槲皮素对胶原诱导性关节炎小鼠Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响

目的探讨槲皮素对胶原诱导性关节炎小鼠Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响,阐明槲皮素治疗胶原诱导性关节炎的可能机制。方法将小鼠采用随机数字表法分为对照组(C组)、模型组(M组)、蜂毒肽组(Q组)和甲氨蝶呤组(MTX组),每组10只。采用Ⅱ胶原建立胶原诱导关节炎动物模型,Q组小鼠腹腔注射槲皮素(50 mg/kg),MTX组小鼠腹腔注射甲氨蝶呤(0.5 mg/kg),每3天1次,共3周。视觉模拟评分法进行关节炎评分。苏木精-伊红(HE)染色观察踝关节病理形态学变化。蛋白质印迹法(Westernblotting)和荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定软骨组织中TLR4、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、髓样分化因子88(MYD88)、NF-κB p65蛋白和信使核糖核酸(mRNA)水平。结果与C组比较,M组足掌肿胀厚度升高[(4.85±0.64)mm比(2.16±0.53),P<0.05],软骨组织中TLR4、TRAF6、MYD88、NF-κBp65蛋白和mRNA水平升高(P<0.05);与M组比较,Q组(3.12±0.63)和MTX组(2.87±0.57)足掌肿胀厚度降低(P<0.05),病理评分(骨破坏评分、血管翳评分、滑膜炎评分及总分)明显降低(P<0.05),关节炎评分明显降低(P<0.05),软骨组织中TLR4、TRAF6、MYD88、NF-κBp65蛋白和mRNA水平降低(P<0.05);Q组和MTX组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论槲皮素可抑制胶原诱导性关节炎小鼠关节炎症反应,其机制可能与槲皮素可抑制TLR2/NF-κB信号通路有关。

乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB通路对急性胃肠损伤家兔肠屏障功能保护机制

目的探讨乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能保护机制。方法40只家兔,平均分为4组,对照组(未建立严重多发伤并急性胃肠损伤),损伤组、药物对照组和干预组均建立严重多发伤并急性胃肠损伤模型。建模成功后药物对照组注射丙氨酰谷氨酰胺1.2 g/kg,干预组腹腔注射100000 U/kg的乌司他丁,8 h一次,连续7 d。其余家兔同部位注射等体积生理盐水。抽取静脉血检测肠黏膜屏障、炎症及应激指标,HE染色检测小肠病理形态,HMGB1、TLR4、NF-κB检测采用免疫印迹及聚合酶链式反应法。结果损伤组肠脂肪酸结合蛋白、二胺氧化酶、D乳酸、降钙素原和C反应蛋白均高于对照组(P<0.05),药物对照组和干预组上述指标均低于损伤组,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组丙二醛(MDA)升高,超氧化物岐化酶(SOD)降低;与损伤组比较,药物对照组和干预组MDA降低,SOD升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组家兔小肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA比较存在差异,损伤组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA高于对照组,与损伤组比较,药物对照组和干预组上述指标降低,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能够提高严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能,改善炎症及应激,并具有浓度依赖性,其作用机制与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关。

清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠TLR-4、NF-κBp65蛋白表达的影响

目的观察三硝基苯磺酸(TNBS)法溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜TLR-4、NF-κBp65的变化特点及清肠化湿方对TLR-4、NF-κBp65蛋白表达的影响。方法采用TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎模型。将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、清肠化湿方组、巴柳氮组,治疗10d后处死大鼠取新鲜结肠标本,观察黏膜大体形态及组织学改变,并采用Westernblot法检测TLR-4、NF-κBp65蛋白表达水平。结果模型对照组TLR-4、NF-κBp65蛋白表达均高于正常对照组,清肠化湿方组TLR-4、NF-κBp65的表达低于模型对照组,同时清肠化湿方组大鼠结肠形态及组织学损伤评分均有降低。结论清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型大鼠具有治疗作用,抑制TLR-4、NF-κBp65的表达可能是其作用机制之一。

