苹果砧木组培苗耐盐筛选技术研究

筛选了供试苹果砧木茎尖培养继代苗耐ＮａＣｌ的临界浓度，比较了０．６％ＮａＣｌ对继代苗、生根苗生长的影响。结果表明，继代苗的受害指数、相对增殖系数、相对生物产量、游离脯氨酸含量及细胞膜透性与砧木耐盐性之间存在一定的相关性，以盐胁迫 ５０ ｄ、盐敏感砧木受害指数高于０．７、继代苗生长严重受抑制为标准，确定继代苗耐ＮａＣｌ的临界浓度为０．６％－０．８％；继代苗、生根苗之间存在耐盐相关性。

组培条件下苹果实时定量PCR内参基因的筛选

【目的】筛选在组织培养条件下苹果苗中稳定表达的内参基因。【方法】应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S r RNA,GAPDH,TUB,UBQ,ACT,EF-1α六个常用植物内参基因在苹果组培苗不同基因型、不同组织、不同继代时间的m RNA表达差异情况。供试的4个苹果基因型为‘长枝富士’‘短枝富士’‘红珍珠海棠’、砧木‘A8-11’;继代培养的不同组织为茎、叶、整株,生根培养的不同组织为根、茎、叶、整株;不同继代期间为10、20、30、40、50、60、70、80 d。【结果】经Ge Norm软件对6个内参基因的表达稳定性进行评价,ACT和EF-1α在苹果组培苗的不同组织和不同继代时间的基因表达分析中较稳定,UBQ和EF-1α在苹果组培苗不同品种中表达均稳定。【结论】组培条件下,苹果基因表达相关研究的理想内参基因为ACT、UBQ和EF-1α。

外源基因在苹果转基因植株的稳定性研究

以继代培养13年的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶(nptⅡ)基因苹果嘎拉、王林、乔纳金和富士组培苗及田间定植6～8年的转基因植株为试材,应用卡那霉素筛选和PCR扩增分析对外源基因的稳定性进行研究。结果表明,在57个苹果转基因株系组培苗中均可检测出CpTI特异基因片断;转化株系在添加50mg/L卡那霉素的培养基中生长正常。田间株系PCR检测结果表明,转入的外源CpTI基因在所测株系的叶片、花粉及大部分根系中稳定存在,有极少数株系的根系中未检测到特异表达条带。结果说明外源基因可以在转基因植株中稳定存在,但在不定根发生过程中有可能会丢失。

一种适宜苹果组培苗的DNA提取方法

结合传统的ＣＴＡＢ法及ＳＤＳ法，寻找到了适于苹果组培苗ＤＮＡ的抽提方法，为开展苹果组培苗分子生物学研究提供了条件。

VA菌根菌对苹果组培苗内源激素含量的影响

本试验以脱毒富士苹果组培苗为试材，采用盆栽法研究了VA菌根真菌对苹果植株茎叶和根系中玉米素（Z）、玉米素核苷（ZR），赤霉素（GA_3）、吲哚乙酸（IAA）、脱落酸（ABA）等五种内源激素含量的影响。结果表明，在各处理组培苗生长的各个时期，菌根化苹果植株茎叶和根系内促进生长的GA_3含量各时期均高于未接种植株，ZR，IAA含量在不同阶段有时高于对照，抑制生长的ABA含量在同一时期内稍高于对照，各处理和各时期均未测得Z的含量。

苹果叶片不定芽的高频诱导及植株再生的研究

体外建立并扩繁了苹果品种“乔纳金”、“新世界”、“王林”、“北斗”的无性系，在ＭＳ附加ＢＡ０．５～２．０ｍｇ／Ｌ、ＩＢＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ的培养基中，２个月内芽的数量可增至５倍．在ＭＳ培养基附加ＢＡ５．０ｍｇ／Ｌ、ＩＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的条件下，４个品种的叶片再生率可达９０％以上，其中以“乔纳金”最高，可达１００％．当ＴＤＺ为３ｍｇ／Ｌ，ＩＡＡ为０．５ｍｇ／Ｌ时，其再生频率明显高于ＢＡ．

