胸腺肽αl原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

构建胸腺肽αl(Thymosinαl,Tαl)基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,为大量获得胸腺肽αl打下基础。将人工合成的Tαl三串体基因插入到表达载体pET32a后,CaC12法转化大肠杆菌BL21,经氨苄青霉素筛选后用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测BL21中胸腺肽αl的表达。大肠杆菌中检测到与目的蛋白相对分子量(31kD)相符的条带。成功构建了Tαl原核表达载体,该蛋白能在大肠杆菌中表达。

胸腺肽α1联合伏立康唑序贯治疗慢性阻塞性肺疾病合并侵袭性肺曲霉菌病患者疗效及对外周血细胞免疫功能炎症因子水平的影响

目的探究胸腺肽α1联合伏立康唑序贯治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并侵袭性肺曲霉菌(IPA)患者疗效及对外周血细胞免疫功能、炎症因子水平的影响。方法根据治疗方法将杭州市红十字会医院自2020年1月至2023年12月收治的108例COPD合并IPA的患者分为对照组和观察组,各54例,2组患者均接受常规对症治疗,对照组接受伏立康唑治疗,观察组患者在对照组基础上联合胸腺肽α1治疗,比较2组疗效、外周血细胞免疫功能[CD3^(+)淋巴细胞(CD3^(+))、CD4^(+)淋巴细胞(CD4^(+))、CD8^(+)淋巴细胞(CD8^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)值]、炎症因子水平[白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、不良反应。结果观察组总有效率(96.3%)高于对照组(81.5%)(χ^(2)=4.594,P=0.032);治疗后,观察组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值分别为(62±7)%、(44±5)%、(2.4±0.6),高于对照组的(51±7)%、(37±5)%、(2.0±0.6)(t=8.190、7.254、3.290,均P<0.05),观察组CD8^(+)水平为(20±3)%,低于对照组的(27±3)%(t=10.658,P<0.05);治疗后,观察组IL-6、IL-8、TNF-α水平为(27±4)ng/L、(31±6)ng/L、(45±6)ng/L,均低于对照组的(32±4)ng/L、(37±5)ng/L、(53±6)ng/L(t=7.117、6.981、6.586,均P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(7.4%与14.8%,χ^(2)=0.787,P=0.375)。结论胸腺肽α1联合伏立康唑序贯治疗较单伏立康唑序贯治疗COPD合并IPA患者疗效更显著,能有效提高患者的免疫功能,降低炎症反应,且临床安全性良好。

拉米夫定联合日达仙治疗慢性乙型肝炎患者三年随访研究

目的观察拉米夫定(LAM)和日达仙(ZADAX IN,Tα1)联合治疗慢性乙型肝炎的长期疗效和安全性。方法选择50例HBV-DNA、HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者,按成组配对原则分为两组,拉米夫定治疗组(LAM组)和联合治疗组(LAM+Tα1组),每组各25例。结果治疗1年时,LAM+Tα1组HBeAg血清转换率为45.8%明显高于LAM组9.5%(P<0.01);LAM+Tα1组HBV-DNA阴转率、ALT复常率和YMDD变异发生率分别为83.3%,91.7%,0,LAM组HBV-DNA阴转率、ALT复常率和YMDD变异发生率分别为61.9%,90.5%,4.8%(P>0.05)。治疗2年时LAM+Tα1组HBeAg血清转换率、HBV-DNA阴转率、ALT复常率和YMDD变异发生率分别为62.5%,79.2%,83.3%和8.3%;LAM组分别为28.6%,47.6%,52.4%和33.3%(P<0.05)。治疗3年时LAM+Tα1组HBeAg血清转换率、HBV-DNA阴转率、ALT复常率和YMDD变异发生率分别为45.8%,62.5%,70.8%和16.7%;LAM组分别为14.3%,23.8%,38.1%和52.4%(P<0.05;P<0.01)。治疗1、2和3年后LAM+Tα1组的完全应答率分别为45.8%,58.3%和41.7%明显高于LAM组的9.5%,28.6%和14.3%(P<0.05;P<0.01);两组部分应答率无明显差异(P>0.05)。LAM+Tα1组中1例出现一过性轻度血清淀粉酶升高,LAM组中1例出现皮疹,其余均未出现无明显的不良反应。结论拉米夫定与日达仙联合治疗慢性乙型肝炎,疗效优于单一用药组,且非常安全。