rhEPO对大鼠肾缺血再灌注损伤TLR4/NF-κB通路的影响

目的探讨不同时段相同剂量重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对大鼠肾缺血再灌注损伤TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法将70只雄性SD大鼠按随机数字表法分假手术组,缺血再灌注组(IR),注射rhEPO在缺血前6 h组(P6)、缺血前2 h组(P2)、缺血前0 h组(P0)、缺血后2 h组(A2)、缺血后6 h组(A6),每组10只。测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平,HE染色观察肾组织病理学形态,免疫组织化学法检测肾组织TLR4、NF-κB p50蛋白表达与分布,RT-PCR法检测肾组织TLR4、NF-κB mRNA表达。结果 IR组的血清BUN、Cr,肾小管Paller评分,TLR4、NF-κB p50蛋白表达及肾组织TLR4、NF-κB mRNA表达较假手术组均升高(P<0.01);P6、P2、P0、A2、A6组的Paller评分、BUN和Cr的血清浓度、TLR4及NF-κB的蛋白质和mRNA表达较IR组减少(P<0.01),每组的5项监测指标趋势一致;rhEPO干预组中P6、P2组的5项监测指标均较P0、A2、A6组减少(P<0.01),P6和P2间及P0、A2和A6组间的各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rhEPO干预能缓解肾缺血再灌注损伤所致的急性肾损伤,可能是通过抑制TLR4/NF-κB通路起作用,rhEPO在肾缺血前注射比肾缺血后注射对肾脏保护作用更明显。

HMGB1和TLR4在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在人食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)组织中的表达及其临床意义.方法:选择72例食管鳞癌标本,15例癌旁正常组织标本,采用En Vision免疫组织化学染色法检测HMGB1和TLR4在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达,并应用统计学方法对其表达与临床病理因素进行分析.结果:食管鳞癌组织中HMGB1、TLR4的表达显著高于正常组织(P<0.05),且与淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),与肿瘤大小、分化程度等无相关性.食管麟癌组织HMGB1和TLR4的表达呈显著正相关(r=0.377,P<0.01).结论:食管鳞癌组织中HMGB1、TLR4的表达显著高于癌旁正常组织,且其表达与淋巴结转移及TNM分期相关,联合检测二者可能有助于评估食管鳞癌的恶性程度.因此,HMGB1/TLR信号通路有可能作为反映食管癌预后的重要生物学指标及抗食管癌的重要靶点.

HH方治疗HBV转基因小鼠抗病毒作用及其对TLR3／TLR4的影响

目的:观察HH方治疗乙肝病毒(HBV)转基因小鼠抗HBV的疗效及其作用机制。方法:HBV转基因小鼠随机分4组,模型组小鼠给予同体积生理盐水,苦参素组小鼠给予同体积含0.15 g/(kg·d)苦参素混悬液,高、低剂量HH方组小鼠分别给予同体积含7、2 g/(kg·d)HH混悬液。5周后,ELISA法检测血清及肝组织乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag),常规HE染色观察肝组织病理变化,定量PCR法检测血清中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)及肝组织中HBVDNA、Toll样受体(TLR)3/4 mRNA,Western blot法检测TLR3/4蛋白表达。结果 :高剂量HH方[7 g/(kg·d)]可以减轻肝细胞轻度脂肪变性、肝细胞轻度水肿及Kuffer细胞增生等病理改变,对肝组织炎细胞浸润未见明显缓解。高剂量HH方可以显著降低HBV转基因小鼠肝脏和血清中的HBs Ag、HBVDNA水平,差异具有统计学意义(P<0.05),与苦参素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量HH方可以显著增强肝组织TLR3、TLR4的mRNA及蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高剂量HH方有一定抗HBV作用,推测与增强TLR3、TLR4表达进而影响干扰素分泌有关。

