UFLC-DAD-ESI-IT-TOFMSn Analysis on Biotransformation of Tongmai Formula Incubated with Human Intestinal Bacteria

Objective To investigate the biotransformation of Tongmai formula（TMF） in incubated system of human intestinal flora（HIF）. Methods The technique of ultra fast liquid chromatography with diode array detector and coupled with electrospray ionization ion trap time-of-flight multistage mass spectrometry（UFLC-DAD-ESIIT-TOFMSn） was adopted to determine the products of TMF biotransformed by HIF. Results Totally 66 constituents were detected and identified according to the accurate mass measurements（〈 5 ppm） and effective MSn fragment ions. Meanwhile, the potential biotransformational pathways of compounds in TMF transformed by HIF were firstly proposed. Desugarization, hydroxylation, and methylation were the major reactions in the biotransformation mechanism of TMF by HIF. Conclusion This study will be helpful to clarify the material basis of pharmacological activities from TMF in vivo.

基于消斑通脉方抗动脉粥样硬化作用机制的网络药理学分析和体外实验验证

目的:利用网络药理学分析方法初步预测消斑通脉方抗动脉粥样硬化(AS)的潜在作用通路和靶点,联合体外细胞实验对其可能机制进行验证。方法:采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、GeneCards、Swiss Target Prediction和Uniprot等数据库,收集消斑通脉方中活性化合物及对应靶点信息,构建“成分-靶点-疾病”网络,通过蛋白-蛋白互作(PPI)网络预测可能的作用靶点和通路,对交集靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMCs)并鉴定,采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导HA-VSMCs异常增殖并进行鉴定。MTT法检测不同浓度消斑通脉方作用后各组HA-VSMCs增殖活性,确定消斑通脉方安全性。HA-VSMCs分为空白组、模型组(诱导HA-VSMCs异常增殖)、瑞舒伐他汀组(诱导HA-VSMCs异常增殖后采用4μmol·L^(−1)瑞舒伐他汀干预)及低、中和高剂量消斑通脉方组(诱导HA-VSMCs异常增殖后分别采用0.025、0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方干预)。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组HA-VSMCs培养上清中人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组HA-VSMCs中核因子κB(NF-κB)p65 mRNA和成纤维细胞生长因子2(FGF2)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HA-VSMCs中NF-κB p65和FGF2蛋白表达水平。结果:消斑通脉方中含有103种活性成分,可通过作用于189个靶基因发挥抗AS作用,潜在作用靶点包括IL-6、IL-8、血管内皮生长因子A(VEGFA)、核因子κB1(NF-κB1)和RELA(NF-κB p65)等。GO功能分析和KEGG信号通路富集分析,消斑通脉方通过调节脂质、缺氧诱导因子1(HIF-1)、表皮生长因子(EGF)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和NF-κB等信号通路发挥抗AS作用。细胞形态表现和免疫荧光染色结果证明细胞为HA-VSMCs。油红O染色,可观察到大量红色脂滴,表明造模成功。MTT法检测,在一定剂量范围内消斑通脉方对HA-VSMCs增殖率无明显影响,安全性良好。ELISA法检测,与模型组比较,瑞舒伐他汀组和不同剂量消斑通脉方组HA-VSMCs培养上清中MCP-1和IL-6水平降低(P<0.05或P<0.01),0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMC培养上清中IL-8降低(P<0.01);与瑞舒伐他汀组比较,不同剂量消斑通脉方组HA-VSMCs培养上清中MCP-1降低(P<0.01),0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMCs培养上清中IL-8降低(P<0.01)。与模型组比较,瑞舒伐他汀组和不同剂量消斑通脉方组HA-VSMCs中NF-κB p65 mRNA表达水平降低(P<0.01),瑞舒伐他汀组及0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMCs中FGF2 mRNA表达水平降低(P<0.01);与瑞舒伐他汀组比较,0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMCs中NF-κB p65和FGF2 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,瑞舒伐他汀组和不同剂量消斑通脉方组HA-VSMCs中NF-κB p65和FGF2蛋白表达水平降低(P<0.01);与瑞舒伐他汀组比较,0.050和0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMCs中NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.01),0.100 mg·L^(−1)消斑通脉方组HA-VSMCs中FGF2蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:消斑通脉方具有抗炎、抑制HA-VSMCs增殖和抗AS作用,其作用机制可能与NF-κB/FGF2通路失活有关。