生长素对乔纳金苹果试管苗生根的影响

以三倍体苹果品种乔纳金试管苗顶部茎段为试材,将其接种于添加不同生长素及其组合的MS(基本培养基)中,研究IAA、IBA、NAA 3种生长素对苹果试管苗生根的不同效应。结果表明:3种生长素均可诱导乔纳金试管苗生根,且组合处理的效应普遍优于单种激素,其中以MS+IBA 0.8mg/L+IAA 0.7mg/L为最好,其生根率达92％。

苹果试管苗生根的研究

本试验以苹果砧木M_7和栽培品种长富2、王林的无根试管苗为试材,对影响试管苗生根的一些主要因子进行了研究。结果表明:试管苗品种不同,生根效果有很大差异。M_7是一个较易生根的品种。诱导试管苗生根的生长素种类及浓度、生根培养基中糖浓度、培养温度和继代苗质量对试管苗生根率及单株生根条数均有不同程度的影响。

‘嘎啦’苹果试管苗生根培养基的筛选及SA对试管苗移栽的生理效应

苹果试管苗生根培养及移栽困难、成活率低,为筛选适宜的生根培养基及移栽的适宜外源物质,试验以继代培养的‘嘎啦’苹果茎段为材料,研究基本培养基及吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)3种生长素及水杨酸(SA)对生根及移栽成活的影响,结果表明:基本培养基、生长素种类及浓度显著影响试管苗的生根率,1/2MS显著优于MS培养基,IAA优先其他2种生长素;外源SA可以显著提高试管苗的移栽成活率,并存在浓度效应。适宜‘嘎啦’生根的培养基为1/2MS+0.2 mg/L IAA,0.8 mg/L SA处理可显著降低气孔开度、提高叶片叶绿素含量,从而显著提高移栽成活率。

苹果组培苗形成丛枝菌根的过程

以苹果N26组培苗为试验材料．以漏斗球囊霉为接种体．进行温室接种试验．经过不同时间取样、染色、压片．观察丛枝菌根的形成过程及其形态结构变化。结果表明：接种2周后就有菌丝侵入，在皮层组织的细胞内开始形成丛枝结构．4周后有胞间泡囊产生．6周后丛枝较密集．8周后有些丛枝开始消解．在皮层细胞间和细胞内形成很多泡囊．10周后开始有抱子产生。12周后孢子数量逐渐增多。丛枝菌根着生率、根内泡囊数和根上菌丝着生率随时间的延长而呈递增趋势。最初以抱子或根外菌丝为侵染体．入侵点在根尖生长点后0.5～1.0cm处的伸长区。菌丝通过入侵点进入到皮层组织细胞后。经过多次分枝形成丛枝状吸器。当丛枝衰老时．在细胞腔内的菌丝顶端形成泡囊。老感染区细胞间的菌丝顶端也可见泡囊形成。丛枝菌根主要分布在中上层10cm的土层内．其菌根的感染率和感染强度随上层加深而减少。

VA菌根菌对苹果组培苗水分吸收和利用的影响

为给VA菌根菌在生产上的应用提供依据 ,以脱毒富士苹果组培苗为试验材料 ,采用塑料盆栽控水措施 ,研究VA菌根菌对苹果组培苗水分利用的影响。结果表明 ,在 4个土壤含水量水平下 ,菌根化苹果植株制造 1g干物质的用水量均低于对照 ,节水效果为 12 5%～39 6 %。

澳洲青苹组织培养再生体系的研究(英文)