大黄素调控TLR4/NF-κB信号通路对大鼠感染性创面愈合的研究

目的研究大黄素对大鼠感染性创面愈合的作用,及其对Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法用全层皮肤缺损法构建感染性创面大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组12只;另取12只正常大鼠作为正常组。低、中、高剂量实验组分别外敷大黄素150、300、600μg·d^(-1),每次1次,同时均灌胃给予200 mg·kg^(-1)大黄素,每天1次;对照组外敷莫匹罗星软膏0.1 g·d^(-1),每天1次;正常组和模型组均灌胃给予等体积0.9%NaCl,每天1次。6组大鼠均连续给药21 d。比较各组大鼠的创面愈合率及动态血流值,用酶联免疫吸附试验法分别测定血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平及创面组织中羟脯氨酸(HYP)、过氧化氢酶(CAT)水平,用蛋白质印迹法测定创面组织中TLR4和NF-κB蛋白的表达水平。结果中、高剂量实验组和对照组、模型组的创面愈合率分别为(50.70±1.26)%、(75.51±0.50)%、(69.44±1.65)%和(28.58±5.09)%;中、高剂量实验组和对照组、模型组、正常组的动态血流值分别为(123.71±3.71)、(155.61±2.47)、(146.29±2.04)、(79.47±4.76)和(158.00±1.93)mL·min^(-1),TNF-α分别为(81.05±2.32)、(56.69±1.59)、(69.53±2.39)、(139.46±2.46)和(46.49±5.71)ng·L^(-1),IL-1β分别为(59.87±0.83)、(42.66±1.30)、(48.37±3.34)、(88.79±1.84)和(33.93±2.19)ng·L^(-1),HYP分别为(24.79±0.82)、(31.12±1.16)、(25.83±1.12)、(16.88±2.20)和(32.95±1.18)μg·mg^(-1),CAT分别为(24.99±1.47)、(34.52±1.26)、(31.00±1.15)、(13.70±2.09)和(34.23±0.70)U·mg^(-1),TLR4蛋白相对水平分别为0.74±0.05、0.53±0.05、0.55±0.04、1.09±0.07和0.23±0.05,NF-κB蛋白相对水平分别为0.69±0.06、0.44±0.04、0.52±0.03、1.10±0.04和0.22±0.10。中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论大黄素能够改善大鼠感染性创面愈合及动态血流量,抑制创面组织的炎症水平和氧化应激反应,其机制可能与调节TLR4/NF-κB通路有关。

大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注损伤后的肺保护机制

目的探讨大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注损伤后肺的保护作用以及可能的作用机制。方法将健康雄性SD大鼠60只随机分成4组:对照组、氨溴索组、肺缺血再灌注(I/R)组、I/R+氨溴索组,每组15只。造模前分别给予大剂量氨溴索组和I/R+氨溴索组静脉注射盐酸氨溴索0.75g/L,分别给予对照组和I/R组注射与上述氨溴索治疗量等容量的生理盐水。观察肺组织病理学改变并评分,检测湿干重比值(W/D)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞凋亡数目、核转录因子-κB(NF-κB),Western blot方法观察大鼠肺组织Toll样蛋白4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路的蛋白表达水平。结果与对照组相比,I/R组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D、炎症因子显著升高,肺组织W/D、IL-1β、TNF-α、凋亡细胞、NF-κB活性和TLR4信号通路相关蛋白表达水平明显升高;与(I/R)组相比,I/R+氨溴索组肺泡腔内出血、水肿等炎症表现减轻,W/D、炎症因子、凋亡细胞显著降低,肺组织NF-κB转录活性及TLR4信号通路表达水平明显降低。结论大剂量盐酸氨溴索通过下调TLR4信号通路发挥对缺血再灌注损伤大鼠的肺保护作用。

