苦参化学成分及其生物碱抑菌活性研究

目的 :研究苦参(Sophora flavescenes Ait)总生物碱及其主要生物碱的抑菌效果,探究苦参开发消洗剂的可行性。方法 :采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱等技术手段对苦参干燥根进行分离纯化并通过波谱数据对化合物进行结构鉴定。采用药物二倍稀释法与菌落计数相结合法考察苦参总生物碱及其主要生物碱对金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、铜绿假单胞菌、乙型溶血型链球菌和白色念珠菌的抑菌作用,并测定各成分用药时的抑菌浓度范围。结果 :从苦参中分离了16个单体化合物,包括9个生物碱类成分和7个黄酮类成分。药敏结果显示,5个样品对所选菌株均具有一定抑菌活性;苦参总生物碱抑菌作用强于各单体生物碱;各单体对金葡球菌的抑菌效果强于其他4种菌;苦参碱和槐果碱对金黄色葡萄球菌的抑菌作用均强于自身氧化物。结论 :苦参中总生物碱及其主要生物碱成分存在明显的抑菌作用,各单体间抑菌活性各有不同,且对各菌种的抑菌作用也不甚相同,可为苦参开发消洗剂的可行性奠定基础。

氮肥对苦参生长和生物总碱的效应

对苦参进行驯化栽培是解决其供需矛盾的主要途径,也是保护生态环境最有效的措施。本试验研究氮肥对苦参生长、生物总碱含量和生物总碱产量的效应。采用盆栽试验,施纯氮量设0,50,100,150和200 mg/kg五个水平,完全随机设计。结果表明,施用氮肥对苦参生长以及苦参总碱含量均有显著促进效应。各施氮处理根干重均与对照差异显著,当施纯氮150 mg/kg时根干重最高,比对照增加42%;根直径随施氮量提高呈增加趋势,当施纯氮150 mg/kg时根直径最大,比对照增加21.1%;叶绿素总含量在施纯氮100 mg/kg时最高,比对照增加33.8%;苦参总碱含量在施纯氮100 mg/kg时最高,比对照增加35.7%;单株苦参总碱产量在施纯氮150 mg/kg时最高,较对照增加90.5%。氮对根干重增加效应主要是由于根直径增加引起根体积增加所致,苦参叶片中叶绿素含量随施氮量增加有利于苦参总碱含量提高。

磷肥对苦参生长和生物总碱的效应

采用盆栽试验,设施P_2O_5 0、15、30、60 mg/kg 4个水平,研究了磷肥对苦参生长、生物总碱含量和生物总碱产量的效应。结果表明,施用磷肥对苦参生长以及苦参总碱含量均有显著促进效应。施P_2O_5 30 mg/kg苦参根鲜重、干重和根直径显著高于对照和60 mg/kg处理,分别较对照增加23.5%、18.5%和14%;施P_2O_515 mg/kg处理苦参叶绿素含量、总碱含量和单株总碱产量显著高于对照和60 mg/kg处理,分别较对照增加17.1%、34.8%和56.3%。磷对单株干重增加效应主要是由于主根干重增加所致;苦参根中苦参总碱含量的增加则是由于叶片中叶绿素含量增加。施磷量30 mg/kg根干重最高,施磷量15 mg/kg苦参总碱含量最高。综合分析表明,获得较高的单株苦参总碱产量适宜的施P_2O_5量是15 mg/kg。

苦参生物碱工业生产新方法的探究.

