GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其意义

目的:探讨维甲酸-干扰素诱导死亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其临床意义,阐明其在胃癌发生和发展过程中的作用。方法:应用RT-PCR、免疫组织化学染色法和Western blotting法检测48例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中GRIM-19和STAT3的mRNA及蛋白表达水平,并分析其蛋白的表达情况与临床病理特征的关系。结果:GRIM-19 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达减弱(P<0.01),且GRIM-19蛋白表达水平与胃癌分化程度和临床分期有关联(P<0.01);STAT3 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达增强(P<0.01),且STAT3蛋白表达水平与胃癌分化程度、淋巴结转移及临床分期有关联(P<0.01);GRIM-19与STAT3在胃癌组织中表达水平呈负相关关系(r=-0.396,P<0.01)。结论:在胃癌组织中有STAT3持续高表达和GRIM-19低表达共存现象,可能与正常细胞发生恶性转化和异常增殖有关,促进了胃癌的发生和发展。

IP10对HIV/AIDS患者免疫激活作用的研究进展

HIV感染者即使接受了规律有效的抗病毒治疗,其体内仍然存在慢性长期的免疫激活,这已被证明是引起许多HIV相关非AIDS并发症的重要原因。其中固有免疫激活系统产生的趋化因子干扰素-γ诱导蛋白10(interferon gammainduced protein 10, IP10)近年来在HIV研究领域受到更多的关注。IP10是一种由干扰素刺激基因产生的趋化蛋白,在HIV感染者疾病进展,与HIV感染者体内的适应性免疫系统相互作用,影响病毒储存库,引起非AIDS相关并发症方面起到重要作用。降低IP10水平或可为HIV感染者的治疗提供新的思路,为AIDS的功能性治愈奠定基础。

GRIM-19和STAT3在乳腺癌组织中的表达及相关性

目的:通过研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)及其靶基因产物转录信号子与激活子3(STAT3)在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达情况,探讨GRIM-19及其靶基因产物STAT3在乳腺癌中的表达及相关性。方法:采用western blot方法检测20例乳腺癌组织及其癌旁组织中GRIM-19与及下游基因STAT3的表达。结果:GRIM-19蛋白在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P=0.000),STAT3在乳腺癌组织中表达明显高于癌旁组织(P=0.000)。GRIM-19、STAT3表达呈负相关性(r=-0.67,P<0.001)。结论:GRIM-19在乳腺癌组织中低表达,而STAT3呈高表达,两者呈负相关。乳腺癌组织中GRIM-19低表达导致其对STAT3的抑制作用减弱。GRIM-19在乳腺癌组织中的低表达可能与乳腺癌的发生与发展密切相关。

益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响

目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在十二指肠癌中的表达及其意义

目的:研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物信号转导和转录活化因子3(STAT3)在十二指肠癌中的表达,探讨其在十二指肠癌发生和发展中的作用。方法:32例十二指肠癌组织和30例十二指肠炎及溃疡对照组织,采用免疫组织化学方法检测其GRIM-19及STAT3蛋白表达情况。结果:十二指肠癌组织GRIM-19蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达减弱(P<0.05),且与十二指肠癌的分化程度有关(P<0.01);十二指肠癌组织STAT3蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达增强(P<0.01),且与十二指肠癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01);十二指肠癌组织中GRIM-19与STAT3表达呈负相关(r=-0.470,P<0.01)。结论:GRIM-19蛋白在十二指肠癌组织中的低表达或缺失与十二指肠癌的发生和发展密切相关。十二指肠癌组织中有GRIM-19低表达与STAT3高表达共存现象。

运脾清热除湿方治疗幽门螺杆菌相关性胃炎消化不良的临床观察及可能机制

目的观察运脾清热除湿方治疗幽门螺杆菌(Helicobactor pylori,Hp)相关性胃炎消化不良的疗效及可能机制。方法将符合纳入标准的90例门诊患者按照随机数字表法分为3组各30例,中药组单纯口服运脾清热除湿方,中药合并Hp根除组在口服运脾清热除湿方基础上加Hp根除四联疗法,单纯Hp根除组采用Hp根除四联疗法,3组疗程均为2周。观察3组治疗前后中医证候评分及Hp根除率,并通过胃镜下病理活检后免疫组化比较治疗前后白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。结果中药合并Hp根除组Hp根除率为96.7%,高于中药组的43.3%(P<0.05),与单纯Hp根除组的90.0%之间差异无统计学意义(P>0.05)。第2月及第6月随访中,中药合并Hp根除组中医证候改善均优于中药组及单纯Hp根除组(P<0.05),中医证候疗效总有效率为90.0%,优于其余两组(P<0.05)。3组IL-12、IFN-γ表达较治疗前明显降低(P<0.05),中药合并Hp根除组二者下降较中药组及单纯Hp根除组更显著(P<0.05)。结论运脾清热除湿方可有效缓解Hp相关性胃炎消化不良症状,联合Hp根除治疗远期疗效更佳,其机制可能为通过抑制IL-12、IFN-γ的表达起作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胰腺癌组织中的表达及相关性研究