牛膝多糖对仔猪肠上皮细胞免疫应激的调控及其作用机制

本试验旨在考察牛膝多糖(ABPS)对脂多糖(LPS)免疫应激下仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)促炎细胞因子分泌和表达的影响,并探讨ABPS调控IPEC-J2免疫应激可能的作用机制。选用4~5代的IPEC-J2,培养基中分别添加0(对照)、300、600、900、1 200μg/m L ABPS和10μg/m L LPS,每组12个重复,每孔为1个重复。培养72 h后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测ABPS对促炎细胞因子白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌量的影响,采用实时定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量,采用Western blot法测定TLR4、NF-κB、磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)蛋白表达量。结果显示:与对照组相比,300、600、900和1 200μg/m L ABPS组能显著减少IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的分泌量(P<0.05);300μg/m L ABPS组能显著减少p-NF-κB蛋白的表达量(P<0.05),900和1 200μg/m L ABPS组能显著减少TLR4、NF-κB的mRNA和NF-κB蛋白的表达量(P<0.05)。由此可见,ABPS通过TLR4/NF-κB信号转导途径来调控促炎细胞因子的分泌,从而缓解免疫应激,低浓度ABPS通过直接抑制NF-κB磷酸化过程来降低免疫应激,高浓度ABPS则是通过抑制TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB蛋白的表达量来缓解免疫应激。

Edaravone inhibits apoptosis caused by ischemia/reperfusion injury in a porcine hepatectomy model

AIM： TO investigate the effect of E3-methyl-l-phe- nyl-2-pyrazolin-5-one （Edr） on hepatic ischemia-reper- fusion （I/R） injury and liver regeneration in a porcine hepatectomy model. METHODS： One hour ischemia was induced by occlud- ing the vessels and the bile duct of the right and median lobes. A 40% left hepatectomy was performed after re- perfusion. Six animals received Edr （3 mg/kg per hour） intravenously and six control animals received saline just before reperfusion. Remnant liver volume, hemody- namics, aspartate aminotransferase （AST）, alanine ami- notransferase, lactate dehydrogenase and lactic acid, were compared between the groups. The expression of transforming growth factor-β （TGF-β1） and toll-like receptor （TRL） mRNA in hepatic tissues was examined using reverse transcription polymerase chain reaction. Apoptosis was demonstrated by terminal deoxynucleo- tidyl transferase dUTP nick end labeling （TUNEL） stain- ing, respectively. RESULTS： Serum AS-I- （P = 0.029）, and toll like recep- tor 4 level （P = 0.043） were significantly lower after 3 hin animals receiving Edr. In addition, TUNEL staining in Edr-treated pigs showed significantly fewer hepatocytes undergoing apoptosis compared with control pigs. After 1 mo, all factors were non-significantly different between the two groups. CONCLUSION： Edr is considered to reduce hepatic injury in the early stage of I/R injury in a porcine model.

正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M侵袭、迁移的影响及机制研究

背景与目的:有研究证实,正丁酸钠(sodium butyrate,Na B)对肿瘤细胞具有抑制增殖、诱导分化和促凋亡的作用,但对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)的作用机制尚不明确。该研究主要探讨不同浓度Na B对SACC细胞株ACC-M侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:MTT法探索Na B作用ACC-M细胞的最佳浓度并观察细胞的生长情况,Transwell小室实验检测Na B对ACC-M细胞侵袭、迁移能力的影响,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测5组浓度药物作用后ACC-M细胞中高迁移率蛋白-1(high mobility group box-1,HMGB1)、toll样受体-4(toll like receptor-4,TLR4)m RNA和蛋白的表达。结果:与对照组相比,加入Na B 0.625、1.25、2.5、5及10 mmol/L的5组均能抑制ACC-M细胞增殖且呈明显浓度依赖性(P<0.05)。5组浓度Na B均可抑制ACC-M细胞体外侵袭和迁移能力(P<0.05),同时能降低ACC-M细胞HMGB1、TLR4 m RNA及蛋白的表达(P<0.05);相关性分析显示TLR4蛋白表达的降低与HMGB1的抑制呈正相关(r=0.810,P<0.05)。结论:Na B可抑制ACC-M细胞增殖,显著降低ACC-M细胞的侵袭和迁移能力,同时降低HMGB1、TLR4 m RNA和蛋白的表达,且2者表达量呈明显正相关,提示Na B可能是通过下调HMGB1、TLR4 m RNA和蛋白的表达来实现对ACC-M细胞侵袭、迁移能力的抑制。