用不同浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参(Sophoraflavescens)总生物碱进行提取和纯化,并对不同的苦参生物碱纯化工艺进行比较和研究。结果表明,用60%的乙醇进行提取和用阳离子树脂进行纯化的工艺过程生物碱收率较高,生产成本较低,工序较为简单,有一定的进步性,更适宜工业化的生产。

苦参植株中总生物碱的分布及含量测定

选用酸性染料络合显色法测定了江苏盱眙产苦参的根、茎、叶、种子等部位中苦参总碱的含量 ,为充分利用苦参全植株提供了一定的依据。

星点设计-效应面优化苦参总生物碱组分磷脂复合物研究

目的:优化苦参总生物碱组分磷脂复合物(TA-PC)的工艺,研究其理化性质。方法:采用溶剂挥发法制备TA-PC,单因素考察反应溶剂、反应温度、药物质量浓度、反应时间、药脂比等对磷脂复合率的影响;星点设计-效应面法优化处方及工艺。HPLC法测定苦参总生物碱中氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱的含量,并以4个生物碱含量为指标考察TA-PC的溶解性、油水分配系数,电镜分析水中分布的形态及大小,红外图谱研究药物与磷脂结合方式。结果:最优条件为:乙醇为反应溶剂,药物与大豆磷脂投料比2.5∶1,药物质量浓度3.0 mg/mL,反应温度为40℃,反应时间2 h。复合率达95.27%±0.65%,与预测值偏差<5.0%;IR验证了所形成的磷脂复合物为一种弱的相互作用,未发生化学变化;水中溶解度明显降低,油水分配系数明显增加。结论:星点设计-效应面法成功制备了TA-PC,工艺稳定可行,提高了TA的脂溶性,为其进一步开发制剂奠定基础。

苦参中总生物碱的富集工艺研究

目的:研究用阳离子交换树脂富集苦参中总生物碱的工艺条件。方法:采用732阳离子交换树脂对苦参中总生物碱进行富集,以苦参中总生物碱含量为考察指标,采用分光光度法测定总生物碱含量。结果:苦参中总生物碱的最佳富集工艺条件为:上样溶液质量浓度为0.4g·mL-1,以1%Na2CO31BV.h-1洗脱,收集17BV。结论:732阳离子交换树脂对苦参中总生物碱的吸附能力较好,适用于苦参中总生物碱的富集。

苦参总生物碱提取工艺优化及杀蚜虫活性研究

目的:研究苦参总生物碱的提取工艺及杀虫生物活性。方法:以总生物碱含量为指标考察乙醇冷浸、乙醇渗漉、乙醇回流三种提取方法的提取效率差异,同时用正交设计对乙醇回流工艺条件进行优化,并以蚕豆蚜虫为供试靶标,探讨苦参总生物碱的杀虫生物活性。结果:乙醇回流提取效果较好,液料比、乙醇浓度、提取次数对提取效果均有影响,其最佳提取条件为:液料比12?1,乙醇浓度为60%,提取次数3次;苦参总生物碱对蚕豆蚜虫有一定的杀虫活性,其中氯仿直接提取物对蚜虫杀虫活性最好,随着总生物碱浓度降低,杀虫活性有下降。

苦参不同组织部位的生物碱含量研究

目的:对苦参不同组织部位中总生物碱与五种单体生物碱进行含量测定。方法:采用酸性染料比色法和高效液相色谱法分析苦参不同组织部位中总生物碱含量以及五种单体生物碱的含量。结果:苦参各组织部位中,五种单体生物碱含量总计依次为:韧皮部29.62mg/g,木质部20.90mg/g,髓部13.29mg/g,木栓层4.885mg/g;总生物碱含量依次为:韧皮部35.14mg/g,木质部33.12mg/g,髓部31.46mg/g,木栓层含量低于线性范围。结论:苦参各组织部位中五种单体生物碱和总生物碱含量高低依次为:韧皮部>木质部>髓部>木栓层。

提取条件对苦参中总生物碱提取率的影响

为了选出苦参中生物碱的最佳提取条件,本研究通过对比不同提取溶剂、不同提取方法对苦参中总生物碱出膏率、总生物碱含量的影响,并用酸性染料比色法测定药膏中总生物碱的含量。结果表明,氨水-氯仿提取,出膏率最高、总生物碱含量最高;超声提取高效、省时、省能源,是比较好的提取方法。

