T细胞 ,P <0 .0 1)。其中 5例患者外周血单个核细胞中未能检测到TRECs ,经分选CD4 + 和CD8+ 细胞后 ,2例可以检测到低水平的TRECs。结论 本研究首先报道了CML患者TRECs水平情况 。

胸腺输出功能的评价手段—T细胞受体重排删除环的定量分析

多年来 ,因缺乏合适的检测胸腺输出naiveT细胞的技术 ,未能明确胸腺输出功能。由于胸腺T细胞的分化始于T细胞受体 (TCR)基因的重排 ,在TCRα基因重排时 ,通过δRec和 ψJα基因片段重组形成染色体外DNA环而删除TCRδ基因 ,该删除环称为信号结合T细胞受体重排删除环 (sjTRECS)或TRECs。TRECs十分稳定 ,不扩增且随着细胞增殖而稀释 ,故近期研究认为对TRECs的定量检测可以直接地估计胸腺的输出功能。本文综述了TRECs定量分析在评价正常人和造血干细胞移植 ,血液肿瘤、HIV感染和自身免疫性疾病等等的胸腺输出功能中的作用。

B淋巴细胞肿瘤患者胸腺近期的输出功能

本研究了解B细胞肿瘤患者胸腺近期输出naiveT细胞的水平,以评价其T细胞免疫潜能。利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测61例B细胞肿瘤患者(成人B-ALL20例,儿童B-ALL6例,B-CLL4例,B-NHL17例,MM14例)外周血单个核细胞(PBMNC)中T细胞受体重排删除DNA环(T-cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TREC水平。5例ALL-CR病人和17例正常人外周血作为对照。实验结果显示,正常人外周血中TREC拷贝数为3.76±3.42/1000PBMNC和5.87±4.96/1000CD3+细胞,而各B细胞肿瘤组的TREC水平均显著低于正常人水平,其TREC水平在成人B-ALL为0.53±1.52拷贝/1000PBMNC和2.01±3.93拷贝/1000CD3+细胞(p=0.0005和p=0.0123),在B-CLL为0.11±0.15拷贝/1000PBMNC,0.23±0.27拷贝/1000CD3+细胞(p=0.0015和p=0.0381),在B-NHL为0.71±1.34拷贝/1000PBMNC(p=0.0017),在MM为0.53±0.90拷贝/1000PBMNC(p=0.0018)。ALL-CR组TREC水平同样低于正常人水平,儿童B-ALL组TREC水平明显高于成人组。结论:各类B细胞肿瘤胸腺近期输出naiveT细胞功能均明显降低,个体差异较大,在病人达到完全缓解期时,胸腺近期输出功能仍没有得到恢复,提示对病人有动态观察的必要性。

MDS患者外周血中TCRVβ_(1-24)-Dβ1sjTRECs的分析

目的检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs的存在情况。方法利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(Vβ1-24-Dβ1sjTRECs),10例正常人外周血作为对照。结果所有TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出,除TCRVβ12-Dβ1sjTRECs和TCRVβ19-Dβ1sjTRECs外,其余TCRVβ-Dβ1sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检。大多数TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高,但其中只有6种TCRVβ-Dβ1sjTRECs(分别是TCRVβ3、12、13、15、21、22-Dβ1sjTRECs)的检出率差异有统计学意义。结论本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCRVβ-Dβ1sjTRECs的存在情况。MDS患者TCRVβ-Dβ1sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况。

苯中毒患者胸腺近期输出功能和T细胞亚群变化

目的 分析职业性慢性轻度苯中毒工人外周血单个核细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量和CD4+/CD8+比值 ,从而了解其初始 (naive)T细胞含量和胸腺近期输功能 ,以及外周T细胞亚群分布情况。方法 利用间接免疫荧光法检测 11例健康人和 5例轻度苯中毒患者外周血单个核细胞中CD4+/CD8+比值 ;采用实时荧光定量聚合酶链反应 (real timePCR)和TaqMan方法检测两组外周血单个核细胞中sjTRECs的含量。结果 每 10 0 0个外周血单个核细胞中sjTRECs含量在正常人中为 9 10± 4 5 5 ,轻度苯中毒为 2 80± 3 79,P <0 0 5 ;轻度苯中毒者CD4+/CD8+的比值 (0 92± 0 3 5 )明显低于正常人 (1 49± 0 2 1) ,P <0 0 1。结论 轻度苯中毒患者胸腺近期输出功能低下 。