基于肠道菌群及其代谢产物SCFA探讨左归降糖通脉方对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的基于肠道菌群及代谢产物短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFA)探讨左归降糖通脉方(Zuogui Jiangtang Tongmai formula,ZJTF)干预2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的可能机制。方法取12只SD大鼠为空白(Control)组,喂食普通饲料;48只大鼠为造模组,以高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozocin,STZ)制备T2DM模型。造模成功后随机分为模型(DM)组、ZJTF低剂量(ZJTF.L,12 g·kg^(-1))组、ZJTF高剂量(ZJTF.H,24 g·kg^(-1))组、二甲双胍150 mg·kg^(-1)+阿托伐他汀10 mg·kg^(-1)(M.A)组,药物干预4周。监测大鼠精神状态、体质量与随机血糖;ELISA检测血清胰岛素(insulin,INS)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、炎症因子的水平;生化分析法检测血脂常规含量;HE染色观察结肠病理改变;16SrRNA观察肠道菌群结构;GC-MS检测血清SCFA水平。结果与Control组比较,DM组出现多饮、多食、多尿、体质量减轻等症状;血糖、INS、HbA1c明显上升(P<0.01);总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)明显降低(P<0.01);白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平均明显升高(P<0.01);结肠固有层出现部分中断和消失,细胞肿胀、绒毛紊乱。DM组厚壁菌门和变形菌门、肠杆菌科、埃希菌-志贺菌属的相对丰度增加;血清乙酸、丁酸含量下降(P<0.05,P<0.01)。与DM组比较,ZJTF组血糖、INS、HbAlc均明显降低(P<0.05,P<0.01);TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高(P<0.01);IL-1β、IL-6及TNF-α水平明显降低(P<0.01);结肠细胞肿胀及炎性浸润缓解;拟杆菌门和疣微菌门、乳酸菌科、阿克曼菌属丰度增加;血清丁酸、乙酸含量升高(P<0.05,P<0.01)。结论左归降糖通脉方可能通过调节肠道菌群和SCFAs水平起到降血糖、稳血脂、减轻炎症反应的作用。

崔应麟从“虚、瘀、痰、浊”论治脑梗死经验

脑梗死是神经内科的常见疾病,其发病率高、死亡率高等特点,严重威胁人类健康。脑梗死病因病机复杂多变,历代医家均有不同的见解。崔教授从事内科疾病研究多年,认为脑梗死发生发展的核心病机为“元气亏虚,瘀浊阻络”,虚、瘀、痰、浊是其主要病理因素,提出以“益气活血,通络祛浊”为基本治则。临床在论治脑梗死时既注重虚、瘀、痰、浊单一病邪性质的变化,又注重其相互兼具所导致病机的变化。故以“益气活血,通络祛浊”为基本原则应用时,亦根据病程及证候变化随证加减,根据多年临证经验,组方益气通脉方,用之临床,效果显著。

益气通脉方联合阿托伐他汀治疗缺血性中风恢复期气虚血瘀型合并颈动脉粥样硬化斑块

目的观察益气通脉方联合阿托伐他汀治疗缺血性中风恢复期气虚血瘀型合并颈动脉粥样硬化斑块的疗效。方法将80例动脉粥样硬化性脑梗死患者随机分为治疗组和对照组,对照组给予阿托伐他汀钙片及其他常规治疗,治疗组在对照组基础上加用益气通脉方,疗程12周。检测临床疗效、NIHSS评分、Barthel指数评分、中医证候评分、血脂4项、血清APN、CTRP5以及颈动脉彩超指标。结果治疗后治疗组总有效率(95.0%)高于对照组(80.0%)(P<0.05);两组治疗后NIHSS评分、中医证候评分降低(P<0.05),Barthel评分提升(P<0.05),斑块明显改善(P<0.05),血脂4项、CTRP5水平均降低(P<0.05);血清APN升高(P<0.05),治疗组较对照组方案更优(P<0.05)。结论益气通脉方联合阿托伐他汀钙片的治疗效果更佳,说明联合用药的共同作用较好。

