18例AchR抗体、Titin抗体阳性重症肌无力临床特点分析

目的探讨AchR抗体、Titin抗体双阳性的重症肌无力患者的临床特点。方法回顾分析AchR抗体、Titin抗体双阳性的重症肌无力病例(A组)18例,AchR抗体阳性重症肌无力病例(B组)20例。通过患者性别、首次发病年龄、首发临床症状、合并相关抗体情况(ANA抗体、甲状腺抗体)、合并胸腺瘤、新斯的明结果、RNS电生理结果、Osserman分型方面分析。结果收集38例重症肌无力患者,男21例,女17例,年龄58.29±12.99岁,其中A组男9例,女9例,年龄60.28±9.04岁,B组男12例,女8例,年龄56.5±15.76岁。在P=0.05水平上,A、B两组组间性别、发病年龄、合并自身免疫性疾病、胸腺瘤、新斯的明试验阳性、RNS、累及肌肉、眼睑型百分比等各项临床指标无统计学意义。结论对于AchR抗体、Titin抗体阳性和单AchR抗体阳性患者来说,从性别、发病年龄、临床表现、胸腺瘤、合并自身免疫性疾病等方面分析,组间无差异,可认为titin抗体是伴随抗体。抗体检测对于重症肌无力诊治至关重要,分析临床表型、免疫学特点及治疗反应性,可以促使临床医生更好的制订更针对性的治疗方案。

重症肌无力合并胸腺病变患者血清AchR抗体、Titin抗体和RyR抗体的检测及其临床意义

目的:通过检测不同分组患者血清中乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)、连接素抗体(Titin antibodies,Titin-Ab)和兰尼碱受体抗体(Ryanodine receptor,RyR-Ab)的表达,探讨以上三种抗体在重症肌无力(myasthenia ggravis,MG)诊断和治疗中的临床意义。方法:应用ELISA法对34例MG合并胸腺病变且接受胸腺完整切除的患者,28例其他神经系统疾病的患者和30例正常健康者的血清内进行AchR抗体、Titin抗体和RyR抗体的检测,并于MG合并胸腺病变患者行胸腺切除术后1周及术后3个月时重复检测。结果:MG合并胸腺病变组患者血清内的AchR抗体、Titin抗体要明显高于其他两对照组(P<0.01),RyR抗体水平亦高于其他两组(P<0.05);伴胸腺瘤的重症肌无力(mg with thymoma,MGT)组患者的Titin抗体、RyR抗体明显高于伴胸腺增生的重症肌无力(mg with thymic hyperplasia,MGH)和伴胸腺囊肿的重症肌无力(mg with thymic cyst,MGC)组患者(P<0.01),AchR抗体对MGT组患者亦有较高的阳性率(P<0.05);胸腺切除治疗后仅MGT组患者的AchR-Ab在第一周即发生明显下降(P<0.01),RyR-Ab在术后3个月时有下降(P<0.05),而其他组MG患者的三种抗体均未发现在胸腺切除前后有何变化(P>0.05)。结论:AchR-Ab、Titin-Ab和RyR-Ab与MG的发病机制有关;三种抗体均有助于对MG患者的诊断,其中Titin-Ab和RyR-Ab可用于胸腺瘤的鉴别诊断,并可作为诊断MGT的主要客观指标;对于MGT经胸腺切除术后患者可通过检测AchR抗体观察早期病情改变,检测RyR-Ab亦可作为其中远期病情改变的客观指标,但这两项指标与患者预后恢复情况的相关性还有待于进一步研究。

重症肌无力患者血清抗Titin抗体检测的临床意义

目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者血清抗Titin抗体检测的临床意义。方法用重组体MGT-30(提纯的Titin片断)作为抗原,应用ELISA对77例MG患者(包括25例胸腺瘤患者)、58例其他神经系统疾病患者及46例健康对照者进行血清抗Titin抗体检测。结果MG、MG合并胸腺瘤和年龄超过40岁而无胸腺瘤的晚发型MG患者组中抗Titin抗体的阳性率分别为63.6%、80%和70.6%,而其他神经系统疾病组和健康对照者中抗Titin抗体阳性者较少,分别为15.5%、6.5%。MG患者组的阳性率明显高于对照组。结论血清抗Titin抗体检测可作为MG诊断的参考指标,尤其对合并胸腺瘤患者可能更具有临床意义。

