蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Toreniafournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构。用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞。用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰。在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%)。用酶解-解剖方法也可分离出授粉14h后的合子细胞。

蓝猪耳受精生物学研究进展

蓝猪耳(Torenia fournieri L.)胚囊半裸露,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞、助细胞及部分中央细胞的形态结构,有助于原位观察卵细胞在受精前后的变化状态,被认为是研究被子植物体内受精机理的一种模式植物。综述了蓝猪耳的受精机理:花粉管定向进入胚囊的方式与机理、钙在受精过程中的作用、受精前后胚囊细胞骨架的动态变化。简要介绍了离体受精技术在蓝猪耳受精生物学中的发展应用。根据前人对蓝猪耳的研究成果并结合我们的研究,指出蓝猪耳在受精生物学中的应用,特别是借助离体受精技术平台,将具有更大的研究前景。

蓝猪耳小孢子发生和雄配子体发育

利用常规石蜡切片和超薄切片技术研究蓝猪耳(Torenia fournieri)小孢子发生和雄配子体发育过程。蓝猪耳雄蕊4枚,花药具4个花粉囊。小孢子母细胞经减数分裂成四分体,其排列方式为四面体形或左右对称形。成熟花粉属2细胞型,具3个萌发孔。花药壁发育为双子叶型,腺质绒毡层。小孢子母细胞在四分体时期频繁出现细胞质降解的异常现象,其它发育阶段均正常;小孢子母细胞不正常的减数分裂可能导致花粉败育,这可能是蓝猪耳结实率低的原因之一。

根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究

研究了根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因子。结果表明,以蓝色花类型蓝猪耳5～6周的叶片为外植体,在OD600为0.5～0.6的活化菌液中浸染5～10min,暗培养4d后,在愈伤组织诱导培养基(MS+BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L)上生长14d,获得抗性愈伤组织;经芽诱导培养基(1/2MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L)培养28d得到抗性芽;生根培养基(1/2MS)上培养14d得到抗性植株。经PCR检测证实外源基因已整合到蓝猪耳基因组中,转化率达13%～14%。Cef和Hyg浓度对转化影响较大,转化的不同阶段其适宜浓度不同。

蓝猪耳45S rDNA荧光原位杂交作图及其核型分析

以番茄45S rDNA为探针，结合核型分析和荧光原位杂交（FISH）技术，对蓝猪耳染色体的核型以及45S rDNA在染色体上的定位进行了研究。结果表明，蓝猪耳染色体的核型为1A型，核型不对称系数为57．46，染色体相对长度变异范围为4．455％～6．990％，最长染色体与最短染色体的比值为1．57，染色体相对长度组成为2L＋4M2＋12M1，核型公式为2n=2x=18=14m＋4sm（2SAT）。在蓝猪耳体细胞有丝分裂中期染色体和间期核中，均发现45S rDNA有2个杂交信号，且信号在有丝分裂中期位于第5对染色体短臂近着丝粒处。基于上述结果绘制了蓝猪耳染色体的核型图。

蓝猪耳离体受精初试

用体内-体外方法分离了蓝猪耳精细胞。用酶解和解剖方法分离了其成熟卵细胞。分离的精、卵细胞用电融合介导尝试了体外诱导融合。在合适的渗透压(6%甘露醇)和合适的氯化钙(0.04%CaCl2·2H2O)溶液中,用交流电场为30～35V,10～25s使精、卵细胞排队;用直流电场400～600V,45～50μs的脉冲穿孔条件可诱导30%的精、卵细胞融合和70%以上的卵细胞之间的融合。尝试了人工合子的单细胞培养但未获成功。诱导蓝猪耳精、卵细胞融合的条件与玉米和水稻不同。