大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少(P<0.05),2 d达到最低;CBD干预1 d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调(P<0.05);免疫荧光染色实验与Western blot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少(P<0.05),CBD干预2 d后Occludin和ZO-1表达水平上调(P<0.05);荧光素钠实验结果表明,TBI后脑组织BBB完整性遭到破坏,通透性升高(P<0.01),CBD干预后BBB通透性下降(P<0.05)。结论TBI后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达下降,BBB通透性升高,CBD干预可逆转TBI对BBB的破坏。

Occludin基因在猪肠道屏障中的研究进展

紧密连接蛋白与肠道疾病密切相关,由Occludin基因编码的蛋白质是紧密连接蛋白中具有代表性的蛋白之一,在维持肠道屏障功能完整中发挥重要作用。在猪肠道中,Occludin基因表达的下降会导致细胞膜通透性增加,使肠道屏障功能受损,从而引发多种肠道疾病。文章综述了肠道屏障的构成、紧密连接蛋白的分类及Occludin基因编码蛋白质的结构和生物学功能,介绍了Occludin基因在猪肠道中的表达情况和营养调控的研究进展,为预防猪腹泻、肠道炎症等疾病提供参考。

暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降

目的:研究暴发性肝衰竭小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化.方法:BALB/c小鼠150只随机分为生理盐水对照组(n=30)、内毒素(LPS)对照组(n=30)、D-氨基半乳糖(D-GalN)对照组(n=30)和暴发性肝衰竭(LPS+GalN)组(n=60).采用D-GalN和LPS联合ip制备暴发性肝衰竭小鼠动物模型.应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中,小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位、表达及mRNA的变化.结果:occludin蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在暴发性肝衰竭组小鼠,6h时occludin的阳性染色开始减少,9h时更为明显.Westernblot结果与免疫组织化学结果相一致,6h时开始下降(0.48±0.07),9h达到最低值(0.36±0.05),与生理盐水对照组(0.71±0.09)相比差异显著(P<0.05).实时定量PCR结果显示,暴发性肝衰竭小鼠2h时occludinmRNA即开始下降(0.85±0.12),6h时达到最低值(0.72±0.04),与生理盐水对照组(1.00±0.05)相比有明显差异(P<0.05),9h时有所恢复(0.93±0.10).结论:在暴发性肝衰竭过程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降,其mRNA也呈下调趋势.

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

NO体外对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响,以研究NO对肠黏膜屏障的作用机制.方法:将NO的供体Sin1与肠上皮细胞株Caco-2共培养24 h,采用MTT方法观察NO对肠上皮细胞的作用,并分别提取细胞蛋白和总RNA,采用免疫蛋白印迹(Westem blot)蛋白半定量方法和实时定量聚合酶链式反应(RO-PCR)方法检测不同NO浓度对Caco-2细胞表达紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达的影响.结果:随着Sin1浓度升高(125,250,500和1000μmol/L)NO对细胞的杀伤作用产生并逐渐增大,Occludin蛋白表达量和mRNA的相对表达量与无Sin1刺激时蛋白及mRNA的表达量相比明显降低(蛋白:375±0.5,374±0.8,363±0.3.363±0.7 vs 398±0.7;mRNA:0.689±0.01,0.578±0.09,0.554±0.03,0.619±0.04 vs 1,均P<0.01).结论:NO可直接损伤肠上皮细胞,同时以剂量依赖形式在蛋白和分子水平影响紧密连接蛋白Occludin的表达.

紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组（即假手术组）,每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖（LPS）浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低（P均〈0.01）.相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关（P均〈0.05）.光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.

