Vimentin,CTGF和AQP5在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞恶性转化模型中的表达

目的观察波形蛋白(Vimentin)、结缔组织生长因子(conective tissue growth factor,CTGF)和水通道蛋白5(Aquaporin5,AQP5)在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)恶性转化模型中的表达.方法以永生化ATⅡ(RLE-6TN细胞株)为实验对象,分为高剂量染毒组、低剂量染毒组和空白对照组.高、低剂量染毒组分别使用终浓度为200、50 mg/L的烟尘悬浊液在第1、3、5、7、9代对细胞染毒,同代对照组不加烟尘悬浊液同步培养.从第10代起,高、低剂量染毒组常规传代直至软琼脂克隆形成检测实验呈阳性.采用透射电镜观察细胞超微结构,以免疫印迹法及免疫组织化学法观察各组细胞肺表面活性蛋白SP(-B)、SP-C、波形蛋白(Vimentin)、结缔组织生长因子(CTGF)、水通道蛋白5(AQP5)表达.结果从形态改变、软琼脂克隆形成实验及肺泡表面活性蛋白(SP)-B、SP-C的表达上发现经烟尘诱导,RLE-6TN细胞超微结构会发生改变,且高、低剂量染毒组克隆形成率与染毒培养代数相关性有统计学意义(P<0.01),但与烟尘染毒水平相关性无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学显示高、低剂量染毒组第30代细胞CTGF阳性、SP-B阴性,空白对照组CTGF阴性、SP-B阳性.Western blot示高、低剂量染毒组第25、30、35代细胞及空白对照组Vimentin和AQP5均为阴性.结论云锡炼厂烟尘导致ATⅡ恶性转化模型中CTGF表达阳性,但Vimintin及AQP5的表达呈阴性.

云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化

背景与目的研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制。材料与方法采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72h后,隔代染毒直至第9代。系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征。结果第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆。结论云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化。

云南个旧锡矿山地质环境模型

文章以重金属元素为研究对象,在系统野外采样与分析工作的基础上,给出了云南个旧锡矿山的地质环境模型。影响环境的因素有:个旧原生矿床富含多金属硫化物,氧化后易生成酸;碳酸盐可以消耗硫化物氧化所产生的酸并可防止金属的迁移。矿山开发之前由矿床向环境释放的元素重量,Cu为1.21万吨、Pb为7.0万吨、Cd为101.91吨、As为1.2万吨、Sn为2.33万吨。总体上个旧矿区水的环境质量较好。土壤环境则受矿山采-选-冶活动的影响,在卡房、牛屎坡、云锡二冶等地重金属元素严重超标,比对照区和国家三级土壤标准高出许多倍,云锡集团冶炼厂的烟囱排尘为重金属的重要污染源之一。牛坝荒尾砂库复垦之后,显示下伏尾砂对上覆的土壤有一定的影响。

云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化和成纤维细胞活化过程中的相互作用

目的探讨云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化及成纤维细胞活化过程中的相互作用。方法常规培养永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）及人胚肺成纤维细胞（WI-38），每6天传代1次；100μg／ml的云锡矿粉隔代诱导BEAS-2B及WI-38至第9代，共诱导5次，自第11代分组共培养至第40代。刀豆凝集素A及锚着独立性生长实验检测细胞恶性转化，流式细胞术检测细胞周期变化，免疫细胞化学法检测成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达。结果（1）与正常BEAS-2B细胞相比，矿粉诱导的BEAS-2B细胞单独培养至第28代细胞形态开始出现改变；与WI-38细胞共培养后，细胞形态改变提早至第20代；与矿粉诱导的WI-38细胞共培养后，细胞形态改变进一步提早至第16代。矿粉诱导的BEAS-2B细胞培养至第26代时凝集实验出现阳性；与WI-38细胞及矿粉诱导的WI-38细胞共培养后，细胞凝集时间缩短。与WI-38细胞共培养的矿粉诱导BEAS-2B及与矿粉诱导WI-38细胞共培养的矿粉诱导的BEAS-2B细胞分别在第26及第36代锚着独立性生长实验出现阳性，第36代的克隆形成率分别为6．00‰±1．00‰和15．33‰±2．52‰，且差异有统计学意义（P〈0．05）。矿粉诱导的各组上皮细胞S期细胞所占比例随培养代数增加逐渐升高，细胞发生恶性转化。（2）100μg/ml矿粉诱导的成纤维细胞培养至第26代出现α—SMA表达；与上皮细胞共培养后，成纤维细胞α-SMA表达增强，且随培养代数的增加，阳性表达细胞数明显增多，着色程度增强。结论个旧矿粉能诱导支气管上皮细胞恶性转化及成纤维细胞活化；肺上皮细胞是矿粉诱癌的主要靶细胞；肺上皮细胞的转化和成纤维细胞的活化相互影响，相互促进。