胸腺肽α_1对脓毒症患者免疫功能的影响及预后评价

目的探讨胸腺肽d，对脓毒症（sepsis）患者免疫功能的影响及评估预后。方法42例脓毒症患者随机分为治疗组与对照组，两组患者均按照2008年脓毒症治疗指南进行治疗，治疗组在对照组基础上加用胸腺肽d。1．6mg皮下注射，每天1次，连续7d。分别在治疗前（D_0）及治疗后3d（D，）、7d（D_0）留取标本查T细胞亚群，免疫球蛋白IgG、IgA、IgM，炎性物质PCT、IL-6、IL-10，并记录APACHEⅡ评分，28d死亡率。结果在治疗后7d治疗组与对照组比较CIM^＋T细胞、CIM^＋T／CD8^＋T比值、IgG、IL-10均升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。在治疗后7d治疗组与对照组比较APACHEII评分、PCT、IL-6明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，治疗组28d死亡率稍下降，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胸腺肽理，治疗脓毒症患者可增强细胞免疫，对其体液免疫、炎性反应存在改善作用，能改善病情，对预后的影响尚待进一步研究。

拉米夫定胸腺肽a_1联用与拉米夫定单用治疗HBeAg阳性慢性乙肝患者的疗效与安全性评价

目的评价拉米夫定+胸腺肽a(1LAM+Ta1)与拉米夫定(LAM)单用治疗e抗原阳性慢性乙肝(CHB)患者的疗效与安全性。方法计算机检索CENTRAL、PubMed、CBM、CNKI,均从建库检索至2008年12月,并追踪已获文献的参考文献,纳入LAM+Ta1与单用LAM的随机对照试验(RCT)。由2名研究者独立进行质量评价及数据提取,采用RevMan5.0软件进行Meta分析。结果共纳入23个RCT,合计1488例患者。Meta分析结果显示,主要结局指标(HBeAg血清转换),在治疗结束时以及停药后随访1年,试验组均优于对照组,其差异有统计学意义[RR(95%CI)分别为2.89(2.40,3.48)和4.99(2.99,8.31)];次要结局指标(HBV-DNA阴转、HBeAg阴转、ALT复常、HBV-YMDD变异、完全应答、HBsAg阴转),在治疗结束时及停药后随访1年,试验组均优于对照组;与单药治疗组相比,试验组不良反应无明显增加。结论对HBeAg阳性CHB患者,LAM+Ta1联合疗法可能优于LAM单药疗法;但受纳入文献质量影响,以上结论尚需高质量的临床试验进一步证实。

苦参碱注射液联合胸腺肽a-1治疗慢性乙型肝炎疗效评价

目的：观察苦参碱注射液联合胸腺肽a-1治疗慢性乙型肝炎（CHB）的临床疗效.方法：选择120例CHB患者随机分为治疗组64例,对照组56例,治疗组应用苦参碱和胸腺肽a-1联合治疗,对照组采用干扰素,单独治疗,疗程均为24WK,随访48WK.结果：ALT复常率、HBV-DNA阴转率,HbeAg阴转率、血清转换率等生化指标在治疗24WK两组比较无明显差异P〉0.05.但治疗结束后48WK随访,上述4个检验指标治疗组都比对照组明显改善,均有统计学意义,P〈0.05.结论：苦参碱注射液联合胸腺肽a-1治疗CHB用药方便,能够明显抑制乙型肝炎病毒复制,且能持续应答、治疗期间安全性,依从性均好.

胸腺肽α1降低脓毒症单核细胞PD-L1表达

目的探究胸腺肽α1对脓毒症受试者单核细胞表面共刺激分子(CD86)及负性共刺激分子(PD-L1)表达的影响。方法随机收集2016年3-9月间符合纳入标准的脓毒症受试者,分别在入组前(第0天)、入组后第3天和第7天计算和检测序贯性器官功能衰竭评分(SOFA评分)、降钙素原(PCT)和单核细胞CD86和PD-L1的表达量,同时观察28 d内入住ICU时间和器官功能支持时间。结果研究期间共收集20例(实验组:10例;对照组:10例,脓毒症受试者,两组受试者在入组前(第0天)的各项统计指标差异均无统计学意义;入组后第7天,实验组PD-L1平均荧光强度(MFI)表达低于对照组(2.2[1.5,3.0]vs.3.7[2.7,4.8],P<0.05),差异有统计学意义;入组后28 d的生存和器官功能支持分析显示:实验组受试者继发感染发生率低于对照组[0.00%(0/10)vs.30.00%(3/10),P<0.05],差异有统计学意义;但两组入住ICU时间、28 d呼吸机使用时间、28 d使用血管活性药物时间和28 d生存率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胸腺肽α1可以通过抑制单核细胞PD-L1表达,有利于抗原提呈抑制状态的改善,减少继发感染的发生率。