糖尿病大鼠脑组织紧密连接蛋白Occludin表达的变化

目的研究糖尿病大鼠脑组织紧密连接蛋白Occludin表达的变化。方法 30只雄性SD大鼠随机分为糖尿病1个月组、糖尿病3个月组及正常对照组。腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,采用逆转录PCR和Western blot法检测大鼠脑组织Occludin mRNA和蛋白的水平。结果糖尿病1个月组和3个月组大鼠脑组织Occludin mRNA水平[（0.20±0.21）,（0.06±0.02）]均较正常对照组（1.00±0.00）显著降低（均P〈0.05）,且糖尿病3个月组Occludin mRNA水平明显低于糖尿病1个月组（P〈0.05）。糖尿病1个月组和3个月组大鼠脑组织Occludin蛋白水平[（0.58±0.01）,（0.29±0.01）]比正常对照组（1.02±0.06）显著降低（P〈0.05~0.01）,且糖尿病3个月组Occludin蛋白水平明显低于糖尿病1个月组（P〈0.05）。结论糖尿病大鼠脑组织Occludin表达明显降低,并随着病程延长其降低更明显;提示糖尿病使血-脑屏障受到损害。

慢病毒介导Occludin过表达影响BVDV感染BALB/c小鼠的研究

为研究紧密连接蛋白(occludin,OCLN)是否影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)在BALB/c小鼠体内的复制。构建慢病毒表达载体pLVML-Myc-bOCLN-linker-GFP-IRES-Puro,连同辅助质粒pSPAX2和pMD2.G共同转染至HEK-293T细胞中,转染48 h后收集OCLN-GFP慢病毒悬液并测定其滴度,同时以pLVML-Myc-Mcs-linker-GFP-IRES-Puro载体包装的慢病毒作为阴性对照(GFP);将4-5周龄BALB/c小鼠随机分为A(0 d)、B(4 d)、C(8 d)、D(10 d)、E(15 d)五组,每组6只,分别注射5×10^(7)IU OCLN-GFP和GFP慢病毒悬液,连续注射两次,间隔48 h,第二次注射后96 h时以1.68×10^(5) TCID_(50)/只BVDV攻毒BALB/c小鼠,分别于攻毒后0、4、8、10、15 d时,解剖小鼠并采集肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠等组织,使用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blot检测OCLN过表达情况,qRT-PCR检测不同组织中BVDV病毒载量;制作组织病理切片观察各组织病变情况。成功包装OCLN-GFP和GFP慢病毒;慢病毒感染BALB/c小鼠96 h后,OCLN-GFP慢病毒感染后OCLN mRNA和蛋白表达水平显著增加;与GFP慢病毒感染的对照组相比,OCLN-GFP慢病毒感染实验组各组织脏器中BVDV病毒载量从攻毒4 d后出现显著性增加;同时与对照组相比,BVDV攻毒后4 d,实验组小鼠肺脏及肝脏器官最早出现明显病变;BVDV攻毒8 d后,肝脏、脾脏、肺脏等器官病变程度较对照组更加严重。研究表明OCLN过表达能显著性增加BVDV在BALB/c小鼠体内的复制,BVDV感染造成的病理变化更为严重,为阐明OCLN介导BVDV复制等分子机制提供重要依据。

紧密连接蛋白Occludin表达与小鼠肠屏障功能障碍和炎性出血的关系

目的探讨紧密连接蛋白Occludin表达与小鼠肠屏障功能障碍和炎性出血的关系。方法以15只C57BL/6新生小鼠为研究对象,通过交替饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液和去离子水建立炎症性肠病模型,并根据实验设置分为对照组(正常小鼠+腹腔注射生理盐水)、模型组(模型小鼠+腹腔注射生理盐水)和Occludin转染组(模型小鼠+腹腔注射50μL Occludin过表达慢病毒载体)。注射1周后通过蛋白印迹分析各实验组小鼠体内紧密连接蛋白Occludin的表达。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒分析提取组织中促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的水平。通过异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)方法和血液中脂多糖(LPS)的浓度评估小鼠的肠屏障功能。通过免疫组织化学对小鼠肠组织进行评分。通过比较小鼠结肠长度与体重比评估结肠发育。通过逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)实时分析凋蛋白p53、Bax和Bcl-2的mRNA表达。结果模型组较对照组中Occludin的蛋白表达降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组Occludin的蛋白表达升高(P<0.05)。模型组较对照组中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组TNF-α、IL-6和IL-1β的水平降低(P<0.05)。模型组较对照组中FITC-D和LPS升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组FITC-D和LPS降低(P<0.05)。模型组较对照组中组织学评分和粪便出血评分升高(P<0.05),Occludin转染组较模型组相应评分降低(P<0.05)。模型组较对照组结肠长度与体重之比值降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组比值升高(P<0.05)。模型组较对照组p53、Bax的mRNA表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05),Occludin转染组较模型组Bax的mRNA表达降低,Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论紧密连接蛋白Occludin的过表达减轻了DSS引起的小鼠肠黏膜损伤,促进体内肠道形态和肠屏障完整性的更新。