重症肌无力患者血清AchR抗体和Titin抗体检测的临床意义

目的探讨重症肌无力患者血清AchR抗体和Titin抗体检测的临床意义。方法应用ELISA法分别检测18例重症肌无力合并胸腺瘤患者、23例非胸腺瘤重症肌无力患者、21例其他神经系统疾病患者以及26例健康献血者血清AchR抗体和Titin抗体水平。结果MG组血清AchR抗体、Titin抗体的阳性率均明显高于OND及HC两组(P<0.01),其中MGT组与NTMG组的阳性率比较差异有显著性(P<0.01);MG患者中全身型与眼肌型的两种抗体阳性率比较均差异有显著性(P<0.01);MGT组两种抗体具有显著相关性(P<0.05);两种抗体阳性率与性别均无关(P>0.05)。结论AchR抗体及Titin抗体检测可作为MG诊断的参考指标,尤其Titin抗体对合并胸腺瘤患者可能具有重要临床意义,与胸腺CT联合运用可显著提高重症肌无力合并胸腺瘤的诊断率。

重症肌无力患者血清titin抗体

目的探讨血清抗titin抗体对重症肌无力合并胸腺瘤诊断的临床意义。方法用ELISA法分别测定正常对照、重症肌无力、重症肌无力合并胸腺瘤患者及非重症肌无力胸腺瘤患者血清titin抗体及乙酰胆碱受体抗体,并比较其临床意义。结果与重症肌无力患者相比,重症肌无力合并胸腺瘤患者的血清titin抗体阳性率明显增高,分别为3%和94%,且titin抗体阳性的重症肌无力病情较重。非重症肌无力胸腺瘤患者血清中亦可检出titin抗体。结论titin抗体检查对于重症肌无力合并胸腺瘤的诊断及判定预后具有重要临床意义。

重症肌无力患者血清Titin抗体和RyR抗体的临床研究

目的探讨重症肌无力(MG)患者血清Titin抗体和Ryanodine受体(Ry R)抗体的临床意义。方法采用ELISA法检测61例MG患者和35例健康体验者(正常对照组)的血清Titin抗体、Ry R抗体、ACh R抗体。结果 MG组Titin抗体和Ry R抗体阳性率均显著高于对照组(均P<0.001);合并胸腺瘤MG(MGT)组患者Titin抗体阳性率明显高于未合并胸腺瘤MG(NTMG)组(P<0.01);MGT组和NTMG组患者Ry R抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05);晚发型MG患者中Titin抗体和Ry R抗体阳性率均明显高于早发型MG患者(均P<0.05);全身型或重症型(ⅡA、ⅡB、Ⅲ、Ⅳ型)Titin抗体阳性率显著高于眼肌型(Ⅰ型)(P<0.01),而两组间Ry R抗体阳性率未见统计学差异(P>0.05);MG患者Titin抗体和Ry R抗体水平与肌无力严重程度相关分析呈正相关(r=0.520、0.487,均P<0.01)。结论 Titin抗体和Ry R抗体检测有助于MG的诊断,且Titin抗体有助于鉴别MG患者是否伴随胸腺瘤及进行Osserman分型。Titin抗体与Ry R抗体水平还与MG患者病情的严重程度相关,可应用于评估MG患者的病情与预后。

Titin基因在骨髓间充质干细胞体外分化为心肌细胞过程中的干预研究

目的:探讨结构蛋白即肌联蛋白titin基因在骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化为心肌细胞过程中的作用及其对收缩蛋白基因β-肌球蛋白重链(β-myson heavy chain,β-MHC)和肌钙蛋白(ICardiac troponinI,cTnI)基因表达的影响。方法:无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞,并进行体外纯化、扩增,后加入5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)进行诱导,分别在诱导后1天、4天、7天、14天在倒置显微镜下观察其形态变化,同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人β-actin的siRNA重组质粒pSIACTIN转染入诱导后的MSCs,转染后24h,采用RT-PCR技术检测各时间点干扰前后结构蛋白titin基因和收缩蛋白β-MHC、cTnI基因在MSCs体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。结果:1.诱导前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表达,诱导后titin、β-MHC、cTnI基因的表达增强。2.重组质粒转染诱导后的MSCs,titin基因的表达减弱。3.titin基因的表达被干扰后,β-MHC基因的表达无明显变化,而cTnI基因的表达有减弱。结论:1.MSCs是一种具有心肌源性的种子细胞2.titin基因可能是MSCs向心肌细胞分化发育过程中有重要意义的基因,对cTnI基因的表达有调控作用。