基于TGF-β/Smads信号通路探究养心通脉方调控慢性心力衰竭血瘀证大鼠的作用机制

目的基于转化生长因子-β(tansforming growth factor-β,TGF-β)/Smads信号通路探讨养心通脉方对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)血瘀证大鼠心肌纤维化和炎症损伤的影响。方法通过随机数字表法将45只SD雄性大鼠分为造模组(27只)、正常组(12只)和假手术组(6只),适应性喂养1周后行冠脉结扎术造模,术后10 min行心电图检测,6周后检测超声心动图、血清N端前脑钠肽(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)含量和血液流变学相关指标。成模后,运用随机数字表法从造模组中取18只大鼠均分为中药组、西医组和模型组,中药组予养心通脉方溶液12 g/kg灌胃,西药组予以缬沙坦溶液0.8 g/kg灌胃,正常组、假手术组和模型组予等量蒸馏水,每日1次,持续4周。药物干预结束后,超声心动图检测心功能指标,HE染色和Masson染色观察大鼠心肌组织病理改变及纤维化程度,ELISA法检测大鼠血清NT-pro BNP和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)含量,Western blot法检测大鼠心肌组织TGF-β/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与正常组比较,造模组大鼠心电图出现明显的ST段上抬,大鼠血清NT-pro BNP含量显著升高(P<0.01),左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)水平显著下降(P<0.01),全血高切黏度、中切黏度、低切黏度显著升高(P<0.01)。药物干预4周后,与正常组比较,模型组LVEF明显降低(P<0.01),血清NT-Pro BNP、TNF-α、IL-1β及IL-6水平上升(P<0.01),IL-10水平明显下降(P<0.01),心肌组织ANGPT2、TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组LVEF水平上升(P<0.01),血清NT-pro BNP和TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.01),IL-10含量增多(P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01)。结论冠脉结扎术可成功制备CHF血瘀证大鼠模型,养心通脉方可能通过抑制CHF血瘀证模型大鼠TGF-β/Smads信号通路,调控机体炎症损伤和纤维化机制。

养心通脉方对心肌缺血再灌注损伤血瘀证大鼠心肌损伤的治疗作用及其机制

目的探讨养心通脉方(YTF)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)血瘀证大鼠心肌损伤的治疗作用并分析其相关机制。方法Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、阴性对照组、阳性对照组、YTF低剂量组、YTF中剂量组、YTF高剂量组,每组10只。除正常对照组外均建立大鼠MIRI血瘀证模型,YTF低剂量组、YTF中剂量组、YTF高剂量组分别给予4.725、9.450、18.900 g/kg YTF灌胃,阳性对照组给予10.710 g/kg冠心苏合丸混悬液灌胃,阴性对照组给予等体积生理盐水灌胃,每日2次,连续给药14 d;正常对照组常规饲养不灌胃。透射电镜观察各组心肌组织及线粒体超微结构,TUNEL荧光染色观察各组心肌细胞凋亡情况,酶标仪检测各组心肌细胞线粒体膜肿胀度(OD540)及线粒体超氧阴离子含量。结果透射电镜观察结果显示,正常对照组心肌肌丝排列整齐,肌节规则,结构清晰,线粒体外膜完整,嵴结构正常,排列致密;模型对照组、阴性对照组心肌肌节断裂,核周间隙增宽,线粒体排列紊乱,部分外膜模糊甚至破裂变形,线粒体嵴结构部分缺失,出现少量自噬体包裹线粒体及细胞质,有少量溶酶体出现;阳性对照组及YTF中、高剂量组线粒体排列较致密,肌丝断裂情况轻,肌节整齐,线粒体外膜及嵴结构较为清晰,可见早期小自噬体数量增多,溶酶体及被自噬体包裹的线粒体增多;YTF低剂量组线粒体肌丝较为完整但肌节不清,线粒体外膜及嵴结构模糊不清,早期小自噬体数量上升。模型对照组、阴性对照组心肌细胞凋亡率高于正常对照组,阳性对照组、YTF中剂量组心肌细胞凋亡率低于阴性对照组(P均<0.05)。模型对照组、阴性对照组OD540低于正常对照组,阳性对照组与YTF低剂量组、YTF中剂量组、YTF高剂量组OD540高于阴性对照组(P均<0.05)。模型对照组、阴性对照组心肌组织超氧阴离子含量高于正常对照组,YTF高剂量组心肌组织超氧阴离子含量低于阴性对照组(P均<0.05)。结论YTF可改善MIRI血瘀证大鼠的心肌损伤,其机制可能与促进线粒体选择性自噬、降低超氧阴离子含量、减轻线粒体膜肿胀,从而减缓心肌细胞凋亡有关。