miR-122a对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响

目的探讨miR-122a对脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响。方法 SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(S组)、对照组(C组)、miR-122a反义寡核苷酸(miR-122a antagomir)组(M组)。S组开胸游离主动脉弓,但不阻断;C组和M组开胸阻断主动脉弓14 min造成脊髓缺血/再灌注损伤。M组和C组脊髓缺血/再灌注损伤后,鞘内注射miR-122a antagomir或空白对照,每日1次,共3次。Real-time PCR测定损伤节段脊髓组织的miR-122a表达,Western blot测定脊髓组织中紧密连接蛋白occludin表达,伊文思蓝测定血-脊髓屏障通透性,Basso Beattie Bresnahan评分法评价神经运动功能。结果与S组比较,C组miR-122a表达增加,occludin表达减少,血-脊髓屏障通透性增加,神经运动功能评分降低(P<0.05)。与C组比较,M组miR-122a表达降低,occludin表达增加,血-脊髓屏障通透性降低,神经运动功能评分增加(P<0.05)。结论 miR-122a参与调控脊髓缺血/再灌注损伤后occludin表达,影响血-脊髓屏障通透性。

闭合蛋白:结构、功能及其相关调节机制

闭合蛋白(occludin)是紧密连接蛋白中重要的组成蛋白之一,具有维持上皮细胞极性、调节细胞之间的黏附性、接受并传递细胞信号等生物学功能。本文对occludin的结构、功能及其相关调节机制进行了综述,并且指出occludin在疾病治疗和动物营养中的应用前景。

清胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接的保护作用

目的:探讨清胰颗粒对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮紧密连接的保护作用。方法:24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、SAP组和清胰颗粒组。采用3.5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射制备SAP大鼠模型,清胰颗粒组于造模前2 h、造模后6 h和18 h分别给予清胰颗粒灌胃,SAP组以同样的方法给予安慰剂。各组分别于造模后24 h取末端回肠,HE染色,光镜下观察病理组织学改变,采用Chiu’小肠组织损伤评价标准对肠黏膜损伤进行评价,应用Western blot和实时荧光定量PCR法检测回肠黏膜上皮紧密连接蛋白(Occludin)表达。结果:与假手术组相比,SAP组大鼠Chiu’小肠组织损伤评分(4.6±0.6)vs(0.0±0.0)明显升高,与SAP组相比,清胰颗粒组Chiu’小肠组织损伤评分(2.0±0.4)vs(4.6±0.6)明显降低;Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组相比SAP组大鼠Occludin蛋白表达(1.2±0.4)vs(3.2±0.4)和m RNA表达(1.3±0.3)vs(2.9±0.5)明显降低(P<0.05);与SAP组相比,清胰颗粒组Occludin蛋白表达(4.1±0.4)vs(1.2±0.4)和m RNA表达(4.2±0.3)vs(1.3±0.3)明显升高(P<0.05)。结论:清胰颗粒能减轻SAP大鼠肠黏膜损伤程度,这一作用可能与增强肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达有关。

血脑屏障分子组成研究进展

血脑屏障(BBB)是维持脑内环境稳定和避免有害物质入侵脑组织所必须的膜性结构。脑微血管内皮细胞之间的紧密连接是BBB的结构基础,是保持BBB完整性的重要因素。紧密连接结构是由胞浆黏附蛋白、claudin、occludin、连接黏附分子和tricellulin共同组成的。外伤、缺血、缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起紧密连接结构及功能发生改变,造成BBB损害,导致BBB的通透性升高,进而引起脑水肿。本文拟对血脑屏障的分子组成研究进展进行综述。