接苯工人胸腺近期输出功能和外周血T细胞亚群变化

目的分析接苯工人外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)和T淋巴细胞亚群的含量,了解接苯后工人胸腺近期输出功能和外周T淋巴细胞亚群变化,为接苯后机体细胞免疫改变提供资料。方法利用间接免疫荧光法检测健康人和接苯工人外周血单个核细胞中CD3+,CD4+,CD8+的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR)和TaqMan方法检测标本外周血单个核细胞中TRECs的含量。结果在接苯工人外周血白细胞总数正常情况下,接苯组CD8+含量显著增加,CD4+/CD8+比值为(1.13±0.78),低于健康人(1.43±0.25)(P<0.05)。每1000个外周血单个核细胞中接苯组与对照组TRECs含量分别为(3.90±3.58)和(7.39±6.83),两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期低剂量接苯可能引起一些工人的胸腺近期输出功能低下,导致机体细胞免疫功能障碍。

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后TRECs含量的变化

观察慢性乙型肝炎(CHB)患者经抗病毒治疗前后T细胞受体重排删除环(TRECs)含量的变化。利用实时荧光定量PCR方法检测15例干扰素、13例阿德福韦酯治疗前后的CHB患者及27例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中TRECs的含量。CHB患者中TRECs含量为(7.29±2.26)copies/103PBMCs,低于健康体检者TRECs水平(10.48±6.90)copies/103PBMCs,P<0.05;TRECs含量与HBV载量直线相关分析r=0.06,P=0.975;干扰素组治疗后TRECs含量(12.77±5.25)copies/103PBMCs,高于治疗前(7.14±2.69)copies/103PBMCs,P<0.05;阿德福韦酯组治疗后TRECs含量(8.63±3.26)copies/103PBMCs与治疗前(7.46±1.73)copies/103PBMCs比较,P>0.05,差异无统计学意义。CHB患者组中TRECs含量低于正常对照组,TRECs含量与HBV载量无明显相关性,干扰素治疗能提高CHB患者中TRECs的含量,而阿德福韦酯无此作用。

AML-M5患者外周血naiveT细胞水平和TCRVβ谱系利用特点

目的 了解急性髓性白血病M5亚型 (AML -M5 )患者T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量和TCRVβ基因谱系利用和克隆性 ,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCRVβ亚家族T细胞增殖特点 .方法 利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测 5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平 ,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平 .利用RT -PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因表达和克隆性 .9例正常人外周血作为对照 .结果 M5患者外周血中TRECs含量为 0 .76± 1.2 1/ 10 0 0CD3+ 细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0CD3+ 细胞 ,p <0 .0 5 ) .5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族 (2 - 16个 ) .基因扫描分析显示 4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞 ,Vβ1,Vβ15和Vβ2 1克隆性T细胞均分别见于 3例病人中 .结论 率先报道了AML -M5型患者胸腺近期输出naiveT细胞功能明显降低 ,尽管整体T细胞免疫功能低下 ,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞 。

自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能

目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况。方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照。结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P<0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平。结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异。

B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析

目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在情况，从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族naive T细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1 sjTRECs，10例正常人作为对照。结果TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到，与正常人比较，B-ALL病人的Vβ24～Dβ1 sjTRECs出现频率比正常人高，且有统计学意义（80％：30％，P=0．0285），另有18个家族的Vβ～Dβ1 sjTRECs比正常人低，其中在Vβ1（30％，P=0．0285）、Vβ12（20％，P＝0．0285）、Vβ13（40％，P=0．0043）、Vβ15（20％，P=0．0022）和Vβ18（20％，P=0．0089）5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族naive T细胞功能低于正常人。

抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群的胸腺近期输出功能初步探讨

目的观察抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测其胸腺近期输出功能。方法利用实时荧光定量PCR方法检测30例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群及22例正常人PBMCs中TRECs含量。结果抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群中TRECs含量为(5.67±1.55)cop ies/103PBMCs,与正常人TRECs水平(6.11±2.11)cop ies/103PB-MCs无差异(P>0.05)。结论抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群TRECs水平情况显示其胸腺近期输出功能与正常人比较无差异。

造血干细胞移植患者动态监测胸腺输出功能的意义

目的观察造血干细胞移植患者胸腺近期输出功能的动态变化情况,分析其相关影响因素,从而了解移植后T细胞免疫重建情况。方法选择2007年1月~2012年6月于北京大学深圳医院接受造血干细胞移植的血液病患者41例,采用实时荧光定量PCR方法检测患者不同时期200μL外周血中T细胞受体重排DNA删除环（sjTREC）水平,计算每毫升血液中sjTREC拷贝数。同时检测32例年龄匹配的正常者外周血T细胞受体重排DNA删除环含量作为正常对照。比较患者造血干细胞移植后sjTREC随时间变化情况。结果 32例正常对照组外周血Log sjTREC/mL为3.78±0.22,它与年龄呈负相关（r=-0.59,P〈0.05）。41例移植患者移植前外周血sjTREC水平显著低于正常对照组,移植后外周血sjTREC进一步下降,移植6个月后TRECs逐渐升高,移植后1.5年基本恢复至移植前水平,移植后2.5年恢复至接近正常水平。反复化疗可使患者胸腺输出功能下降。不同年龄组患者移植后胸腺输出功能恢复差异无统计学意义（P〉0.05）。移植6个月后,自体造血干细胞移植组患者外周血sjTREC水平恢复快于异基因移植组（P〈0.05）,至移植后2年二者差异无统计学意义（P〉0.05）。移植1年后存在广泛型cGVHD的患者其外周血sjTREC水平下降,低于无cGVHD者（P〈0.05）。结论造血干细胞移植后T细胞免疫重建缓慢,并受多种因素影响。胸腺输出功能可作为评价移植后免疫重建的有效指标。

原发性血小板减少性紫癜患者胸腺近期输出功能状态

目的:了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者胸腺近期输出功能的状态,评价其T细胞潜能。方法:采用实时定量PCR(TaqM an)方法检测15例ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,17例正常人作为对照。结果:正常人外周血中每1 000个PBMCs中TRECs拷贝数为(3.76±3.42),ITP患者TRECs水平变化较大[每1000个PBMCs中TRECs拷贝数为(2.60±2.99)],4例病人未能检测到TRECs,病人平均TRECs水平与正常人的差异没有显著性(P>0.05),女性病人TRECs水平略高于男性(P=0.499),但无统计学意义。结论:多数ITP患者外周血初始T细胞水平和胸腺近期输出功能保持正常水平。

实时荧光定量PCR分析慢性丙型肝炎患者胸腺近期输出功能

目的观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测CHC患者的胸腺近期输出功能,并且比较TRECs含量与HCV载量的关系。方法利用实时荧光定量PCR方法检测22例CHC患者及16例正常人PBMCs中TRECs含量,用RT-PCR方法结合荧光探针的检测技术检测CHC组外周血血清中的HCVRNA。结果CHC患者中TRECs含量为(5.52±1.87)copies/103PBMCs,低于正常人TRECs水平(7.19±2.42)copies/103PBMCs,P<0.05;TRECs含量与HCV载量直线相关分析r=-0.427,P<0.05。结论CHC患者TRECs水平低于正常人,显示其胸腺近期输出功能明显降低,且与HCV载量呈负相关性。