苦参愈伤组织的诱导及苦参总碱含量的检测

为了探索苦参愈伤组织培养的适宜条件和选择苦参总碱含量高的愈伤组织,用不同的消毒方法和不同的激素配比对苦参的子叶、叶片、地上茎和地下茎进行离体培养,诱导愈伤组织;并对外植体以及分别诱导出的愈伤组织进行苦参总碱的检测。结果表明,对苦参的外植体采用自来水冲洗30 min,75%酒精处理30 s,4%NaClO、滴加一滴tween-20,消毒5min就能取得较好的消毒效果;不同外植体以MS培养基为基本培养基加1.0 mg/L 2,4-D和1.5~2.5 mg/L NAA的条件下,均能高效率的诱导出愈伤,且生长较好;初步认为子叶和地下茎的愈伤组织中苦参总碱含量较高,适合选择子叶或地下茎的愈伤组织进一步进行筛选高产细胞系。

阳离子交换树脂酸水洗脱法纯化苦参总碱的工艺优选

目的优选阳离子交换树脂不同浓度盐酸溶液洗脱纯化苦参总碱的最佳工艺条件。方法以苦参碱、氧化苦参碱和总生物碱的洗脱率为考察指标,以盐酸溶液作为洗脱剂,优选阳离子交换树脂纯化苦参总碱的最佳工艺和参数条件。结果苦参总碱阳离子交换树脂纯化洗脱条件为:以5%盐酸溶液作为洗脱剂,以6 BV.h-1的流速洗脱,苦参碱和氧化苦参碱、苦参总碱洗脱率均可达85%。结论采用阳离子交换树脂酸水洗脱法纯化苦参总碱效率高,工艺简便,可用于苦参总碱的提取纯化。

正交试验优化复方苦参涂膜剂提取工艺

目的优化复方苦参涂膜剂的中药提取工艺。方法选用三因素三水平正交设计实验,以酸性染料比色法测定生物总碱含量,以生物总碱含量及干膏收率的加权综合评分作为工艺筛选的评价指标。结果 9个实验的平均生物总碱含量为2.29 mg/g,干膏收率为40.02%,平均综合分为83.01,中药浸泡温度对工艺影响显著,最佳提取工艺为加入12倍量60%乙醇溶液,70℃水浴浸泡3 h,提取2次。结论优选的加热浸渍提取工艺方法稳定,工艺简单,提取时间短。

苦参总生物碱对哮喘大鼠气道重建的防治作用

目的探讨苦参总生物碱对哮喘大鼠气道重建的防治作用及其潜在机制。方法随机将40只健康的雄性SD大鼠分为四组,每组10只,分别为:空白组、模型组、给药组(苦参总生物碱组)和阳性对照组(地塞米松组)。采用卵蛋白-氢氧化铝混悬液处理大鼠构建哮喘大鼠模型,空白组以生理盐水替代;给药组在激发后1 h灌胃10 mg/kg苦参总生物碱水溶液,1次/d,共灌胃28 d;地塞米松组在激发后1 h灌胃0.5 mg/kg地塞米松溶液,1次/d,共灌胃28 d;空白组和模型组灌胃等量生理盐水。药物干预结束后处死大鼠。通过HE染色观察大鼠肺组织的形态变化,采用免疫组化法检测大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9),酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,用蛋白印记法检测大鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1和TGF-β1蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组大鼠气道周围炎症细胞浸润并伴有平滑肌增生,血清和肺组织中的MMP-9、TIMP-1和TGF-β1水平显著上升(P<0.05);与模型组相比,对大鼠灌胃苦参总生物碱后,支气管增生细胞和周围炎症细胞的浸润均减少,血清和肺组织中MMP-9、TIMP-1和TGF-β1的表达显著下调(P<0.05),与地塞米松组具相同变化趋势。结论苦参总生物碱可以有效地改善哮喘大鼠气道的重建,其分子机制可能是下调MMP-9、TIMP-1和TGF-β1的表达。