腺苷酸活化蛋白激酶在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤机制中的作用

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)在重症急性胰腺炎SD大鼠肠道紧密连接损伤中的作用。方法给予SD大鼠腹腔注射不同剂量的20%L-精氨酸溶液,分别制备大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)及轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)模型,通过检测血清淀粉酶水平、胰腺病理改变以证实胰腺炎模型构建成功。对SAP大鼠分别给予AMPK抑制剂Compound C和谷氨酰胺灌胃处理,小肠组织切片染色观察大鼠小肠组织损伤情况;FITC-Dextran通透实验检测肠道通透性;免疫组化和Western blot方法分别检测肠黏膜细胞αSNAP、AMPK和紧密连接蛋白occludin的表达情况。结果病理切片证实胰腺炎模型构建成功,并且抑制AMPK后明显降低重症急性胰腺炎的病理损伤;SAP大鼠肠黏膜损伤明显,而加入AMPK抑制剂Compound C或肠黏膜保护剂谷氨酰胺可明显抑制SAP大鼠肠黏膜损伤;SAP组建模48 h(410.25±7.80)的肠道通透性相对于对照组(0.51±0.61)显著增强(P<0.05),而加入AMPK抑制剂Compound C 48 h的Com组(372.95±9.33)或肠黏膜保护剂谷氨酰胺的Gln组(367.93±18.90)(P<0.05),可明显降低SAP大鼠肠道通透性;重症急性胰腺炎时,αSNAP表达下调(P<0.05),而AMPK表达明显增强(P<0.05),加入AMPK抑制剂可以明显上调occludin的表达(P<0.01),提示AMPK对occludin蛋白存在负性调控。结论 AMPK信号在大鼠重症急性胰腺炎肠黏膜损伤中过度活化,可通过负性调控occludin蛋白的表达导致肠黏膜损伤,从而促进肠黏膜通透性增强。

麝香配伍乳香对大鼠前列腺上皮细胞紧密连接结构相关蛋白表达的影响

目的:探讨麝香-乳香配伍处理对正常及慢性前列腺炎模型大鼠前列腺上皮细胞紧密连接结构相关蛋白表达的影响。方法:80只雄性SD大鼠随机分为8组:正常空白对照组、正常麝香-乳香组、正常麝香组、正常乳香组、模型空白组、模型麝香-乳香组、模型麝香组、模型乳香组。制备慢性前列腺炎大鼠模型,造模60 d时根据组别分别给予麝香0.021 g/(kg·d)、乳香1.05 g/(kg·d)剂量灌胃,麝香-乳香组给予联合剂量,空白组给予生理盐水灌胃。各组别连续灌胃3 d,处死大鼠,取前列腺组织,固定后以免疫组化法检测大鼠前列腺上皮屏障紧密连接功能相关蛋白紧密连接蛋白1、紧密连接蛋白3、闭锁蛋白、胞质附着蛋白1(ZO-1)的表达情况。结果:在病理状态下,仅紧密连接蛋白1的表达增高有统计学意义。麝香、乳香处理后,在生理/病理状态下对4种蛋白的调节作用不同:生理状态下,单用麝香(824.6±393.3)、乳香(982.0±334.0)或配伍处理(1 088.1±640.2)均可大幅度增高紧密连接蛋白1的表达(P<0.05,P<0.01);对于紧密连接蛋白3,单用乳香表达上调(1 009.5±243.6,P<0.05),单用麝香(597.5±80.7)差异无统计学意义,配伍麝香(678.4±255.1)可降低乳香上调表达作用;单用麝香(693.0±424.8)、乳香(732.1±302.0)或配伍处理(560.2±202.3)对闭锁蛋白表达影响差异无统计学意义;单用麝香(290.0±166.8)、乳香(419.7±108.1)对ZO-1表达影响差异无统计学意义,配伍处理后表达明显下调(197.7±98.2,P<0.05)。慢性前列腺炎病理状态下,大鼠前列腺组织紧密连接蛋白1(823.0±100.1)、闭锁蛋白(1 160.0±32.2)表达显著增高(P<0.01,P<0.05);单用麝香(764.9±179.0)、乳香(468.4±220.4)或配伍(335.1±204.0)使用可下调紧密连接蛋白1表达(P<0.05);单用麝香(700.1±223.7)或乳香(744.6±94.5)可上调紧密连接蛋白3表达(P<0.05);单用麝香(749.6±321.7)、乳香(615.0±221.0)或配伍处理(505.8±523.7)均可下调闭锁蛋白表达;单用乳香可上调ZO-1表达(443.2±144.9),与麝香配伍处理后表达下调(213.5±24.9),与单用乳香组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:麝香、乳香对生理/病理状态下前列腺上皮屏障结构紧密连接相关蛋白的调节作用具有选择性和双向性,主要通过ZO-1蛋白的下调实现促通透性作用,而通过调节紧密连接蛋白1、紧密连接蛋白3、闭锁蛋白表达以维持结构稳定性。