基于血浆非靶向代谢组学和肠道菌群16S rRNA测序技术探讨养心通脉方干预冠心病血瘀证大鼠的作用机制

目的探讨肠道菌群和血浆代谢物与冠心病血瘀证的关联性,及养心通脉方干预冠心病血瘀证的作用机制。方法18只SPF级雄性SD大鼠建立冠心病血瘀证模型后,随机分为模型组、养心通脉方组和阿托伐他汀钙组,每组各6只,灌胃干预2周。另取6只一直正常饮食的大鼠作为正常对照组。苏木精-伊红染色法(HE)染色观察大鼠冠状动脉病理变化及检测心电图、血流变和血脂生化指标,液相色谱-串联质谱联用技术(LCMS/MS)技术分析大鼠血浆非靶向代谢组学,16S rRNA测序技术分析回肠黏膜菌群以及对两者代谢组学进行相关性分析。结果与正常组相比,模型组大鼠全血黏度、总胆固醇酯和低密度脂蛋白胆固醇酯均显著升高(P<0.05);模型组冠状动脉内皮细胞增生破坏,内皮下有大量空泡状改变,药物组冠状动脉内皮病变程度减轻。LCMS/MS结果共筛选鉴定出血清33种潜在内源性代谢物,其中1-甲基组氨酸、N-乙酰组胺、黄体酮和脱氧皮质酮可能成为冠心病血瘀证疾病模型的差异性代谢物,16S rRNA结果显示养心通脉方组肠道菌群的多样性和丰富度有所改善,通过相关性分析,与冠心病血瘀证高度相关的变形杆菌门Hydrogenophaga、Limnohabitans和Polaromonas菌属等与5-羟基吲哚、N-乙酰组胺和黄体酮等血浆代谢产物呈正相关(P<0.01),与L-精氨酸、高精氨酸和Boc-β-氰基-L-丙氨酸等血浆代谢产物呈负相关(P<0.01);经养心通脉方干预后与其高度相关的拟杆菌门(乳杆菌目)Lactobacillus菌属、泉古菌门Candidatus Nitrososphaera菌属及放线菌门Corynebacterium菌属与Boc-β-氰基-L-丙氨酸、水苏碱和柚皮素等血浆代谢产物呈正相关(P<0.05),与5-羟基吲哚、N-乙酰组胺和油酰单乙醇胺等呈负相关(P<0.05)。结论养心通脉方可能通过调节冠心病血瘀证大鼠肠道菌群改善血浆代谢,达到减缓冠心病血瘀证之目的。

化浊通脉法治疗代谢相关脂肪性肝病的真实世界疗效与安全性评价

目的:探究化浊通脉法中药联合水飞蓟宾胶囊治疗代谢相关脂肪性肝病的疗效与安全性。方法:回顾性收集221例MAFLD患者资料,按治疗方式分为化浊通脉法中药联合水飞蓟宾组(中药组)66例和水飞蓟宾单药组(对照组)155例,倾向性评分匹配后比较两组患者治疗前后的一般情况、彩超、肝功能、血脂、中医证候积分及安全性指标。结果:最终匹配选取MAFLD患者98例,每组各49例。治疗8周后,中药组患者GGT、TG改善程度优于对照组(P<0.05);治疗12周后,中药组患者ALT、AST、CHOL改善程度优于对照组(P<0.05);在改善HDL-C、LDL-C和中医证候积分方面,中药组患者疗效在治疗全程均显著优于对照组(P<0.01)。结论:化浊通脉法中药联合水飞蓟宾可有效改善MAFLD患者的肝功能指标、血脂水平及中医证候方面疗效显著,安全性良好,适于临床应用。