重症肌无力患者血清Titin抗体的研究

目的探讨重症肌无力患者血清titin抗体检测的临床意义,并了解其对预后判断的价值。方法应用酶联免疫吸附法检测80例MG患者、30例其他神经系统疾病患者及30例健康对照者血清titin抗体水平,并对比胸腺手术前后变化。结果 MG组、MG伴胸腺瘤(MGT)组、晚发型MG患者、其他神经系统疾病组titin-Ab阳性率分别为42.5%、77.3%、77.8%、3.3%,健康对照者titin-Ab均为阴性;对其中54例进行胸腺手术的MG患者手术前后titin-Ab滴度下降,差异具有显著性(P<0.05)。结论 titin-Ab阳性多见于晚发型MG、MGT,特别是B型胸腺瘤患者,血清titin-Ab检测可作为MG诊断的参考指标,尤其对MG伴胸腺瘤患者可能更具有临床意义,对胸腺手术预后判断有一定帮助。

Titin抗原决定簇在正常胸腺、胸腺瘤和胸腺癌组织中的表达

目的探讨在正常胸腺、胸腺瘤、胸腺癌组织中titin抗原决定簇的表达及其与重症肌无力(myasthenia gravis,MG)临床表现的关系。方法选取4例MG伴胸腺瘤患者的胸腺瘤、1例胸腺癌、1例MG伴胸腺瘤患者胸腺瘤旁增生的胸腺组织以及1例正常胸腺组织标本,对所有标本作连续冰冻切片,分别进行HE染色、细胞角蛋白(cytok-eratin,CK)和titin抗原的免疫组化染色,同时测定MG伴胸腺瘤患者血清titin抗体的浓度。结果免疫组化染色结果显示,titin在胸腺瘤中表达呈强阳性,其分布与胸腺瘤上皮细胞的分布一致,胸腺瘤内淋巴细胞和其他结构titin染色呈阴性;在胸腺癌组织内titin染色呈阴性;在正常胸腺中titin染色位于胸腺小体,呈弱阳性,其他结构未见着色。4例MG伴胸腺瘤患者中有3例血清titin抗体阳性。结论 MG伴胸腺瘤患者的胸腺瘤组织中有titin抗原决定簇的表达,且仅表达于胸腺瘤上皮细胞,而正常胸腺组织中titin表达于胸腺小体,提示伴MG的胸腺瘤中发生了免疫微环境的变化。

Titin抗体在重症肌无力伴胸腺瘤中的应用

Titin又称第三肌丝、肌联蛋白,其含量在肌肉中仅次于肌球蛋白和肌动蛋白,Titin抗体(Titin-Ab)针对Titin的主要免疫原性区域(main immunogenic region,MIR),与骨骼肌收缩成分反应产生临床症状。迟发型重症肌无力(MG)和MG伴胸腺瘤(myasthenia gravis with thymoma,MGT)特别是B型胸腺瘤患者Titin-Ab阳性率偏高,Titin-Ab与MG的临床严重程度具有更好的相关性。现对Titin-Ab在MGT中的应用做一综述。

Titin蛋白基因3′UTR单核苷酸多态性分析和RACE扩增

本文以6头纯种长白猪、6头蓝塘猪和243头F2代杂交猪个体为对象,采用RACE方法扩增3′非翻译区序列,运用单核苷酸多态性(SNPs)技术分析Titin基因3′非翻译区的多态性。结果显示:3′非翻译区延展出236个碱基新序列;SNPs检测到F2代群体有三种基因型,两种纯合子(AA型和BB型)和一种杂合子(AB型);测序结果显示Titin蛋白基因3′UTR+317位为A→G单碱基变化。

Titin蛋白PEVK片段中PVAP基序的构象研究

目的通过构象搜索,得到Titin蛋白PEVK片段中PVAP基序的低能构象。方法利用分子力学随机构象搜索法和混合Monte Carlo方法,对Titin蛋白PEVK片段中的PVAP基序进行构象搜索。结果随机构象搜索得到的低能构象集中,PVAP的构象骨架分为折叠式和伸展式,其中以折叠式为优势构象;利用混合Monte Carlo方法得到的低能构象与随机构象搜索结果基本一致。结论在拉力作用下,PVAP的构象由折叠式转变成伸展式,使分子在宏观上表现为弹性,为解释其对Titin蛋白弹性的贡献提供了一定的理论依据。

