目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,...目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM-3基因基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为103-107拷贝。阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性相关系数分别为1.00和1.00,扩增效率分别为1.070和1.023,批内及批间变异系数<5%。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。结论我们成功建立检测人TIM-1和TIM-3的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究人TIM-1和TIM-3功能奠定基础。展开更多
目的:观察百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响。方法:采用随机数字表法将80例糖尿病肾病患者分成观察组和对照组。对照组予达格列净治疗,观察组同时联合百令胶囊治疗。经连续治疗3个月...目的:观察百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响。方法:采用随机数字表法将80例糖尿病肾病患者分成观察组和对照组。对照组予达格列净治疗,观察组同时联合百令胶囊治疗。经连续治疗3个月,比较两组治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾功能指标[肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白]、NLRP3炎性小体、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA、炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]水平变化,统计两组治疗总有效率,评价治疗安全性。结果:治疗后,两组FPG、2 h PG、HbA1c水平,Scr、eGFR、24 h尿微量白蛋白水平,Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体表达水平,TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平均明显低于治疗前(P<0.05),且观察组治疗以上指标水平均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率为92.5%,优于对照组(75.0%)(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效显著,能够有效控制血糖水平,减少24 h尿蛋白,改善患者肾功能,治疗机制可能与抑制炎症反应、降低NLRP3炎症小体水平有关。展开更多
文摘目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM-3基因基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为103-107拷贝。阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性相关系数分别为1.00和1.00,扩增效率分别为1.070和1.023,批内及批间变异系数<5%。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。结论我们成功建立检测人TIM-1和TIM-3的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究人TIM-1和TIM-3功能奠定基础。
文摘目的:观察百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响。方法:采用随机数字表法将80例糖尿病肾病患者分成观察组和对照组。对照组予达格列净治疗,观察组同时联合百令胶囊治疗。经连续治疗3个月,比较两组治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾功能指标[肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白]、NLRP3炎性小体、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA、炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]水平变化,统计两组治疗总有效率,评价治疗安全性。结果:治疗后,两组FPG、2 h PG、HbA1c水平,Scr、eGFR、24 h尿微量白蛋白水平,Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体表达水平,TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平均明显低于治疗前(P<0.05),且观察组治疗以上指标水平均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率为92.5%,优于对照组(75.0%)(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效显著,能够有效控制血糖水平,减少24 h尿蛋白,改善患者肾功能,治疗机制可能与抑制炎症反应、降低NLRP3炎症小体水平有关。