养心通脉方有效成分部位的最佳剂量配伍抗急性心肌缺血的研究

目的确定养心通脉方的"有效成分部位方"的最佳剂量。方法对已确定的人参皂苷、人参多糖、丹参酮ⅡA、总生物碱和总挥发油5个有效成分部位同剂量水平组成方剂进行L9(34)正交试验,观察分析各方剂对对心肌缺血大鼠模型心电图J点位移及血液流变学指标的影响。结果人参皂苷、丹参酮ⅡA、人参多糖3水平、总生物碱和总挥发油在1水平时能够有效改善心肌缺血大鼠的心电图;而人参皂苷3水平、丹参酮ⅡA3水平、人参多糖2水平、总生物碱及总挥发油在1水平时能够改善心肌缺血大鼠血液流变学的指标。结论以人参皂苷3水平(34.33g生药/kg体质量),丹参酮ⅡA3水平(1.27g生药/kg体质量)、人参多糖2水平(4.77g生药/kg体质量)、总生物碱1水平(0.67g生药/kg体质量)、总挥发油1水平(62.2mL生药/kg体质量)为养心通脉有效成分部位方的最佳配伍剂量。

基于网络药理学探究养心通脉方对冠心病的作用机制

目的:利用网络药理学技术更全面地预测养心通脉方(Yangxin Tongmai Formula,YTF)对冠心病(coronary heart disease,CHD)潜在的作用机制。方法:利用药物靶点数据库分析平台,基于化合物ADME特性筛选养心通脉方中相关活性成分,预测化合物的作用蛋白质靶点,进一步构建靶点蛋白数据集;基于Genecards数据库获取CHD高度相关蛋白靶点,构建数据集;将养心通脉方与CHD靶点数据集进行比对与分析,并基于共同靶点构建蛋白质-蛋白质互作网络(Protein-protein interaction,PPI)网络,靶点通路网络(target-pathway network)及进行生物信息学分析。结果:经分析养心通脉方中62个化合物,99个作用蛋白质靶点以及与CHD相关的20个共同靶点(占养心通脉方化合物靶点的25%)发现,相关靶点共有55个的生物学过程及39条通路被显著富集(P <0. 05),本次预测结果与养心通脉方前期已证实的成果在功效及机制上有一定契合。结论:本研究基于网络药理学通,过构建多维调控网络初步揭示了养心通脉方对CHD的作用机制,为其的临床应用提供了理论依据。

养心通脉有效部位方对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的探讨养心通脉有效成分部位方(YTⅡ)对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响。方法制备养心通脉有效部位方组(YTⅡ组)、养心通脉方原方组(YTⅠ组)、麝香保心丸组(SBW组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子组(bFGF组)和无药血清组(KX组)各组的含药血清,另外设置空白组,共6组,每组25个鸡胚。复制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型。从0h、24h、48h、72h和96h共5个时间点,观察YTⅡ及各组对CAM模型鸡胚存活情况、CAM标本形态和CAM新生血管数量的影响。结果分组加药后96h时,bFGF组和YTⅡ组存活率明显高于其它各组。加药72h后各药物组粗大血管及细小分支迅速增多,血管网络清晰,呈叶脉样,放射性生长,加药96h时更明显,尤以bFGF组和YTⅡ组血管生长最为旺盛。加药48h,72h和96h,各药物组与空白组、KX组比较,均具有显著性差异(P<0.05),各组血管新生数呈bFGF组>YTⅡ组>YTⅠ组>SBW组>KX组>空白组的趋势。结论YTⅡ与YTⅠ、SBW、bFGF同样具有促血管新生的作用,且YTⅡ作用与bFGF作用相当,明显优于YTⅠ和SBW。