重症肌无力患者血清titin抗体和乙酰胆碱受体抗体与疾病临床特征的关系

目的探讨重症肌无力(MG)患者血清titin抗体及乙酰胆碱受体(AChR)抗体与疾病临床特征的关系。方法采用酶联免疫吸附试验对90例MG患者和30例对照组成员进行titin抗体和AChR抗体的检测并进行比较。结果 MG患者AChR抗体、Titin抗体阳性率(76.7%,54.5%)明显高于对照组(10%,6.7%)(χ2=41.667,P=0.000;χ2=21.017,P=0.000)。titin抗体与AChR抗体检测MG的灵敏度分别为54.5%和76.7%,两种抗体并联试验灵敏度为89.4%。titin抗体在伴胸腺病变及晚发型MG患者中有较高阳性率,分别为80.0%和72.5%,明显高于非胸腺瘤组(47.1%,χ2=6.771,P=0.009)和早发型MG患者(40%,χ2=9.46,P=0.002)。全身型MG患者titin抗体与AChR抗体阳性率(69.2%,90.4%)显著高于眼肌型MG(34.2%,χ2=10.856,P=0.001;57.9%,χ2=12.956,P≤0.000)。甲亢组与非甲亢组MG患者titin抗体(33.3%,56.8%)与AChR抗体阳性率(55.6%,79%)差异性均无统计学意义(χ2=1.797,P=0.19;χ2=2.491,P=0.063)。结论 MG患者病情越重,titin抗体与AChR抗体阳性率越高。Titin抗体及AChR抗体能作为诊断MG的指标,联合检测能提高MG诊断的灵敏。然而MG患者血清titin抗体与AChR抗体并无一致性关系。

Cyclosporin A通过MEK/ERK1/2信号通路调节滋养细胞titin表达

探讨MEK/ERK1/2信号通路在Cyclosporin A(CsA)诱导滋养细胞表达titin中的作用。应用RT-PCR、Western blot检测CsA诱导的滋养细胞titin的表达水平,Western blot检测CsA作用于滋养细胞后ERK1/2的活化程度,并观察MEK特异性抑制剂U0126对其mRNA转录的影响。发现CsA以时间和剂量依赖方式诱导titin表达,并刺激滋养细胞ERK1/2的活化,U0126以剂量依赖方式抑制CsA诱导的titin表达。结果表明CsA通过活化MEK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin 的表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。

重症肌无力患者AchR-Ab、Titin-Ab的检测及其临床意义

目的对重症肌无力患者血清乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)、连接素抗体(Titin-Ab)进行检测,探讨其临床意义,为临床提供诊断、治疗的依据。方法选取本院2013年1月至2014年12月收治的重症肌无力患者80例。依据胸部CT检查结果将患者分为伴胸腺瘤(MGT)组与不伴胸腺瘤(NTMG)组。测定各组患者外周血AchR-Ab与Titin-Ab的含量并统计阳性例数,探讨其用于诊断重症肌无力的价值及意义。结果 MG组AchR-Ab与Titin-Ab阳性率明显高于HC组,MGT组AchR-Ab与Titin-Ab阳性率明显高于NTMG组,全身型(Ⅱ~Ⅳ型)AchR-Ab与Titin-Ab阳性率明显高于眼睑型(Ⅰ型)组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 AChR抗体作为临床使用最广泛的重症肌无力患者检测指标具有一定价值,Titin抗体是应用于重症肌无力患者合并胸腺瘤时敏感而特异的血清学指标,在重症肌无力患者中开展血清Titin抗体的测定对于胸腺瘤的诊断及判断预后具有重要的临床指导意义。

重症肌无力患者Foxp3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞与AChRAb、Titin-Ab的相关研究

目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者Foxp3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞(Foxp3^+CD4^+CD25^+Treg)与乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)及连接素抗体(Titin-Ab)之间的关系,进一步揭示MG的发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测22例MG患者以及20名健康对照者血清AChRAb和Titin-Ab水平;采用流式细胞术(FCM)检测两组外周血中CD4^+CD25^+Treg的比例及其表达Foxp3的比例。结果 MG患者外周血CD4^+CD25^+Treg比例[(2.9±0.52)%]与健康对照组[(3.12±0.51)%]比较无统计学差异(P>0.05);CD4^+CD25^+Treg细胞Foxp3表达比例为(37.24±9.57)%,低于健康对照组[(58.60±4.91)%](P<0.01)。MG组CD4^+CD25^+Treg表达Foxp3比例与AChRAb、Titin-Ab水平[分别为(0.232±0.060)和(0.170±0.035)pg/mL]均呈负相关(r=-0.449,P<0.05;r=-0.691,P<0.01)。结论 Foxp3^+CD4^+CD25^+Treg细胞数目减少导致机体免疫功能缺陷是MG发病的重要环节。