外源性硫化氢对小鼠动脉粥样硬化的调节作用及机制

目的研究外源性硫化氢（H2S）通过T0ll样受体4（TLR4）对ApoE-／-小鼠动脉粥样硬化的调控作用及机制。方法制作ApoE-／-小鼠颈动脉粥样硬化不稳定斑块模型，外源性心s缓释剂GYY4137干预。模型分为正常对照组、不稳定斑块组、不稳定斑块组＋不同剂量GYY4137组、不稳定斑块＋LY294002组。检测小鼠血脂水平，油红染色检测粥样硬化斑块，ELISA法检测血浆炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1和IL-10，Westernblot检测斑块组织内TLR4、P13K、Akt、磷酸化Akt（P-Akt）蛋白表达。结果与对照组比较，模型组脂质成分及促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1增加，抑炎因子IL-10减少，粥样斑块内TLR4、P13K、P-Akt蛋白表达增加（P〈0．01）。GYY4137中、高剂量干预减少模型组脂质成分及促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1表达，增加抑炎因子IL-10，减少TLR4、P13K、P-Akt蛋白表达（P〈0．01）。LY294002干预效果与GYY4137类似。结论外源性H，S能凋控TLR4及TNF-α、IL-6、IL-l、IL-10表达，防止ApoE-／-小鼠颈动脉粥样斑块发生、发展，作用与P13K-Akt信号通路有关。

未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎患者外周血单核细胞Toll样受体4的表达及意义

目的探讨未足月胎膜早破(preterm premature rupture of membrane,PPROM)合并绒毛膜羊膜炎患者外周血单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达及对合并绒毛膜羊膜炎的预测价值。方法 51例PPROM患者(观察组)根据胎膜组织病理检查结果分为非绒毛膜羊膜炎组16例,亚临床绒毛膜羊膜炎组25例和临床绒毛膜羊膜炎组10例,选择相同孕周正常孕妇40例为对照组。以实时荧光定量反转录PCR法检测外周血单核细胞TLR4mRNA表达,采用酶联免疫吸附测定和免疫比浊法分别检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平,并进行组间比较,Pearson法分析TLR4mRNA与血清IL-6、CRP的相关性。结果观察组外周血单核细胞中TLR4mRNA(0.726±0.048)及血清IL-6[(16.09±2.09)ng/L)]、CRP[(13.62±1.89)mg/L]水平均明显高于对照组[0.461±0.026、(8.81±1.14)ng/L、(5.15±0.77)mg/L](P<0.01);PPROM各亚组中,临床绒毛膜羊膜炎组患者外周血单核细胞中TLR4 mRNA(0.906±0.072)及血清IL-6[(35.52±3.93)ng/L]、CRP水平[(28.36±4.32)mg/L]均高于亚临床绒毛膜羊膜炎组[0.755±0.053,(20.63±1.85)ng/L,(15.04±2.54)mg/L]和非绒毛膜羊膜炎组[0.543±0.036,(11.92±1.27)ng/L,(9.32±1.47)mg/L](P<0.01),亚临床绒毛膜羊膜炎组高于非绒毛膜羊膜炎组(P<0.01);外周血单核细胞中TLR4mRNA表达与血清IL-6(r=0.473,P=0.019)和CRP(r=0.356,P=0.028)均呈正相关。结论 PPROM合并绒毛膜羊膜炎患者外周血单核细胞中TLR4 mRNA表达上调,可作为早期预测PPROM患者绒毛膜羊膜炎的指标,联合检测TLR4mRNA、IL-6和CRP更具临床价值。