平肝通脉方对高血压病肝阳上亢夹血瘀证病人中医证候及颈动脉IMT的影响

目的观察平肝通脉方对高血压病肝阳上亢夹血瘀证病人中医证候及颈动脉内膜中层厚度的影响。方法将82例高血压病肝阳上亢夹血瘀证病人随机分为治疗组(42例)和对照组(40例)。治疗组口服中药平肝通脉方和苯磺酸氨氯地平片,对照组口服苯磺酸氨氯地平片,服药24周时观察两组降压疗效、中医证候疗效及治疗前后颈动脉内膜中层厚度的变化。结果治疗组降压显效率为61.90%,总有效率为92.86%,对照组降压显效率为40.00%,总有效率为82.50%,两组总有效率比较差异无统计学意义,但两组显效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组中医证候总有效率为92.86%,对照组为67.50%,两组比较有统计学意义(P<0.01)。治疗后两组颈动脉内膜中层厚度均降低(P<0.05或P<0.01),两组治疗前后差值比较有统计学意义,治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗组和对照组的不良反应发生率分别为7.14%和10.00%,两组比较差异无统计学意义。结论平肝通脉方对高血压病肝阳上亢夹血瘀证病人有较好的临床疗效,且能降低病人的颈动脉内膜中层厚度。

中药复方祛瘀化痰通脉方在小型猪体内的药代动力学行为研究

目的探讨祛瘀化痰通脉方(QYHT)在假手术组和模型组小型猪体内药代动力学特征,为QYHT的药效物质基础研究及临床应用提供参考。方法采用高脂饲料喂养结合冠状球囊拉伤内皮损伤的方法建立痰瘀互结证冠心病小型猪模型,连续给药8周后不同时间点取血,对血浆中各成分的浓度进行测定,并计算药代动力学参数。结果建立了小型猪血浆中9个成分含量测定方法,经方法学验证,专属性、线性范围、准确度和精密度、提取回收率、稳定性以及基质效应均符合体内药物分析的要求。给药后假手术组可检测到3个入血成分,模型组检测到5个入血成分。结论QYHT在假手术组和模型组动物体内的处置过程存在一定差异。该测定方法适用于检测QYHT在小型猪血浆中的药代动力学研究,可为该复方的临床合理安全用药提供科学参考。

养心通脉方研究述评

养心通脉方是我国著名中医学家秦伯未先生运用"扶养心气,和通血脉"之法治疗胸痹心痛的有效名方,现在已经提取其有效成分制成养心通脉有效部位方。目前多位学者已经在临床疗效评价、基础机理方面开展研究,发现临床方面治疗冠心病心血瘀阻证、高脂血症、高脂血症伴胰岛素抵抗具有较好的疗效,能有效的改善临床症状和生化指标。在机理学方面发现养心通脉方能够改善心肌缺血、增加冠状动脉血流量、促进血管再生、动员骨髓间充质干细胞参与缺血心肌的修复等功能,并通过蛋白质组学技术发现了其作用的相关蛋白。

HPLC法同时测定通脉方中三种活性成分

目的建立基于HPLC法的通脉方中三种化合物的同时测定方法,为活性导向的中药质量控制奠定基础。方法采用高效液相色谱法,以Agilent Eclipse XDB C18为色谱柱,以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,梯度程序为:0~10min,5%~15%A;10~20min,15%~20%A;20~40min,20%~30%B;40~50min,30%~40%A;50~60min,40%~5%A;流速1.0m L·min-1,柱温26℃,检测波长:254nm。结果 ,毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量在24.19~38.06μg·m L-1、水仙苷在108.08~153.59μg·m L-1、巴马汀在19.52~31.51μg·m L-1之间,线性范围r2在0.9991~0.9993之间,精密度0.14%~0.17%,稳定性0.001%~0.010%,回收率97.82%~103.65%,10批通脉方供试品的HPLC指纹图谱相似度为0.87。结论该方法快速、高效、准确,针对性强,能够基于功效主治对通脉方进行质量评价研究。