云南锡矿井下矿工肺癌高发的职业性病因

云南锡矿(简称云锡)井下矿工肺癌发病率为336.274/10万,比本矿区对照组高25倍,并有明显的职业性特征。研究证实,不仅云锡矿工肺癌高发,湖南香花岭锡矿矿工亦有肺癌高发现象。高发的职业性病因是由于长期吸入高浓度混合矿尘所致。入肺矿尘中的As、cr、Ni、Be、Ti、Fe、Pb、Co以及白云母、滑石等化合物的混合作用可能是致肺癌高发的主要因素。自60年代以后,由于云锡矿井下作业环境空气中粉尘浓度明显下降,60年代进矿矿工肺癌发病率已降到一般发病水平,现已无高发现象。研究认为,如能将井下作业环境空气中粉尘浓度降至5mg/m^3以下,即能有效地防止肺癌高发。

云锡矿粉离体诱导永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN恶性转化

目的建立本实验云锡矿粉(无氡)诱导永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN恶性转化模型,观察在诱导过程中不同阶段的细胞形态、超微结构和某些相关蛋白改变。方法高、低2个剂量(200和50 mg/L)矿粉对RLE-6TN细胞进行72 h染毒,隔代染毒至第10代,常规传代直至软琼脂克隆形成实验阳性;通过透射电镜、流式细胞术、免疫印迹技术及免疫细胞化学观察实验细胞的改变。结果染毒24 h细胞内见大量矿粉,板层小体变性减少,出现细胞凋亡;第25代高剂量组及第30代高低剂量组的细胞均可在软琼脂上形成细胞集落,空白对照组克隆形成实验阴性(P<0.01);第30代高剂量组细胞增殖指数(PI)高于空白对照组;高剂量组转化细胞p53(+)、MDM2(+)、FHIT(-);空白对照组p53(-)、MDM2(+)、FHIT(+)。结论云锡矿粉可引起离体培养的RLE-6TN细胞发生恶性转化。p53阳性表达及FHIT失表达可作为RLE-6TN细胞转化的参考指标。

