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产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选
1
作者
江绍锋
黄金清
+3 位作者
于晓宇
李云飞
蓝运华
陆祖军
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期68-75,共8页
以产酸克雷伯氏菌KO108为研究对象,通过构建转座子突变体文库,筛选获得2株游动性显著降低的突变菌株,并以转座子mTn5gusA-pgfp21构建突变体库,利用地高辛生物标记gfp基因序列作为探针,Southern杂交验证突变体库的质量,根据杂交条带判断m...
以产酸克雷伯氏菌KO108为研究对象,通过构建转座子突变体文库,筛选获得2株游动性显著降低的突变菌株,并以转座子mTn5gusA-pgfp21构建突变体库,利用地高辛生物标记gfp基因序列作为探针,Southern杂交验证突变体库的质量,根据杂交条带判断mTn5gusA-pgfp21转座子插入染色体的拷贝数,以反向PCR获取未知序列,通过基因组学分析预测游动性相关基因。结果表明:产酸克雷伯氏菌KO108具Kan抗性标记、GUS活性、GFP遗传标记的突变体库可由两亲结合经转座子mTn5gusA-pgfp21转座突变获得;随机选择100株突变体进行游动性筛选,仅获得2株游动性显著降低的目标菌株MA和MD;MA、MD与KO108差异显著(P<0.05),而MA和MD之间没有显著差异;Southern杂交结果显示MA和MD的转座子mTn5gusApgfp21为单插入,且插入位点所在的酶切片段大小不同;经反向PCR、测序、序列分析,发现MA突变基因为醌类氧化还原酶(NAD(P)H:quinone oxidoreductase)(NQR)基因簇的NqrA,MD突变基因为LPS脂多糖生物合成基因簇基因;生长曲线检测显示KO108和MA、MD无显著差异;菌膜检测发现MD与KO108、MA有一定差异,但KO108与MA之间无显著性差异;以Biolog ECO检测KO108和MA、MD的碳源利用情况,结果表明MA和MD 72h后仍然不能利用羧酸类碳源D-半乳糖酸γ-内酯和2-羟基苯甲酸。
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关键词
产酸克雷伯氏菌
tn5
插入突变
突变体
游动性
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职称材料
Tn5细胞中单链抗体基因抗人重组质粒分子的表达分析
2
作者
谌晓燕
张银辉
+1 位作者
陈艳
王霓
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第14期3121-3124,共4页
目的研究Tn5细胞中单抗抗人重组质粒(B7-2)基因的表达及其活性。方法基于具备信号肽单抗抗人B7-2构建,构建系统Bac-to-Bac并含单抗抗人B7-2杆状重组病毒AcBacmid单抗B7-2,对Tn5细胞采用不同感染复数(MOI)实施感染,进行24、48、72h...
目的研究Tn5细胞中单抗抗人重组质粒(B7-2)基因的表达及其活性。方法基于具备信号肽单抗抗人B7-2构建,构建系统Bac-to-Bac并含单抗抗人B7-2杆状重组病毒AcBacmid单抗B7-2,对Tn5细胞采用不同感染复数(MOI)实施感染,进行24、48、72h不同时点细胞蛋白活性的分泌表达,并分析人外周血中单个核细胞受Raji刺激呈增殖表达,予以单抗抑制的效果。结果应用不同MOI对Tn5细胞感染,达72h后进行细胞收集,予以聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE-SDS)分析,其MOI为1-10表达目的蛋白的量,确定最佳MOI为5;MTT法下自动酶标仪波长570nm位置吸光度,其吸光值的大小同细胞PBMC增殖可呈正相关;各组吸光值显示细胞Raji刺激外周血单个核细胞(PBMC)呈增殖表达,单抗抗人B7-2可以抑制Raji细胞刺激PBMC出现的增殖效应。结论单抗B7-2抗原抗体相结合的活性,以及对PBMC产生的抑制效应均存在,但未见单抗B7-2效应明显表达,有待进行更进一步的试验研究。
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关键词
表达
基因
抗人B7-2
单克隆抗体
细胞
tn5
原文传递
题名
产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选
1
作者
江绍锋
黄金清
于晓宇
李云飞
蓝运华
陆祖军
机构
广西师范大学生命科学学院/珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室