添加谷氨酰胺的肠内营养对急性重症胰腺炎大鼠肠上皮细胞间紧密结合蛋白的影响

目的探讨早期肠内营养中应用谷氨酰胺(glutine,Gln)对急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠上皮细胞间紧密结合蛋白的作用。方法:雄性SD大鼠89只,随机分成对照组,SAP+PN(肠外营养)组,SAP+EN(肠内营养)组,SAP+EN+Gln,各组又分为4 d喂养组和7 d喂养组。分别在第4 d、第7 d剖杀大鼠检测各组各项指标。免疫组化法检测小肠组织中occludin蛋白的表达。结果:(1)空肠黏膜蛋白质含量测定:各EN组粘膜蛋白质含量显著高于PN组(p<0.01),EN+Gln组的4 d、7 d分别高于EN组的4 d、7 d(p<0.01)。(2)小肠粘膜occludin蛋白表达及含量测定:PN7 d、4 d组的平均灰度值均显著高于EN、EN+Gln组(p<0.01),EN4 d、7 d组平均灰度均显著高于EN+Gln组(p<0.05)。结论:肠内营养中应用谷氨酰胺能更有效增加occludin蛋白表达,改善肠上皮紧密连接,维护肠上皮屏障完整性。

肠紧密连接蛋白与肠道屏障功能

肠道黏膜屏障在身体内部与外部环境的分离中起重要作用。咬合蛋白、闭合蛋白以及闭合小环蛋白是组成肠紧密连接的主要蛋白,它们在肠黏膜上皮细胞侧膜表面的顶端形成了肠道屏障功能的结构基础。肠紧密连接蛋白是肠道屏障功能的重要组成部分,在肠道相关疾病、外科手术操作、失血性休克等破坏因素下,肠紧密连接蛋白的完整性受损,从而导致肠道屏障功能受损。此外,肠紧密连接蛋白的表达可受多种因素(如细胞因子、右美托咪定、维生素D、谷氨酰胺以及其他多种物质)的调节。因此,未来应对肠紧密连接蛋白对肠道屏障功能调节作用的具体信号通路机制进行深入研究。

艾灸神阙穴对溃疡性结肠炎小鼠血清促炎性因子及肠黏膜紧密连接蛋白的影响

目的观察艾灸神阙穴对DSS诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的疗效,探讨艾灸神阙穴对UC小鼠炎性反应及肠黏膜屏障的影响。方法以32只雄性ICR小鼠为研究对象,随机选取8只作为空白对照组,其余24只通过自由饮用3.5%DSS溶液8 d制成UC模型,造模成功后再随机分为模型组、艾灸组和阳性药物组,每组8只。持续干预8 d:艾灸组小鼠每日抓取放入固定器固定,艾灸神阙穴20 min,每日1次;空白对照组和模型组每日进行同艾灸组同样的抓取固定,但不进行其他操作,每日1次;阳性药物组小鼠按0.4 g/kg体质量灌服美沙拉嗪溶液,每日1次。干预结束后取小鼠血清用ELISA法检测促炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,取小鼠结肠组织用Western blotting法检测紧密连接蛋白1(ZO-1)、Occludin蛋白表达水平,采用HE染色法观察结肠组织病理切片,通过疾病活动指数评分(DAI)观测UC小鼠的恢复情况。结果与空白对照组相比,UC模型小鼠体质量减轻,大便稀软并带有脓血便,模型组小鼠DAI评分显著升高(P<0.05),病理组织切片显示结肠黏膜组织严重损伤,有明显炎性反应,促炎性因子IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,艾灸组与阳性药物组小鼠结肠组织病理损伤有显著改善,炎性反应下调,DAI评分显著降低(P<0.05),血清中IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05),结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均显著升高(P<0.01)。结论艾灸神阙穴能有效缓解UC症状,升高结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,改善结肠组织损伤,降低UC小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α含量,对UC小鼠有治疗作用;提示艾灸对UC的起效机制可能与肠上皮黏膜屏障有关。