不同接苯时间苯中毒患者胸腺近期输出功能变化

为分析职业性苯中毒工人外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的含量,了解苯中毒工人胸腺近期输出功能变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR)和TaqMan方法检测苯中毒和健康人外周血单个核细胞中TRECs的含量。结果显示,TRECs含量苯中毒观察对象2·97±1·31、轻度苯中毒1·73±1·11、中度苯中毒2·28±1·44、重度苯中毒1·91±1·95,各组患者每1000个外周血单个核细胞中TRECs含量均明显低于健康组7·39±6·83(P<0·05),轻度和重度苯中毒组TRECs含量显著低于苯中毒观察对象组(P<0·05)。重度苯中毒组接苯时间>3的工人TRECs含量显著低于接苯时间≤3年者,苯中毒观察对象组接苯时间>5年的工人TRECs含量显著低于≤5年者(P<0·05)。提示苯中毒患者胸腺近期输出功能低下。

CML中TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1sjTRECs,13例正常人外周血作为对照.结果TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4+或CD8+细胞可以检测到,而在CML患者PBMC中则未能检测到.结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低,与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞水平低下有关.

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者T细胞受体重排删除DNA环(signaljoint T-cell receptor exc ision DNA c irc les sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点。方法利用实时定量PCR(TaqM an)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照。结果ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs,(2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005]。各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复。

脓毒症患儿T细胞亚群和sjTREC基因水平的评估

目的本研究旨在评价脓毒症患儿T细胞亚群和sjTREC基因水平，为其合理的免疫调节治疗提供理论依据。方法根据感染严重程度将患儿分为脓毒症组（25例）、严重脓毒症组（23例）和正常对照组（50例）。在使用血制品、免疫制剂及营养支持前测定各组患儿T细胞亚群。通过实时荧光定量PCR法分别检测各组患儿sjTREC基因水平变化，利用双标准曲线法对sjTREC基因水平进行绝对定量，检测结果用sjTREC与Ca内参基因拷贝数比值（sjTREC／Ca×2×1ooo）表示，结果应用SPSS16．0软件进行统计学处理。结果严重脓毒症组患儿CD3＋、CD4＋和CD8＋细胞比例明显低于正常对照组（P〈0．01）；严重脓毒症组患儿sjTREC基因水平为173．86±38．37，明显低于脓毒症组（345．15±66．21）和正常对照组（389．42±50．20），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论严重脓毒症患儿存在T细胞亚群数量紊乱和胸腺输出功能下降，故在早期进行细胞免疫支持可能会改善临床预后。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者胸腺近期输出功能动态监测的临床意义

目的观察弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者不同治疗阶段胸腺近期输出naiveT细胞的动态变化，评估其与疾病预后的关系以及化疗对免疫重建潜能的影响。方法利用实时定量PCR（TaqMan）方法分别检测30例DLBCL患者不同治疗阶段外周血单个核细胞（PBMNC）中T细胞受体重排删除DNA环（TREC）的水平（以每1000个PBMNC中的含量表示），并根据外周血中CD3细胞阳性率计算CD3＋T细胞中TREC水平。以12名年龄相匹配的正常人作为对照。结果与正常人外周血中的TREC水平相比，不同基因亚型DLBCL患者外周血中的TREC水平均明显低下，生发中心B细胞样（GCB）型患者组的TREC水平高于非生发中心B细胞样（non—GCB）型患者组。化疗前GCB型患者组PBMNC和CD3＋T细胞中的TREC水平分别为0．91±0．15和1．22±0．69，而non-GCB型患者组分别为0．43±O．29和0．64±0．44。治疗前的TREC水平与患者的国际预后指数（IPI）评分明显相关（r=-0．441，P=0．015）。化疗后的TREC水平进一步降低，治疗6个周期后最低，GCB型患者组PBMNC和CD3＋T细胞中的TREC水平分别为0．63±0．34和0．89±0．65，而non—GCB型患者组分别为0．19±0．11和0．27±0．25。大多数患者化疗结束后3个月TREC水平上升较为明显。5例患者化疗后6个月的TREC水平已接近正常。结论DLBCL患者的胸腺近期输出功能严重受损，化疗前的胸腺近期输出功能与疾病的预后有重要关系，化疗影响患者的T细胞免疫功能重建潜能。