伴Titin-Ab,RyR-Ab阳性的不典型眼肌型重症肌无力1例报告并文献复习

重症肌无力是一种由多种抗体介导、细胞免疫依赖及补体共同参与的自身免疫性疾病,眼肌型重症肌无力(OMG),指肌无力症状仅局限于眼外肌,以单侧或双侧上眼睑下垂、复视、易疲劳等为主要临床表现,其发病机制尚未完全阐明,个别病例临床确诊仍存在一定的困难,现就我院诊断的1例不典型眼肌型重症肌无力患者的临床特点进行报道分析。

血清Titin-Ab与AChR-Ab对重症肌无力患者的临床诊断价值

目的:探讨血清连接素抗体(Titin-Ab)与乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)检测对重症肌无力(MG)患者的诊断价值。方法:前瞻性纳入86例MG患者(MG组)作为研究对象,根据改良0sserman临床分型将其分为眼肌型组(n=51)和全身型组(n=35),并择取80名同期健康体检对象作为对照组。检测所有研究对象血清Tintin-Ab及AChR-Ab,分析各组间血清Tintin-Ab及AChR-Ab阳性率差异及其对MG的诊断价值。结果:MG组患者血清Titin-Ab、AChR-Ab阳性率均高于对照组(P<0.05);全身型患者AChR-Ab阳性率高于眼肌型(P<0.05),但两组间血清Titin-Ab阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);全身型组患者中,ⅡA型8例,ⅡB型20例,Ⅲ型+Ⅳ型7例,不同Osserman分型患者血清Titin-Ab和AChR-Ab阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两指标联合诊断MG的灵敏度高于单独诊断(χ^(2)=37.979,P<0.05)。结论:MG患者血清Titin-Ab和AChR-Ab阳性率升高,两指标联合检测,对MG诊断具有较高的灵敏度及准确率。

斑马鱼心脏发育候选基因Titin-Cap的CRISPR/Cas9打靶有效性分析

CRISPR/Cas9基因打靶技术是近几年发展起来的一种高效率的定向打靶技术,被认为是遗传领域的革命性技术。Titin-Cap基因是本实验室已初步鉴定的斑马鱼心脏发育候选基因,且国内外目前尚无斑马鱼Titin-Cap基因的敲除品系。为了研究Titin-Cap基因在心脏发育过程中的作用机制,我们利用CRISPR/Cas9基因打靶技术建立斑马鱼Titin-Cap基因的敲除品系。测序结果显示,注射了CRISPR/Cas9 gRNA的胚胎出现双峰,说明在打靶位点附近出现了碱基缺失或插入,证明我们设计的gRNA是有效的。对F0代突变体成鱼的筛选中,测序结果同样显示有阳性结果。这些结果说明用CRISPR/Cas9基因打靶技术成功敲除了斑马鱼Titin-Cap基因,获得了Titin-Cap基因敲除的嵌合体斑马鱼。

Titin抗体检测在重症肌无力并发胸腺瘤诊断中的价值

目的 探讨连结素（Titin）抗体检测在重症肌无力（MG）并发胸腺瘤患者诊断中的价值。方法 选取2013年1月-2014年11月石家庄市第一人民医院收治的MG患者56例,其中并发胸腺瘤患者（MGT）36例,不伴胸腺瘤MG组（NTMG）56例,其他疾病患者（OND）30例,健康对照组（HC）50例。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对重症肌无力患者、其他疾病患者和健康对照组进行Titin抗体检测并进行比较。结果 Titin抗体在MGT组、NTMG组、OND组和HC组的阳性率分别为88.9%,10.7%,6.7%和2.0%。MGT组的Titin抗体阳性率较NTMG组、OND组和HC组均显著升高（χ^2=52.1,41.1,63.2,均P=0.000）,而NTMG组、OND组和HC组间比较差异无统计学意义（χ^2=0.051,P=0.821,χ^2=1.993,P=0.158）。Titin抗体诊断MG并发胸腺瘤患者的敏感度为88.9%,特异度为89.3%。按照Osserman临床分型,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ及Ⅳ型MG患者的Titin抗体阳性率分别为11.8%,47.6%,83.3%和100%。Titin抗体阳性率与MG患者临床分型具有统计学意义（χ^2=9.09,P=0.028）。结论 Titin抗体是MG并发胸腺瘤特异和敏感的血清学诊断指标。Titin抗体阳性率越高,可提示重症肌无力患者病情越严重。