严重脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4和髓样分化因子88在胸腺肽α1治疗过程中的基因表达变化

目的观察严重脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体(TLR)2、4基因及其信号传导通路上的髓样分化因子88(MyD88)基因表达水平在胸腺肽α1治疗过程中的变化。方法 54例严重脓毒症患者被随机分为对照组(常规治疗,28例)和治疗组(胸腺肽α1治疗,26例),采用实时荧光定量PCR监测两组患者入院时及治疗后第3、7天外周血单个核细胞TLR2、TLR4和MyD88基因表达水平变化,并观察两组的28 d病死率。结果治疗组的28 d病死率虽低于对照组,但差异无统计学意义(23.1%vs 35.7%,P=0.310)。治疗组的患者单核细胞TLR2、TLR4和MyD88基因表达水平逐渐上升,而对照组未见该规律,与对照组相比,治疗后第3天时治疗组的TLR2(2.31±0.79 vs 1.83±0.51)、TLR4基因表达增高(7.31±0.79 vs 6.55±0.92);第7天时治疗组TLR2(2.75±1.17 vs 1.63±0.36)、TLR4(7.75±1.03 vs 6.39±0.72)和MyD88(4.26±0.77 vs 3.77±0.68)水平明显增高,均P<0.05。结论胸腺肽α1在治疗严重脓毒症患者过程中可以上调患者单核细胞的TLR2、4和MyD88基因的表达水平。

重组马铃薯X病毒注射番茄果实高效表达胸腺素α1

植物病毒载体表达外源蛋白表达水平高、表达速度快、宿主范围广。本研究用马铃薯X病毒(PVX)载体在番茄果实中表达胸腺素α1(Tα1),是一种快速高效生产医用蛋白的新方法。将pGEM-T-Easy-Tα1质粒酶切,获得大约100bp大小的Tα1基因片段,并将该片段与PVX载体(pGR-107)连接,用SalI和ClaI酶切鉴定,筛选出阳性重组体。进一步将重组质粒转化根癌农杆菌GV3101,用农杆菌注射法(Agroinjection)侵染不同生长阶段的番茄果实,用ELISA检测外源蛋白Tα1的表达水平。结果表明已成功构建了pGR107-Tα1表达载体,在农杆菌的菌液密度(OD600值)为1.0、番茄植株开花后2周半到3周时侵染番茄果实,Tα1的表达量最大。

干扰素联合胸腺肽α1治疗e抗原阳性慢性乙型肝炎的荟萃分析

目的 评价干扰素联合胸腺肽α1治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效与安全性.方法 检索PubMed、EBSCO、Cochrane Library、中国生物医学文献光盘数据库、中国科技期刊数据库、万方数据库等,检索年限均从1990年1月-2010年5月,纳入干扰素联合胸腺肽α1与干扰素单药治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎且停药后随访时间至少6个月的随机对照试验.采用RevMan5.0软件进行荟萃分析,并根据不同观测时间点进行亚组分析.结果 经筛选共纳入7个随机对照试验,合计535例患者.荟萃分析结果显示,在治疗结束和随访结束时,联合治疗组的HBVDNA转阴率高于单药组[54.9%比36.3%,比值比（OR）=2.39,95%可信区间（CI）为1.64～3.49,P＜0.01 ; 58.6%比30.7%,OR=3.68,95%CI为2.51～5.41,P＜0.01],ALT复常率高于单药组（74.5%比60.9%,OR=1.94,95% CI为1.26～3.00,P＜0.01 ;74.0%比55.6%,OR=2.36,95% CI为1.54～3.62,P＜0.01）,HBeAg转阴率高于单药组（56.9%比36.7%,OR=2.38,95% CI为1.61～3.51,P＜0.01 ; 62.2%比33.2%,OR=3.42,95% CI为2.31～5.06,P＜0.01）,HBeAg血清转换率高于单药组（40.1%比29.0%,OR=1.65,95% CI为1.10～2.47,P＜0.05; 47.0%比29.5%,OR=2.13,95% CI为1.43～3.16,P＜0.01）; HBsAg转阴率仅在随访结束时高于单药组（9.8%比3.7%,OR=2.92,95% CI为1.09～7.76,P＜0.05）.结论 干扰素联合胸腺肽α1对于HBeAg阳性慢性乙型肝炎的抗病毒疗效优于干扰素单药治疗,且不良反应无明显增加.