烟尘慢性染毒致肺泡Ⅱ型上皮细胞恶性转化离体实验研究

目的建立模仿肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)暴露于云锡炼厂烟尘环境的离体研究模型。方法以永生化ATⅡ(RLE-6TN细胞株)为实验对象,分为高、低剂量染毒组和空白对照组。前2组分别使用终浓度为200、50 mg/L的烟尘悬浊液在第1、3、5、7、9代对细胞染毒,同代对照组不加烟尘悬浊液同步培养。从第10代起,高、低剂量染毒组常规传代直至软琼脂克隆形成检测实验呈阳性。采用透视电镜观察细胞超微结构,流式细胞术观察细胞周期,免疫印迹法及免疫组织化学观察各组细胞肺表面活性蛋白(SP)-B、SP-C、鼠双微体2(MDM2)蛋白、脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的改变。结果染毒24 h后即可观察到烟尘对RLE-6TN细胞超微结构造成损伤,主要表现为板层小体变性且数量减少,以及细胞凋亡和坏死;转化后的细胞由圆形或类圆形铺路石样生长变为长梭形。高、低剂量染毒组细胞培养至25代时软琼脂克隆形成检测实验均呈阳性,克隆形成率分别为3.33‰和1.67‰;继续培养至35代观察高、低剂量染毒组克隆形成率分别为12.50‰和10.00‰,空白对照组始终没有克隆形成。高、低剂量染毒组克隆形成率与染毒培养代数相关性有统计学意义(P<0.01),但与烟尘染毒剂量相关性无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测示高、低剂量染毒组G2/M期+S期的比例较空白对照组增高。高、低剂量染毒组第25、30代细胞MDM2蛋白阳性、SP-B及FHIT蛋白阴性,而空白对照组同代细胞MDM2蛋白阴性、SP-B及FHIT蛋白阳性。高、低剂量染毒组第25、30、35代细胞示SP-C失表达,空白对照组SP-C有表达。结论 ATⅡ长期暴露于云锡炼厂烟尘中可导致其恶性转化。ATⅡ特异性蛋白SP-B、SP-C、FHIT失表达,MDM2阳性表达可作为RLE-6TN细胞转化的参考指标。

绿茶抗锡矿尘诱致的大鼠肺组织脂质过氧化的实验研究

大鼠染锡矿尘后,肺组织脂质过氧化物水平和谷胱苷肽过氧化酶活性均显著高于对照组,肺组织细胞增生亦趋于活跃。锡矿尘所引起的这些反应与强致癌物3-MCA相似,绿茶能抑制此类反应。结果提示,脂质过氧化物增多可能是锡矿尘致肺损伤并诱发肺癌的机制中的一个重要环节,适当摄入绿茶作为抗氧化剂对降低锡矿工人肺癌高发可能具有重要意义。

云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响

目的研究云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响。方法选用100 mg/L的云锡矿粉处理永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及人胚肺成纤维细胞(WI-38),每次处理72 h,隔代处理直至第9代。自第11代将上述细胞分组共培养。分组如下:W组、W(B)组、W(B100)组、W100组、W100(B)组、W100(B100)组。应用免疫印迹检测第16代、26代及36代各组成纤维细胞中FAP的表达,以β-actin作为内参,结果通过Quantity One软件进行分析,FAP水平=样本FAP灰度值/同一样本β-actin灰度值。结果免疫印迹检测WI-38中无FAP表达;第16代各组WI-38均未检测到FAP表达;至第26代时,W(B)组及W(B100)组FAP仍呈阴性表达,而W100组、W100(B)组及W100(B100)组则可检测到FAP表达,但3组间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。第36代时,W100组、W100(B)组及W100(B100)组FAP表达水平较第26代增强,但W100组和W100(B)组FAP表达水平无明显差异,惟W100(B100)组FAP表达水平明显强于前2组(P<0.05);且W(B100)组也出现了FAP表达。结论云锡矿粉能诱导WI-38表达FAP,矿粉诱导的上皮细胞可提高其表达水平。

广西锡矿矿尘致矽肺的危险度评价

目的 探索锡矿矿尘的致病强度和最低无害作用水平。方法 选择广西锡矿 1 960～1 974年期间接触矿尘至少 1年的男性矿工 4 471名建立回顾性接尘队列 ,并用以同一方法建立的瓷厂接尘队列与其进行比较 ;采用SAS中的生存检验分析软件进行非参数估算 ,评价锡矿矿尘致矽肺的危险度。结果 随访到 1 994年底 ,锡矿队列工人矽肺发病 971例 (2 1 .7% ) ,其中 81 %的病例为 1 958年前接尘对象 ,累积接触总粉尘量 (CTD)与矽肺危险度明显相关 :当CTD <50mg·m- 3·年 - 1 时 ,矽肺危险度为 0 .0 1 2 ;CTD >40 0mg·m- 3·年 - 1 时 ,矽肺危险度上升到 0 .971。瓷厂接尘工人CTD >40 0mg·m- 3·年 - 1 时 ,矽肺危险度仅为 0 .369。结论 锡矿接触矿尘工人的矽肺发病与CTD明显相关 ;