加减养心通脉方干预对冠心病血瘀证亚型患者CTNNB1基因表达的影响及疗效观察

目的探讨加减养心通脉方对冠心病血瘀证亚型CTNNB1基因表达及临床疗效观察。方法选择符合冠心病血瘀证诊断标准患者23例,按胸痹血瘀证亚型诊断标准分成冠心病气虚血瘀证组7例、气滞血瘀证组8例和痰浊血瘀证组8例,进行为期1个月的加减养心通脉方的治疗,采用实时荧光定量PCR仪检测服药前后CTNNB1基因表达的变化,观察服药前后血脂血糖临床疗效的变化。结果治疗后不同证型的患者相比治疗前CTNNB1基因表达改变不明显,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后相比治疗前血糖值均有所下降,气虚血瘀组治疗前后血糖值改变差异有统计学意义(P<0.05);不同证型的患者中TC、TG在治疗后,比治疗前值均有所下降,3组治疗前后TC值改变差异有统计学意义(P<0.05);气滞血瘀证组、气虚血瘀证组TG改变有统计学意义(P<0.05);不同证型患者的HDL、LDLC值在治疗后相比治疗前均有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论加减养心通脉方对冠心病血瘀证3个亚型(气虚、气滞、痰浊)CTNNB1基因表达无明显的调控作用,以方测证,说明CTNNB1基因的表达可能不是冠心病血瘀证的发病机制之一。但该方可以明显改善冠心病血瘀证亚型血糖及脂类异常,有较好的降脂和降糖作用。

基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对大鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制。方法将30只SD大鼠随机均分为空白组(同体积蒸馏水)、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清。将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含药血清、尼莫地平+格列齐特含药血清、FPS-ZM1、PDTC干预。通过形态学观察及CCK-8法检测细胞存活率,采用Western blot、RT-PCR法检测RAGE、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白和mRNA表达情况。结果与空白组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01);与模型组比较,左归降糖通脉方组及尼莫地平+格列齐特组细胞存活率上升(P<0.05);相较于空白组,模型组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显上调(P<0.01);相较于模型组,左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、FPS-ZM1组及PDTC组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显下调(P<0.05);左归降糖通脉方组与FPS-ZM1组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论左归降糖通脉方可能通过抑制AGEs与RAGE的结合,抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活,下调下游炎症因子的释放,对BMECs起到保护作用。

调脂通脉方对动脉粥样硬化兔模型血管重塑的影响

目的探讨调脂通脉方对动脉粥样硬化兔模型血管重塑相关影响因素的调控机制。方法通过高脂饲料饮食及球囊损伤术建立动脉粥样硬化兔模型,54只兔随机分成5组,正常组、模型组、假手术组、阿托伐他汀组(2.2 mg/kg)和调脂通脉方组(8 g/kg);除正常组外,其余四组选择45天、90天两个观察点,45天时观察动物30只,90天时观察动物24只。对各组兔模型左颈总动脉的管腔内径、内中膜厚度和收缩期峰值流速采用超声测量;对颈总动脉作病理学观察;采用酶联免疫吸附测定法检测血清MMP-1、MMP-2、TIMP-1、PD-ECGF、UA水平。结果两个时间点,模型组兔血清中MMP-1、MMP-2、PD-ECGF、UA表达水平明显高于假手术组(P<0.01),TIMP-1低于假手术组(P<0.01)。调脂通脉方组家兔血清MMP-1、MMP-2、PD-ECGF、UA水平较模型组明显下降(P<0.01),TIMP-1水平明显升高(P<0.01),与阿托伐他汀组无明显差异。结论调脂通脉方降低了MMP-1、MMP-2、PD-ECGF、UA水平,提高了TIMP-1水平,从而影响动脉粥样硬化的血管重塑,进而改善动脉粥样硬化,可能是其作用机制。

BP神经网络结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺

采用BP神经网络结合多指标综合评分法优选通脉复方提取工艺,为该工艺工业化生产提供参考。以黄芪甲苷,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、马钱苷、毛蕊花糖苷、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、总多糖含量及干膏率为综合评价指标,按照L_9(3~4)正交表安排进行试验,考察提取次数、提取时间、加水量对综合评分的影响,以正交试验数据为基础,采用BP人工神经网络优化通脉复方提取工艺。结果表明最佳提取工艺为11倍水,提取4次,每次40 min;马钱苷,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、羟基红花黄色素A、毛蕊花糖苷、丹酚酸B、黄芪甲苷提取量平均值分别为6.9754,0.3315,14.8921,0.2956,55.2634,0.8647 mg·g^(-1);总多糖得率平均值为615 mg·g^(-1),干膏率平均值44.21%。BP人工神经网络结合综合评分可用于优选通脉复方提取工艺,无需多次试验便可为优化条件提供参考。