广西高校野生动植物生态学重点实验室
华南农业大学农学院
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期68-75,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31060120)
广西壮族自治区自然科学基金项目(2013GXNSFAA019059)
广西研究生教育创新计划项目(YCSZ2014090)
文摘
以产酸克雷伯氏菌KO108为研究对象,通过构建转座子突变体文库,筛选获得2株游动性显著降低的突变菌株,并以转座子mTn5gusA-pgfp21构建突变体库,利用地高辛生物标记gfp基因序列作为探针,Southern杂交验证突变体库的质量,根据杂交条带判断mTn5gusA-pgfp21转座子插入染色体的拷贝数,以反向PCR获取未知序列,通过基因组学分析预测游动性相关基因。结果表明:产酸克雷伯氏菌KO108具Kan抗性标记、GUS活性、GFP遗传标记的突变体库可由两亲结合经转座子mTn5gusA-pgfp21转座突变获得;随机选择100株突变体进行游动性筛选,仅获得2株游动性显著降低的目标菌株MA和MD;MA、MD与KO108差异显著(P<0.05),而MA和MD之间没有显著差异;Southern杂交结果显示MA和MD的转座子mTn5gusApgfp21为单插入,且插入位点所在的酶切片段大小不同;经反向PCR、测序、序列分析,发现MA突变基因为醌类氧化还原酶(NAD(P)H:quinone oxidoreductase)(NQR)基因簇的NqrA,MD突变基因为LPS脂多糖生物合成基因簇基因;生长曲线检测显示KO108和MA、MD无显著差异;菌膜检测发现MD与KO108、MA有一定差异,但KO108与MA之间无显著性差异;以Biolog ECO检测KO108和MA、MD的碳源利用情况,结果表明MA和MD 72h后仍然不能利用羧酸类碳源D-半乳糖酸γ-内酯和2-羟基苯甲酸。
关键词
产酸克雷伯氏菌
tn5
插入突变
突变体
游动性
Keywords
Klebsiella oxytoca
tn5
insertion mutagenesis
mutants
cell
motility
分类号
Q939.9 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
Tn5细胞中单链抗体基因抗人重组质粒分子的表达分析
2
作者
谌晓燕
张银辉
陈艳
王霓
机构
襄阳市中医医院检验科
出处
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第14期3121-3124,共4页
基金
湖北省科技计划自然科学基金资助项目(2011CDB298)
文摘
目的研究Tn5细胞中单抗抗人重组质粒(B7-2)基因的表达及其活性。方法基于具备信号肽单抗抗人B7-2构建,构建系统Bac-to-Bac并含单抗抗人B7-2杆状重组病毒AcBacmid单抗B7-2,对Tn5细胞采用不同感染复数(MOI)实施感染,进行24、48、72h不同时点细胞蛋白活性的分泌表达,并分析人外周血中单个核细胞受Raji刺激呈增殖表达,予以单抗抑制的效果。结果应用不同MOI对Tn5细胞感染,达72h后进行细胞收集,予以聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE-SDS)分析,其MOI为1-10表达目的蛋白的量,确定最佳MOI为5;MTT法下自动酶标仪波长570nm位置吸光度,其吸光值的大小同细胞PBMC增殖可呈正相关;各组吸光值显示细胞Raji刺激外周血单个核细胞(PBMC)呈增殖表达,单抗抗人B7-2可以抑制Raji细胞刺激PBMC出现的增殖效应。结论单抗B7-2抗原抗体相结合的活性,以及对PBMC产生的抑制效应均存在,但未见单抗B7-2效应明显表达,有待进行更进一步的试验研究。
关键词
表达
基因
抗人B7-2
单克隆抗体
细胞
tn5
Keywords
Expression
Gene
Anti human B7-2
Monoclonal antibody
tn5 cell
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
产酸克雷伯氏菌游动性减弱突变体的筛选
江绍锋
黄金清
于晓宇
李云飞
蓝运华
陆祖军
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
下载PDF
职称材料
2
Tn5细胞中单链抗体基因抗人重组质粒分子的表达分析
谌晓燕
张银辉
陈艳
王霓
《中华医院感染学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
原文传递
已选择
0
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