通过对澳洲青苹茎尖培养及植株再生体系中无菌培养物的建立、初代培养、继代培养、生根培养和移栽五个技术环节的研究,建立了澳洲青苹组织培养快速繁殖技术体系.结果表明: 1 BA0.3～0.6mg/L+NAA0.1～0.3mg/L的MS培养基能促进澳洲青苹茎尖生长或大量侧芽的分化,不定芽生长健壮; 2 无根幼苗在含有IBA0.6～1.0mg/L+NAA0.1mg/L的1/2MS培养基上暗培养一周后,再进行自然光培养,30d生根率可达到78%以上; 3 生根苗经50mg/LNAA浸渍1～2h后,移入蛭石∶腐殖土∶田园土=2∶1∶1的移栽基质中,保温保湿,成活率达80%以上; 4 进一步建立了自然光下生根、练苗一次完成的同步化体系,缩短了繁育时间,简化了步骤,降低了成本.此技术体系为澳洲青苹优良种苗快速繁殖提供了一条新途径.

‘Y-1’苹果矮化砧木组织培养研究

以苹果矮化砧木‘Y-1’当年生嫩枝为外植体,通过初培、继代、生根、移栽等步骤,获得‘Y-1’苹果矮化砧木组织培养大田移栽苗。

苹果试管苗不定根起源及其发育状况的研究

利用光学和扫描电子显微镜观察结果表明,经琼脂生根培养基诱导产生的长富—2苹果 (Malus pumila Mill.) 试管苗的不定根起源于维管形成层。这种不定根发育不良,根表面缺乏根毛,内部解剖构造为典型的初生结构。为避免因不定根吸收、运输能力差而影响试管苗移栽成活,宜采用通透性良好的基质进行瓶内或瓶外生根,可诱导出优质不定根。

基质及营养液对苹果矮砧组培苗移栽后生长的影响

以苹果矮化砧木SH28、SH29生根组培苗为试材,研究了不同草炭土与蛭石基质配比、草炭土处理方式及3种营养液浇灌(MS、园试配方、霍格氏配方)对移栽组培苗生长的影响。结果表明:以草炭土与蛭石1∶2或1∶1配比为移栽基质,组培苗移栽成活率较高,分别达90.77%和88.24%,显著高于草炭土与蛭石2∶1配比;同时草炭土与蛭石1∶1配比处理还可有效提高幼苗生长量。草炭土经灭菌处理后,组培苗单株叶面积及单叶片面积显著增加,苗木生长更健壮。基质中添加0.1%枯草芽孢杆菌对幼苗生长量未见显著作用。MS、霍格兰、园试3种营养液浇灌40d后,均可使移栽幼苗生长量显著大于对照,综合效果以MS营养液促苗效果最佳。

抗蒸腾剂在苹果试管苗移栽中的应用研究

研究了长富─２苹果试管苗在移栽过程中的气孔运动、蒸腾速率的变化规律及移栽后喷洒抗蒸腾剂的效应。结果表明，移栽初期试管苗对外界条件变化比较敏感，蒸腾失水最多，是加强保温措施的关键时期；移栽后立即喷洒抗蒸腾剂，能显著抑制气孔开张，降低蒸腾速率，提高移栽成活率。