应用RT-PCR和Western Blotting法检测干扰素/维甲酸联合诱导细胞死亡相关基因-19(GRIM-19)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)mRNA及蛋白在26例胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析两者的相关性。结果显示,胰腺癌组织中GRIM-19mRNA及蛋白表达水平低于癌旁组织(P<0.01);胰腺癌组织中STAT3mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.01);两者的表达呈负相关(r=-0.426,P<0.01)。因此,GRIM-19在胰腺癌中呈低表达,而STAT3呈高表达,这种异常表达与胰腺癌的发生发展密切相关。

IRF4与MITF协同作用于络氨酸酶启动子的相关机制

目的:探索干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)与小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)协同作用激活络氨酸酶(tyrosinase,T YR)启动子的作用机制。方法:利用荧光素酶检测、细胞免疫荧光蛋白定位、GST融合蛋白沉降技术(GST-pull down)、免疫共沉淀等多种体外细胞实验学方法,观察IRF4与MITF的协同转录激活效应、亚细胞定位和蛋白-蛋白相互作用情况。结果:IRF4与MITF蛋白共同表达于细胞核;IRF4可以增强MITF在TYR启动子上的转录激活作用,产生协同效应,而在其他MITF目标启动子上不产生;IRF4不能单独激活TYR启动子,且与丧失功能的MITF突变蛋白在TYR启动子上不能产生协同作用;两个蛋白之间无直接相互作用。结论:IRF4与MITF在TYR启动子上产生协同作用,该效应主要依靠MITF进行调节;两个蛋白之间的相互作用可能需要DNA参与。

斑马鱼TANK基因的克隆及功能初探

哺乳动物中,TRAF 家族相关的NF-κB 激活因子(TRAF familymember-associated NF-κB activator,TANK)参与调控核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,在硬骨鱼中,最新研究表明TANK 在青鱼抗病毒天然免疫反应中具有重要的功能,但在模式动物斑马鱼(Danio rerio)中还没有有关TANK 的报道。本研究率先在斑马鱼开展TANK 功能研究,克隆并获得了斑马鱼TANK 基因(Danio rerio TANK,DrTANK),其编码区(coding sequence,CDS)包括1 047 个核苷酸,编码349 个氨基酸。免疫印迹实验显示DrTANK 蛋白大小约50 kD;免疫荧光实验证明DrTANK 主要定位于细胞质中,表明其为一种胞质蛋白;双荧光素酶报告基因研究结果显示,在EPC 细胞中,过表达DrTANK 并不能显著上调干扰素启动子的表达,但聚肌胞苷酸[poly (I:C)]和草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)的刺激能显著增强其诱导干扰素启动子的表达活性。本研究结果表明DrTANK在斑马鱼抗病毒天然免疫反应中可能具有重要作用,为后续DrTANK 功能研究奠定了基础。

Toll样受体4信号通路中髓样分化因子88和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(tol-likereceptor4,TLR4)信号通路下游的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白(toll-like receptor-associated activator of interferon,TRIF)在皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melano ma,CMM)中的表达及与临床特征之间的关联。方法应用免疫组化方法检测40例CMM患者肿瘤组织、10例痣细胞痣患者皮损组织和10例健康皮肤组织中MyD88和TRIF的表达水平,采用SPSS22.0统计学软件进行t检验及Pearson检验处理分析。结果CMM中的MyD88及TRIF的表达强度显著高于痣细胞痣与正常皮肤组织(P<0.05);MyD88、TRIF的表达与CMM患者的年龄、性别等因素无明显相关性,而与发病部位、Clark分级、Breslow厚度、溃疡等因素相关,其中发生于肢端相较于非肢端的恶性黑素瘤表达更显著(P-0.002,0.001);随着Clark分级的增加,原位与浸润肿瘤之间,MyD88、TRIF的表达水平也增加(P=0.001,0.012);随着Breslow厚度的增加,两者表达水平也增加(P=0.004,0.026);合并溃疡的CMM中,MyD88表达增加,有统计学意义(P=0.019);TRIF表达强度无统计学差异(P>0.05);MyD88和TRIF均与CMM患者的淋巴结转移无相关性(P0.05)。结论TLR4下游的MyD88和TRIF相互协同,共同参与CMM的发生与发展。

UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS结合TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路的蛤蚧定喘丸抗炎机制与活性成分探讨

目的探讨蛤蚧定喘丸的抗炎机制,推测蛤蚧定喘丸发挥抗炎功效的关键活性成分。方法依次采用石油醚、无水乙醇、超纯水对蛤蚧定喘丸不同极性的化学成分进行提取;利用2、4、8、16、32、64、128μg·mL^(-1)的醚提物、醇提物、水提物处理RAW264.7细胞,分别通过CellTiter-Lumi(CTL)发光法和钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein/PI)染色法检测细胞活力,确定提取物的安全浓度;利用各提取物处理脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过格里斯试剂(Griess)测定一氧化氮(NO)释放量,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌,筛选具有抗炎活性的提取物。利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-ESI-QE-OrbitrapMS)对有抗炎活性的提取物进行物质分析,推测抗炎活性物质及作用机制,并利用蛋白免疫印迹法(Western blotting)进一步验证其对硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/p-核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路相关蛋白表达的影响。结果醚提物、醇提物、水提物在质量浓度低于64μg·mL-1时均未影响细胞活力。与模型组相比,醇提物在质量浓度大于8μg·mL-1时显著降低NO释放量(P<0.05),醚提物和醇提物在质量浓度高达64μg·mL-1时仍未产生抗炎效果;醇提物显著降低了TNF-α、IL-1β的释放量(P<0.05)。醇提物中共分析出36种主要化学成分。经Western blotting实验验证,与模型组比较,蛤蚧定喘丸醇提物对RAW264.7细胞炎症模型内NLRP3炎症小体、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、p-IκBα的表达均有显著降低作用(P<0.05),而对TXNIP、Toll样受体4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的影响并不显著。结论蛤蚧定喘丸通过抑制TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路以及iNOS、MCP-1的合成发挥抗炎功效,推测巴马汀、麻黄碱、伪麻黄碱、小檗碱、甘草素、药根碱、小檗红碱为其抗炎活性成分。

干扰素／维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因-19、信号转导与转录激活因子3、髓样细胞白血病-1表达与食管鳞癌细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨细胞凋亡相关基因-19、信号转导与转录激活因子-3（STAT3）、髓样细胞白血病-1（Mcl-1）表达与食管鳞癌细胞增殖和凋亡的关系及其机制。方法 采用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法分别检测GRIM-19、STAT3、Mcl-1蛋白以及细胞核增殖抗原（Ki-67）在50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型组织以及50例正常食管黏膜组织中的表达；应用原位杂交法分别检测50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生和50例正常食管黏膜组织中GRIM-19、STAT3、Mcl-1 mRNA的表达；采用原位缺口末端标记法（TUNEL）方法检测食管鳞癌组织中肿瘤细胞的凋亡。结果 GRIM-19蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中阳性率明显低于癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织（蛋白：χ2＝12.130，P＝0.000；mRNA： χ2＝11.830, P＝0.000）；信号转导与转录激活因子-3（STAT3）、Mcl-1蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中的阳性率明显高于癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织（STAT3蛋白：χ2＝4.910，P＝0.000, STAT3 mRNA： χ2＝5.410, P＝0.000; Mcl-1蛋白：χ2＝4.970，P＝0.000, Mcl-1 mRNA： χ2＝5.370, P＝0.000）；GRIM-19蛋白阳性表达组中肿瘤细胞凋亡指数（AI）显著高于阴性表达组（F＝18.355，P＝0.048）；STAT3和Mcl-1蛋白阳性表达组中肿瘤细胞AI显著低于阴性表达组（STAT3蛋白阳性组：F＝19.003，P＝0.036；Mcl-1蛋白阳性组：F＝18.225，P＝0.044）；Ki-67的表达与GRIM-19蛋白、mRNA的表达呈负相关（r＝－0.712，P＝0.040）；与STAT3、Mcl-1蛋白、mRNA的表达均呈正相关（STAT3：r＝0.878，P＝0.039，0.041；Mcl-1：r＝0.653，P＝0.041）。结论GRIM-19低表达、STAT3和Mcl-1高表达可促进食管鳞癌细胞增殖，抑制其凋亡，GRIM-19可能通过下调STAT3表达，并进一步降低Mcl-1表达，从而影响食管鳞癌细胞增殖和凋亡。