胸腺肽α1治疗肾移植术后巨细胞病毒肺炎患者的临床观察

目的探讨胸腺肽α1(商品名日达仙)对肾移植术后并发巨细胞病毒(CMV)肺炎患者的治疗作用。方法根据CMV感染后是否使用日达仙将CMV肺炎患者分为两组:观察组(22例)和对照组(14例)。两组患者均采用同样的免疫抑制剂调整方案,针对性抗病毒、细菌或抗真菌和支持治疗。在此基础上,观察组加用日达仙治疗(日达仙1.6 mg,皮下注射,隔日1次或每天1次)。根据外周血白细胞计数及其分类和CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞水平调整其用量及次数。比较两组患者抢救成功率、病死率和移植肾有无急性排斥反应发生,以及外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、T细胞亚群的变化。结果观察组的抢救成功率明显高于对照组,分别为77.3%和50.0%;病死率显著下降,分别为22.7%和50.0%。日达仙治疗后患者临床症状明显改善,外周血白细胞、淋巴细胞及CD4^+、CD8^+淋巴细胞计数和CD4^+/CD8^+细胞比值均有增高。结论肾移植术后合并CMV肺炎患者加用日达仙、撤停主要免疫抑制剂可提高CMV肺炎并发急性呼吸窘迫综合征的抢救成功率,降低其病死率。这可能与日达仙调节T淋巴细胞数量和功能,提高机体细胞免疫功能,增强抗感染能力有关。随着病情的好转,机体免疫功能不断恢复和重建,应注意适时加用免疫抑制剂,谨防急性排斥反应的发生。

胸腺肽a1对小鼠新生期感染所致学习记忆障碍的影响

目的探讨胸腺肽a1对新生小鼠持续感染所致学习记忆障碍的影响及其相关机制。方法（1）新生C57BL／6小鼠24只按随机数字表法分为生理盐水组、0-3mg／kg脂多糖（LPS）剂量组、0．6mg/kgLPS剂量组、0．9mg／kgLPS剂量组，分别连续5d注射等量生理盐水和不同剂量LPS。观察各组小鼠体质量、相对肝重变化及血清、脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量，以确定模拟临床新生儿感染的LPS剂量。（2）取60只新生小鼠按随机数字表分为3组：对照组、LPS组、胸腺肽a1处理组，分别连续5d注射等量生理盐水、LPS（0．6mg／kg）和胸腺肽a1（0．4mg／kg）＋LPS（0．6mg／kg）。在4周和8周时，采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的学习记忆能力，采用ELISA法检测海马组织TNF-α、白介素-1β（IL-1β）、脑源性神经营养因子（BDNF）和神经生长因子（NGF）含量，采用Western blotting检测海马组织Toll样受体4（TLR4）和核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达水平。结果（1）与生理盐水组相比，0．6mg／kgLPS剂量组小鼠生长缓慢[（2．23±0．22）g vs （1．18±0．21）g]、相对肝重增加（0．052±0．004 vs 0．072±0．007）、血清及脑组织TNF-α含量[（62．01±3．32）pg／mL vs（151．06±14．51）pg／mL；（186．03±13．24）pg／mL vs（298．71±41．61）pg／mL]明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）与LPS组相比，胸腺肽a1处理组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期明显缩短，空间探索实验中目标象限停留时间明显延长，海马组织TNF-α、IL．1B、TLR4、NF-κB蛋白表达明显降低[（73．32±5．18）pg／mL vs（58．61±4．03）pg／mL；（99．15±8．30）pg／mL vs（75．56±6．13）pg／mL；2．32±0．29 vs 1．71±0．26；1．77±0．24 vs 1．26±0．141，BDNF、NGF蛋白表达明显增高[（1．33±0．12）pg／mL／）8（1．69±0．25）pg／mL；（41．45±3．47）pg／mL vs（50．38±5．02）pg／mL]，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论胸腺肽a1可以改善小鼠新生期感染导致的学习记忆障碍和神经炎症，其途径是通过抑制TLR4／NF-κB信号通路传导和提高神经营养因子水平。