小檗碱与苦参总碱配伍对TNBS/乙醇致大鼠UC模型的影响

目的观察小檗碱、苦参总碱不同配伍对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用。方法以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法建立大鼠UC模型,每天灌胃给药并记录大鼠肛温、粪常规,第8天取结肠称重,观察弹性延长系数、病理学组织变化,免疫组化法检测UC大鼠结肠黏膜组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)的表达水平,研究小檗碱与苦参总碱不同配伍对UC大鼠的治疗效果。结果 TNBS/乙醇法成功建立UC大鼠模型,给药7天后,小檗碱50 mg/kg+苦参总碱120 mg/kg组肛温和粪常规较模型组有显著性差异(p<0.01),肠黏膜充血较少,肠壁轻度增厚,TNF-α,COX-2的阳性表达水平明显降低,结肠弹性延长系数与模型组比较具有显著性差异(p<0.05);苦参总碱120 mg/kg组肛温与模型组比较差异有显著性意义(p<0.01),粪常规较模型组也具有显著性差异(p<0.05)。结论小檗碱50 mg/kg+苦参总碱120 mg/kg配伍治疗UC大鼠疗效显著,肠粘膜溃疡面基本消失,病变肠黏膜恢复正常;苦参总碱120 mg/kg也有一定的治疗作用。

苦参不同部位有效成分含量比较研究

目的:比较苦参不同采收部位中的苦参总生物碱含量,为苦参栽培资源的合理利用提供依据。方法:采用高效液相色谱法分析不同年限苦参不同部位中苦参碱和氧化苦参碱的含量。结果:苦参碱和氧化苦参碱的总量在不同年限苦参不同部位的分布具有类似的规律性,侧根下部>侧根上部>主根>横生根状茎(地中茎)>茎芽。主根上部和下部的含量差异不显著,但主根与侧根下部的有效成分含量差异较大;苦参生长的第1年、第2年生物碱含量均有较大增长,3年生苦参含量均能达到《中华人民共和国药典》标准。结论:3年采收苦参较为合理,且3年生材料中地中茎和茎芽的生物碱含量也比较高,可以多途径利用。

超声波法提取苦参总碱的研究

以苦参的根为原料,通过改变超声时间、浓度、料液比、超声频率等条件研究了对苦参总碱提取效果的影响,从而可以确定苦参总碱最适合的提取条件。

HPLC法测定苦参总碱中苦参碱与氧化苦参碱的含量

目的:采用高效液相色谱法测定苦参总碱中苦参碱和氧化苦参碱的含量。方法:采用 Elite Hypersil NH_2柱(5μm,250mm×4.6 mm),乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(81:10:9)为流动相,流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长220 nm,柱温:25℃,进样量:10 μL。结果:苦参碱、氧化苦参碱的线性范围分别为5.32～53.2μg·mL^(-1)(r=0.9997),65.7～525.6μg·mL^(-1)(r=0.9995)。苦参碱平均加样回收率为99.5%,RSD=1.0%(n=6);氧化苦参碱的平均加样回收率为99.7%,RSD=0.6%(n=6)。结论:本方法操作简便、快速、可靠,可用于控制苦参总碱质量。

应用紫外分光光度法测定苦参总碱的含量

用岛津 UV-210紫外分光光度计对苦参膏中苦参总硷的含量进行了测定。结果表明,苦参总硷的光谱图在200nm 处有最大吸收,并且吸收值与苦参总硷的含量间存在着良好的线性关系。并对苦参总硷在水溶液中的稳定性和实验方法的精密度进行了考察,认为此方法适合于作含量测试分析,其平均回收率为103.2%。

两种方法测定山豆根总碱含量的研究

目的 :比较山豆根总碱两种含量测定方法 ,为山豆根提取工艺优选提供参考。方法 :采用容量法和酸性染料比色法。结果 :两种方法结果基本一致。结论