祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的:观察祛风通络方对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖及其分泌的转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表达的影响。方法:采用血清药理学方法,体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组、模型组、蒙诺(福辛普利钠)组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测大鼠MC增殖情况,逆转录聚合酶链反应法检测TGF-β1和IL-6mRNA的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高(P<0.05);与模型组比较,祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制(P<0.05),且祛风通络方作用优于蒙诺(P<0.05)。模型组系膜细胞TGF-β1 mRNA表达高于正常对照组(P<0.01);祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF-β1 mRNA表达低于模型组(P<0.01);祛风通络方组与蒙诺组比较,TGF-β1 mRNA的表达降低(P<0.01)。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6 mRNA的表达,与正常对照组比较,模型组IL-6 mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.01);祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较,IL-6 mRNA表达下降(P<0.01);祛风通络方降低IL-6 mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺(P<0.01)。结论:祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF-β1和IL-6 mRNA表达均有明显的抑制作用。

通络糖泰方对糖尿病周围神经病变大鼠炎性细胞因子的影响

【目的】探讨通络糖泰方对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠炎性细胞因子的影响。【方法】选用自发性2型糖尿病GK大鼠,建立由高脂饲料喂养的DPN大鼠模型,随机分为5组:模型组,通络糖泰方高、中、低剂量组(剂量分别为2.88、1.44、0.72 g·kg^(-1)·d^(-1)),西药组(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)二甲双胍+0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1)弥可保)。并选用Wistar大鼠设为正常组。分别给予相应处理4周后采用神经电生理检测大鼠坐骨神经运动/感觉神经传导速度;采用酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)水平。【结果】通络糖泰各剂量组可降低血清炎性细胞因子水平,降低血清MBP水平,提高坐骨神经传导速度,其中高剂量组作用最显著。【结论】通络糖泰方可减轻炎症反应,减少神经脱髓鞘病变,改善神经结构和传导功能,从而达到防治DPN发生发展的作用。

通络糖泰方治疗糖尿病周围神经病变作用机制的网络药理学和分子对接分析

目的:利用网络药理学筛选通络糖泰方(TLTT)治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的活性成分,预测作用靶点及信号通路,探讨其作用机制。方法:采用中药系统药理学分析平台(TCMSP)收集TLTT的主要化学成分及作用靶点;利用基因卡片(Genecards)数据库检索与DPN相关的蛋白;利用STRING数据库和网络可视化软件Cytoscape3.9. 1构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络;通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)和分子对接技术对靶点进行通路富集分析及成分-靶点对接。将30只SD大鼠随机分为对照组、弥可保组和TLTT组,每组10只,给予弥可保和TLTT灌胃制备含药血清;复苏1株RSC96雪旺细胞,设置对照组、高糖模型组、弥可保组和TLTT组,采用细胞计数检测法观察各组细胞存活率,Western blotting法检测各组细胞中丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)和抑癌基因TP53蛋白表达水平。结果:TLTT治疗DPN的有效化合物成分95个,463个靶点,DPN相关蛋白1 187个,137个药物-疾病共同靶点;基因本体论(GO)分析中生物过程、细胞组成和分子功能分别得到5 505个、466个和791个结果;KEGG分析得到253个结果,提示TLTT可能通过调节磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K-Akt)信号通路、液体剪切应力和动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路发挥治疗作用;分子对接分析,TLTT通过槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、山柰酚和常春藤皂苷元等核心成分,作用于AKT1、TP53、肿瘤坏死因子(TNF)和表皮生长因子受体(EGFR)等核心靶点。CCK-8法检测,与对照组比较,高糖模型组细胞存活率明显降低(P<0.05);与高糖模型组比较,TLTT组细胞存活率明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与对照组比较,高糖模型组细胞中AKT1蛋白表达水平明显降低(P<0.05), TP53蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与高糖模型组比较,TLTT组细胞中AKT1蛋白表达水平明显升高(P<0.05), TP53蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:TLTT的主要活性成分槲皮素等可能通过靶向PI3K-Akt等信号通路,促进雪旺细胞存活,升高AKT1蛋白和降低TP53蛋白表达水平,进而发挥治疗DPN的作用。