Toll样受体4/核因子-κB信号转导通路介导入β防御素2在绒毛膜羊膜炎孕妇未足月胎膜早破过程中的作用

目的 观察人β-防御素2（Human beta-defensins-2,HBD-2）对绒毛膜羊膜炎（HCA）孕妇未足月胎膜早破过程的影响,探讨Toll样受体4/核因子-κB （TLR4/NF-κB）信号转导通路在此过程中的作用机制.方法 未足月胎膜早破（PROM）孕妇55例为实验组,同时选取同期住院除PROM引起早产以外的其他因素而终止妊娠,并且胎盘病理检查排除HCA的孕妇55例为对照组.采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测胎盘,胎膜TLR4、NF-κB p65、HBD-2的mRNA表达,对未足月PROM孕妇进行是否合并有HCA分为HCA组与非HCA亚组,并进一步比较分析. 结果 未足月PROM组胎盘TLR-4（17.15 ±4.52）、NF-κB p65（47.11±14.23）、HBD-2mRNA（27.35±2.67）的表达水平较正常组中TLR-4（7.21±3.25）、 NF-κB p65（30.51 ±13.05）、HBD-2mRNA（13.55±0.8）表达水平上调（t值分别为-1.966、-1.474、-1.754,P均〈0.05）;未足月PROM组胎膜TLR-4（18.54 ±3.35）、NF-κB p65（49.29±16.18）、HBD-2 mRNA（25.19±3.39）较正常组中的TLR-4（6.88±2.75）、 NF-κB p65（32.41±11.45）、HBD-2 mRNA（13.80 ± 2.21）表达水平上调（t值分别为-2.378、-1.487、-1.847,P均〈0.05）.对未足月PROM孕妇亚组分析中发现,与非HCA组相比,HCA组胎盘TLR-4（19.35 ±4.12）、NF-κB p65（49.3±13.36）、HBD-2 mRNA（31.54±2.43）的表达水平较非HCA组中TLR-4 （6.71±2.25） 、NF-κB p65（32±12.25）、HBD-2 mRNA（7.41 ±0.45） 的表达水平上调（t值分别为-3.456 、-1.547、-5.324,P均〈0.05）,HCA组胎膜TLR-4（20.45 ±3.12）、NF-κB p65（52.2±12.12）、HBD-2mRNA（32.56±2.91）的表达水平较非HCA组中TLR-4（7.78±2.65）、NF-κB p65（30.45±11.42）、HBD-2 mRNA（8.48 ±1.01）的表达水平上调（t值分别为-3.654、-1.654、-6.352,P均〈0.05）.HCA组胎盘,胎膜中TLR-4 mRNA 、NF-κB p65 mRNA水平成正相关性（r值分别为0.334、0.427,P均〈0.01）,TLR-4 mRNA与HBD-2 mRNA表达成正相关（r值分别为0.432、0.562,P均〈0.01）,NF-κB p65mRNA与HBD-2 mRNA表达成正相关（r值分别为0.471、0.392,P均〈0.01）.非HCA组胎盘,胎膜中NF-κB p65 mRNA与HBD-2 mRNA表达成正相关（r值分别为0.492、0.298,P均〈0.01）.TLR-4 mRNA 与NF-κB p65 mRNA无相关性（P均〉0.05）, TLR-4 mRNA与HBD-2 mRNA表达无相关性（P均〉0.05）.结论 TLR-4/NF-KB信号转导通路可调节HBD-2 mRNA的表达,其对HCA孕妇未足月PROM的影响可能与激活HBD-2 mRNA启动宿主剧烈的免疫应答相关.