千金消澼液对肠黏膜上皮屏障紧密连接蛋白的影响

目的观察千金消澼液(QXJP)对体外肠上皮炎症损伤模型中紧密连接蛋白(TJ)的影响,探讨其对肠上皮炎症损伤的保护机理。方法利用CCK-8法确定QXJP等药物对于Caco-2细胞的适宜给药浓度;后以脂多糖(LPS)刺激Caco-2细胞制备体外肠上皮炎症损伤模型,分为NC组、LPS组、柳氮磺吡啶(SASP)组和QXJP 1.0、2.5、5.0 mg·mL^(-1)组,预保护给予相应的药物后,以Western Blot法检测Zo-1、Occludin、Claudin-1的表达水平。结果与NC组比较,LPS组Zo-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著降低(均P<0.05),证明建模成功。与SASP组比较,QJXP 2.5 mg·mL^(-1)组Zo-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平无显著差异(P>0.05);QJXP 1.0、5.0 mg·mL^(-1)组Zo-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论QXJP 2.5 mg·mL^(-1)能通过提高Zo-1、Occludin、Claudin-1含量进而保护肠黏膜上皮屏障,从而达到治疗UC的目的。

高渗盐水对心搏骤停后脑复苏大鼠血脑屏障的作用研究

目的观察高渗盐水对心搏骤停后脑复苏大鼠血脑屏障的作用。方法将72只SD大鼠随机分为正常对照组(S组)、模型组(MS组)、高渗盐水(3%氯化钠溶液)静脉注射组(HS组)、0.9%氯化钠注射液静脉注射组(NS组),各18只。MS组、NS组和HS组均采用改良窒息心搏骤停法建立急性脑缺血模型,并进行心肺复苏操作。S组和MS组大鼠不干预;HS组输注高渗盐水(3%氯化钠溶液,4 ml/kg),NS组输注同等剂量0.9%氯化钠注射液,均持续输注8 min。观察缺血再灌注6和24 h时各组脑组织血脑屏障渗漏情况、脑含水率(BWC)及闭合蛋白(occludin)、密封蛋白-5(claudin-5)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)蛋白和mRNA表达情况。结果脑缺血再灌注6、24 h时血脑屏障渗漏情况及BWC,MS组、HS组和NS组较S组严重或增加,HS组和NS组较MS组减轻或降低,HS组较NS组减轻或降低(P<0.05);且脑缺血再灌注24 h时血脑屏障渗漏及BWC降低程度轻于或低于6 h时(P<0.01)。与S组比较,MS组、HS组和NS组脑缺血再灌注6、24 h时脑组织occludin、ZO-1蛋白及mRNA表达下调,而claudin-5蛋白及mRNA表达上调(P<0.05);与MS组比较,HS组和NS组脑组织occludin、ZO-1蛋白及mRNA表达上调,claudin-5蛋白及mRNA表达下调(P<0.05);与NS组比较,HS组脑组织occludin、ZO-1蛋白及mRNA表达上调,claudin-5蛋白及mRNA表达下调(P<0.05);且随着再灌注时间的延长,脑组织occludin、ZO-1和claudin-5 mRNA表达下调程度增加(P<0.05)。结论高渗盐水可明显改善心搏骤停后脑复苏大鼠脑水肿,作用机制可能与修复血脑屏障功能有关。