苹果组培苗移栽过程中根茎叶解剖结构变化

系统全面地研究‘嘎拉’苹果组培苗移栽过程中根茎叶的解剖形态变化,为今后的组培苗移栽提供一定的理论依据和技术支持。采用石蜡切片法和扫描电镜法对苹果试管苗驯化移栽过程中根茎叶的解剖结构进行观察。随着移栽时间的延长,根的木质部和韧皮部逐渐分化,在维管柱中央形成若干排列成链的导管。茎的厚角组织细胞层数逐渐增多,细胞排列变得整齐紧密。茎的维管束逐渐形成环状条带,条带的厚度不断增加。苹果组培苗驯化移栽初期,叶片的栅栏组织发育不完全,海绵组织细胞间隙大,栅栏组织和海绵组织厚度比很低,仅为0.41。随着移栽时间的延长,叶片的栅栏组织和海绵组织分化发育逐渐完善,栅栏组织的细胞层数明显增加且细胞排列整齐紧密,海绵组织细胞间隙逐渐变小,栅栏组织和海绵组织厚度比变大。移栽3周后,栅栏组织和海绵组织厚度比为0.74。气孔的形态由移栽初期的突出于表皮细胞之上变为下陷于表皮细胞之下,气孔的开张度和气孔密度均逐渐变小。苹果组培苗移栽3周后其气孔密度下降为187个/mm^(2),这与移栽初期的气孔密度252个/mm^(2)差异显著。苹果组培苗驯化移栽过程中,苹果组培苗根茎的主要变化是维管束组织的形成和健全,叶的变化是向着光合能力的提高和防止水分过度散失的方向发展。

苹果试管苗对盐碱胁迫的生理响应特性

以长富2号和嘎啦试管苗为试验材料,采用液体培养法,将NaCl和NaHCO3溶液等体积混合,设置4个盐碱浓度(0、50、100、200mmol/L)进行胁迫处理,测定其生长量、膜透性、抗氧化酶活性及叶绿素含量等生理指标。结果表明,与未胁迫处理相比,盐碱胁迫下2个品种试管苗叶片中的脯氨酸、Na+大量积累;生长量受到抑制,根系活力和叶绿素含量均显著下降;膜透性显著升高。随着盐碱浓度的增大,2个品种试管苗的超氧化物歧化酶(SOD)均呈先降后升的趋势,50mmol/L为峰值;嘎啦的抗坏血酸过氧化物酶(APX)先上升后下降,而长富2号呈相反趋势,且盐浓度为200mmol/L时,2个品种试管苗均死亡。长富2号的生长量、根系活力、叶绿素含量均显著低于嘎啦,嘎啦的APX含量显著高于长富2号。表明嘎啦主要通过提高细胞的抗氧化能力而增加植株的抗逆性,从而更好地适应盐碱胁迫。

外源AtCBF3基因导入对苹果组培苗耐盐性的影响

本研究以转At CBF3基因苹果嘎拉组培苗为试验材料,采用不同浓度的Na Cl为胁迫因子,探讨外源基因导入对苹果组培苗耐盐性的影响。研究结果表明:转基因苹果组培苗受害指数随着盐浓度的升高而增大,生根率随Na Cl浓度的升高而降低。在4 g/L Na Cl胁迫下,随胁迫时间的延长组培苗的受害指数呈上升趋势,在胁迫8 d时,转基因株系的受害指数显著低于非转基因株系。Na Cl胁迫明显抑制苹果组培苗不定根发生,转基因株系与非转基因株系间差异不显著。Na Cl胁迫下转基因株系的相对电导率显著低于非转基因株系。研究结果说明外源At CBF3基因的导入一定程度上提高了苹果组培苗的耐盐性,然而对其不定根发生未产生显著影响。

保存多年苹果试管苗端粒酶活性具有相对稳定性

为明确苹果端粒酶特性与组培试管苗繁殖、衰老的关系,本试验选取‘金冠‘’富士’及‘嘎拉’3个苹果品种的不同继代次数、不同苗龄的试管苗叶片及不同的试管材料(试管苗叶片,茎段,愈伤组织),分别用改良TRAP法和实时荧光定量PCR法测定了端粒酶活性和端粒酶逆转录酶基因表达量。研究表明,随继代次数增加,保存多年的苹果试管苗端粒酶活性变化不显著;苹果试管苗在90 d的生长期内,不同苗龄叶片端粒酶活性呈现先升高后降低的趋势;不同试管材料端粒酶活性具有组织特异性,其中‘金冠’愈伤组织端粒酶活性最高,‘嘎拉’叶片的端粒酶活性最高。本研究中端粒酶逆转录酶基因表达量与端粒酶活性的变化规律一致。