旋毛虫成虫排泄-分泌蛋白对脓毒症急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的观察旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄-分泌蛋白(adult-worm excretory-secretory protein,AES)对小鼠脓毒症急性肝损伤的保护作用。方法 24只雄性BALB/c小鼠采用抽签法随机分为假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔组(CLP组)、AES治疗组(AES+CLP组)和AES对照组(AES+Sham组),每组6只。CLP组和AES+CLP组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症急性肝损伤动物模型,Sham组和AES+Sham组不结扎、不穿孔盲肠,其余操作与CLP组相同。术后30 min,Sham组和CLP组腹腔注射PBS,AES+CLP组和AES+Sham组腹腔注射AES(25μg/只)。术后12 h,检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察小鼠肝脏组织病理改变,蛋白质印迹(Western blotting)测定肝脏组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)的表达水平,免疫组化法测定肝细胞核因子-κB(NF-κB)p65的表达水平并分析NF-κB p65核阳性率,ELISA检测小鼠肝脏组织中α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β的水平。结果术后12 h,CLP组小鼠血清中ALT和AST水平分别为(269.83±77.60)和(712.00±186.52)IU/L,明显高于Sham组的(45.00±15.01)和(132.50±36.95)IU/L,及AES+CLP组的(136.67±30.27)和(419.00±60.86)IU/L(P<0.05);AES+Sham组分别为(50.83±13.24)和(134.67±35.78)IU/L,与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示:CLP组肝索紊乱,肝细胞水肿,有炎性细胞浸润;AES+CLP组肝脏结构损伤明显减轻。Western blotting检测显示:CLP组小鼠术后肝脏组织中TLR4/β-actin和My D88/β-actin相对表达量分别为0.66±0.12和0.69±0.13,明显高于Sham组的0.31±0.06和0.22±0.04(P<0.05);AES+CLP组TLR4/β-actin相对表达量为0.56±0.09,与CLP组的比较差异无统计学意义(P>0.05),而My D88/β-actin相对表达量为0.47±0.06,较CLP组降低(P<0.05)。免疫组化分析结果显示:CLP组肝细胞中NF-κB p65核阳性率为(18.93±2.91)%,明显高于Sham组的(0.50±0.21)%及AES+CLP组的(9.60±1.59)%(P<0.05)。ELISA检测结果显示:CLP组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平分别是(26.21±2.96)、(80.80±9.94)和(28.99±3.70)pg/mg,明显高于Sham组的(15.42±1.21)、(47.70±4.77)和(16.86±1.68)pg/mg,及AES+CLP组的(18.93±2.04)、(61.82±7.24)和(23.18±2.21)pg/mg(P<0.05)。结论AES可通过降低肝脏组织中My D88表达和NF-κB p65核阳性率,从而降低肝脏组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平,减轻脓毒症对肝脏的损伤。

自身免疫性肝炎患者外周血CD16阳性单核细胞的特点及临床意义

目的 探讨自身免疫性肝炎（autoimmune hepatieis,AIH）患者外周血CD16阳性单核细胞的频率、表型特点及其临床意义.方法 选取白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心2010年1月至2013年12月收治的初治AIH患者13例和健康对照8例作为研究对象,利用流式细胞术检测入组个体外周血CD16阳性单核细胞频率、膜分子人白细胞抗原DR（HLA-DR）、Toll样受体（toll like receptor,TLR）-2、TLR-4的表达特点及肿瘤坏死因子（tumornecrosis factor,TNF）-α的分泌能力.结果 AIH组外周血CD16阳性单核细胞频率明显升高,组间比较差异有统计学意义（Z=-2.028,P〈0.05）.AIH患者外周血CD16阳性单核细胞频率与血浆天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）水平呈显著正相关（r=0.573,P〈0.05）.AIH患者CD16阳性单核细胞表达HLA-DR较健康对照组明显降低（Z=-2.173,P〈0.05）,而TLR-4表达（Z=-1.992,P〈0.05）和TNF-α的分泌能力明显升高（Z=-2.607,P〈0.05）,组间比较差异均有统计学意义.联合治疗后CD16阳性单核细胞频率明显降低（Z=-2.197,P〈0.05）,HLA-DR的表达水平升高（Z=-2.366,P〈0.05）,而TLR-4水平则显著降低（Z=-2.197,P〈0.05）,均有统计学意义.结论 CD16阳性单核细胞可能参与了AIH的发病机制并与肝组织炎症和坏死有关.