基于网络药理学-分子对接探讨益气养阴通络方抗类风湿关节炎的作用机制

[目的]采用网络药理学与分子对接探究益气养阴通络方干预类风湿关节炎(RA)的作用机制。[方法]通过中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、本草组鉴(HERB)和文献查阅获得复方活性成分与靶点,采用Genecards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等数据库获得疾病靶点,然后采用数据库计算出益气养阴通络复方成分与疾病的交集靶点。对交集靶点施行功能和通路富集分析,选取益气养阴通络方核心药物靶点与关键化合物施行分子对接。[结果]网络药理学共筛选出益气养阴通络方的83种活性成分和779个潜在靶点,RA相关靶点5393个,交集靶点465个,其中交集核心靶点9个(分别为SRC、STAT3、MAPK3、MAPK1、HSP90AA1、PIK3R1、GRB2、AKT1、PIK3CA)。富集得出PI3K-AKT、癌症相关及神经活性配体-受体相互作用等通路,其中PI3K-AKT信号通路可能是复方干预RA的关键通路之一。对接计算表明,益气养阴通络方的11种主要活性成分与关键靶点SRC、STAT3、PIK3R1、AKT1均有较稳定的结合,其中与AKT的结合可能最大。[结论]益气养阴通络方通过多成分-靶点-通路的方式干预RA,PI3K-AKT、癌症相关及神经活性配体-受体相互作用通路均为可能的作用通路。

基于网络药理学探讨清肺通络方治疗儿童肺炎支原体肺炎的作用机制

目的基于网络药理学方法探讨清肺通络方治疗儿童肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)的潜在作用机制。方法 运用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)结合手动文献检索筛选出清肺通络方的活性成分,并通过该平台对清肺通络方活性成分靶点进行预测,并使用蛋白质数据库(The Universal Protein Resource,UniProt)统一规范预测靶点名称;利用人类孟德尔遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)、药物数据库(DurgBank)、疾病基因数据库(DisGeNET)、人类基因数据库(Gene Cards?:The Human Gene Database,GeneCards)检索儿童MPP的相关靶点;利用Biogenet分别对药物与疾病靶点进行蛋白互作网络(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)进行构建,并提取交集网络以获得清肺通络方治疗儿童MPP的核心靶点;利用基因富集分析在线工具(Metascape)对核心靶点进行基因进行基因本体(Gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。结果 得到药效成分162个、药物靶点276个、儿童MPP靶点589个,最终获得关键靶点120个。清肺通路方主要成分为槲皮素(quercetin)、β-谷固醇(beta-sitosterol)、山奈酚(kaempferol)、常春藤皂苷元(hederagenin)、豆甾醇(Stigmasterol)、异鼠李素(isorhamnetin)、丁子香萜(Mairin)等;核心靶标为微型染色体维持蛋白2(MCM2)、异核核糖核蛋白A1(HNRNPA1)、异核核糖核蛋白K(HNRNPK)、异核核糖核蛋白U(HNRNPU)、雌激素受体1(ESR1)、肿瘤蛋白P53(TP53)、白介素增强子结合因子3(ILF3)等;GO功能富集分析提示清肺通络方通过生物合成、氧化应激、细胞凋亡、转录因子结合等方面发挥作用;KEGG信号通路分析表明主要与癌症中的转录失调通路、细胞凋亡通路、泛素介导的蛋白水解通路、PI3K-Akt信号通路、剪接体通路、MAPK信号通路、Notch信号通路、EB病毒感染、小细胞肺癌通络等相关。结论 清肺通络方通过多成分、多靶点、多途径的作用方式,从细胞凋亡、免疫调节、炎症反应等方面发挥其治疗儿童MPP的作用。

益气养阴通络方经凋亡通路治疗类风湿关节炎的网络药理学预测与验证

目的利用网络药理学方法探讨益气养阴通络方治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的分子机制并通过体外实验进行验证。方法采用网络药理学策略研究益气养阴通络方治疗RA的作用机制。RA的靶基因选自TTD、OMIM和GeneCards数据库。TCMSP数据库用于分析益气养阴通络方的有效化合物和他们的靶基因。益气养阴通络方复合靶基因网络由Cytoscape软件建立。GO富集分析和KEGG通路分析用于确定益气养阴通络方可能参与的生物学过程和信号通路。利用大鼠灌胃获取益气养阴通络方含药血清。使用CCK-8试剂盒检测细胞活力。使用AnnexinⅤ-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。使用Western-blot分析检测pro-Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax和Bcl2的蛋白表达水平。结果网络药理学研究结果显示,与RA相关的基因共3668个,益气养阴通络方的靶基因共251个,其中有161个益气养阴通络方的靶基因与RA相关基因重叠。根据Cytoscape分析,24种活性化合物和61个基因被筛选出来,形成交互网络。GO富集提示外源性凋亡通路是益气养阴通络方治疗RA的核心生物学信号通路之一。KEGG分析显示凋亡信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路和P53信号通路是益气养阴通络方治疗RA的关键通路。体外实验结果显示,益气养阴通络方含药血清及原药均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞的细胞活力,均可显著促进RAW264.7巨噬细胞的凋亡。Western-blot结果显示益气养阴通络方的含药血清及原药均可显著增加RAW264.7细胞中cleaved Caspase-3/pro-Caspase-3、Bax/Bcl2的表达比率。这与网络药理学预测一致。结论网络药理学分析提示益气养阴通络方主要通过24种活性成分及61个靶基因发挥治疗RA功效的。凋亡信号通路是益气养阴通络方治疗RA的重要机制之一。实验室研究证实益气养阴通络方含药血清或原药均可在体外促进RAW264.7巨噬细胞凋亡。

基于网络药理学的健脾通络解毒方治疗慢性萎缩性胃炎作用机制研究

目的:基于网络药理学方法,研究健脾通络解毒方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台和UniProt数据库,获得健脾通络解毒方活性成分及靶点;检索GeneCards、OMIM和DrugBank数据库获取CAG靶点;将二者取交集,获得药物疾病共同作用靶点;之后导入STRING数据库,通过Cytoscape 3.7.2软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络和药物-活性成分-作用靶点-疾病网络图;进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;再运用AutoDock Vina软件进行分子对接。结果:获得健脾通络解毒方有效成分206个,靶点232个,CAG靶点783个,共同作用靶点91个,关键靶点涉及肿瘤蛋白p53(TP53)、蛋白激酶B1(Akt1)、Jun原癌基因(JUN)、白细胞介素(IL)6、血管内皮生长因子A、肿瘤坏死因子、信号传导与转录激活因子3、前列腺素内过氧化物合酶2、胱天蛋白酶3、IL-1β、缺氧诱导因子-1和表皮生长因子等。GO功能富集分析结果表明,生物过程2 024个,细胞组成34个,分子功能120个。通过KEGG分析得到161条信号通路。分子对接结果显示结合力良好。结论:健脾通络解毒方主要通过TP53、Akt1、JUN和IL-6等蛋白,磷脂酰肌醇3激酶-Akt、丝裂原激活的蛋白激酶、肿瘤蛋白53和Janus酪氨酸蛋白激酶-信号转导与转录激活因子等信号通路对CAG发挥作用。

基于网络药理学和分子对接探讨温阳通络方治疗类风湿关节炎的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接探讨温阳通络方治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法利用TCMSP数据库挖掘温阳通络方中的中药所含化学成分及作用靶点并经Uniprot数据库标准化,通过GeneCards数据库获得RA相关基因,筛选出共同靶点,运用Cytoscape3.7.2软件构建活性成分-关键靶点网络,STRING数据库下载蛋白-蛋白相互作用数据,筛选相互作用图的核心靶点,利用R语言clusterProfiler包进行GO功能和KEGG通路富集分析。据化合物和蛋白的相关节点参数进行排序,对核心蛋白和活性成分进行分子对接,以及与RA临床常用治疗药物进行比较,验证网络分析结果。结果筛选得到119个化合物及相应靶点383个,关键成分包括槲皮素、木犀草素、山柰酚等,关键靶点包括白介素6/1β、单核细胞趋化蛋白1等,与疾病靶点相映射后得到57个。GO功能富集分析,包括生物学过程1399条,分子功能60条,细胞组成22条;KEGG通路富集分析显示123条通路,主要涉及糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路等。分子对接表明温阳通络方关键药效分子与核心靶点有良好的结合能力,与阳性对照药物甲氨蝶呤片、来氟米特片等无明显差距,说明预测结果具有一定的可靠性。结论温阳通络方治疗RA具有多成分、多靶点和多途径的特点,为进一步深入研究其作用机制奠定了基础。

补肾通络方治疗膝骨性关节炎机制网络药理学研究

目的探讨补肾通络方治疗膝骨性关节炎可能的作用机制。方法通过BATMAN-TCM数据库筛选补肾通络方的活性成分及潜在靶点。通过CTD数据库、人类孟德尔遗传数据库、GeneCards数据库检索膝骨性关节炎相关基因,并通过CoolGeN数据库筛选;将制剂潜在靶点与疾病相关基因相互映射,得补肾通络方作用于膝骨性关节炎的靶点基因,导入String数据库进行网络拓扑属性分析,筛选重要靶点蛋白。将补肾通络方作用于膝骨性关节炎的靶点基因导入DAVID数据库分别进行基因本体论(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGC)信号通路富集分析。结果筛选出70个活性成分,其中熟地2个、杜仲11个、当归16个、山萸肉2个、怀牛膝3个、寄生5个、独活9个、秦艽3个、防风4个、细辛6个、地龙3个、甘草16个,10个成分为多种中药共有。共得到46个共有靶点,其中重要蛋白靶点10个。共富集到GO条目133个,包括生物过程96个、细胞组分14个、分子功能23个,涉及细胞凋亡过程、胞质溶胶、乙酰胆碱结合等;KEGG信号通路76条,包括肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、破骨细胞分化通路等。结论补肾通络方可能通过多活性成分、多靶点、多通路治疗膝骨性关节炎。