三七总皂苷多效应成分整合药代动力学研究

目的:以三七总皂苷为模型药物,探讨中药多组分整合药代动力学研究新思路与方法。方法:SD大鼠分别灌胃及静脉注射剂量为300及10mg·L1的三七总皂苷,LC-ESI-MS法测定三七皂苷R1、人参皂苷皂苷Rg1、Rd、Re、Rb1在大鼠血浆中的药物浓度,计算上述成分在大鼠体内的药动学参数,利用各成分曲线下面积(AUC0-∞)百分率作为自定义权重系数,计算三七总皂苷大鼠体内综合血药浓度并建立整合药动学研究模型,进一步估算三七总皂苷大鼠体内整合药动学参数。结果:灌胃给药后三七总皂苷在体内吸收迅速但二醇型和三醇型皂苷之间药动学参数差异很大,其中二醇型皂苷Rb1和Rd的t1/2远大于三醇型皂苷Rg1、Re和R1;整合药动学研究结果显示综合浓度药-时曲线符合灌胃或静脉给药的药物消除规律,三七总皂苷大鼠体内吸收迅速,灌胃和静注给药后整合药动学t1/2、AUC分别为18.88,19.15h和25.33,84.83mg·h·L1。结论:基于三七总皂苷各成分曲线下面积(AUC0-∞)自定义权重系数的整合药动学研究模型符合经典药代动力学模型特征,所获参数能够最大程度上表征中药的整体处置规律,为建立符合中医药特点的中药药代动力学研究提供了一种新的研究思路与技术方法。

三七总皂苷对抗H_2O_2所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤的物质基础研究

目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作用。结果500μmol·L-1的H2O2对原代培养的RBMEC产生明显的损伤。20～200mg·L-1的TPNS,16·0μmol·L-1的R1,37·5～75·0μmol·L-1的Rg1,8·0～16·0μmol·L-1的Rd及5·4～54·0μmol·L-1的Rb1对H2O2致RBMEC的损伤具有明显的保护作用(P<0·05或P<0·01),Re则无此作用。结论TPNS对H2O2所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用,产生这一作用的主要物质基础可能为Rb1、Rg1和Rd。

高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1与三七皂苷R_1含量

目的建立高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1与三七皂苷R1的方法。方法采用高效液相色谱法 ,固定相为氨基键合相 ,流动相为乙腈 水 ( 81∶1 9,V∶V) ,检测波长2 0 3nm。结果三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1与其他成分分离良好 ,保留时间分别约为 5 7min、8 9min、2 5 1min和 9 9min。人参皂苷Rg1在 80～ 2 80mg/L(r =0 9992 )、Re在 2 0～ 1 80mg/L(r=0 9993 )、Rb1在 95～ 2 85mg/L(r=0 9991 )、三七皂苷R1在1 8～ 1 4 6mg/L(r=0 9991 )内线性关系良好 ,人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的回收率分别为 99 1 %、98 4 %、98 6%和 97 1 % ,RSD分别为 2 1 %、2 0 %、2 2 %、2 8%。

三七总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠脾脏单个核细胞白细胞介素17A、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的研究三七总皂苷(TPNS)对动脉粥样硬化(As)小鼠脾脏单个核细胞白细胞介素17A(IL-17A)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠高脂饮食喂养,小鼠20周龄时分为模型组及TPNS大、小剂量组。用药组分别给予TPNS 40 mg/kg、120 mg/kg灌胃8周。采用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)浓度;HE染色观察斑块形态并计算斑块面积/管腔面积;ELISA法检测小鼠脾脏单个核细胞IL-17A、IL-10和TNF-α表达。结果 TPNS可以降低Apo E-/-小鼠的血清TC、TG、LDLC浓度,大剂量组TC、TG、LDLC浓度分别为16.4±2.2 mmol/L、1.36±0.23 mmol/L和5.9±1.2 mmol/L,模型组TC、TG、LDLC浓度分别为28.2±4.0 mmol/L、2.08±0.17 mmol/L和10.0±1.9 mmol/L,差异有显著性(P均<0.001)。TPNS有延缓As斑块形成的作用(模型组及大、小剂量TPNS组的斑块面积/管腔面积分别为31.3%±5.1%、14.1%±5.0%和24.2%±4.9%,P均<0.05)。大剂量TPNS可以提高小鼠脾脏单个核细胞的IL-10表达,与模型组相比差异有显著性(40.9±2.2比36.3±2.8,P<0.05),小剂量TPNS组略有升高趋势,但差异无统计学意义。TPNS可以降低小鼠脾脏单个核细胞IL-17A和TNF-α的表达,以大剂量组效果显著,差异有统计学意义(IL-17A 18.1±1.5比22.8±3.1,P<0.05;TNF-α18.3±1.2比22.9±0.7,P<0.001)。结论 TPNS可以降低Apo E-/-小鼠血清TC、TG、LDLC的水平,升高脾脏单个核细胞IL-10的表达,同时降低IL-17A和TNF-α的表达,这可能是其抗As的重要机制之一。

三七总皂苷对动脉粥样硬化血管内皮的保护作用

目的探讨三七总皂苷对动脉粥样硬化主动脉内皮的保护作用。方法载脂蛋白E基因敲除(apoE-KO)小鼠随机分为模型组、三七总皂苷组和辛伐他汀组,同种属C57BL/6J小鼠作为正常对照组。应用ELISA法测定小鼠血清氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)含量,透射电镜观察小鼠主动脉内皮细胞的超微结构。实时定量RT-PCR检测小鼠主动脉细胞分化抗原40(CD40)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA表达水平。结果 apoE-KO小鼠的主动脉内皮和正常相比明显肿胀,连续性中断,可见细胞凋亡,胞核固缩,核内异染色质明显增多,线粒体空泡化。用药组内皮结构有不同程度的改善。与模型组相比,apoE-KO小鼠血清oxLDL水平显著升高(16.06ng/mL±4.16ng/mL vs 1.43ng/mL±0.84ng/mL,P<0.001),三七总皂苷及辛伐他汀均可显著降低apoE-KO小鼠血清oxLDL水平(4.45ng/mL±1.25ng/mL,3.92ng/mL±1.99ng/mL,P<0.001)。结论三七总皂苷对动脉粥样硬化小鼠血管内皮具有保护作用,其机制与降低血清oxLDL水平,下调主动脉CD40及VCAM-1的基因表达水平有关。

RP-HPLC梯度洗脱法同时测定三七总皂苷及血塞通注射液中3种皂苷的含量

目的 :用高效液相色谱梯度洗脱法同时检测三七总皂苷原料及注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg13种皂苷含量 ,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供了依据。方法 :用大连SpherisorbC8分析柱 ;乙腈 -水线性梯度洗脱 :0～ 3min (2 4∶76 ) ,3～ 15min (4 5∶5 5 ) ;流速 1 5mL·min-1;检测波长 2 0 3nm。结果 :该方法回收率三七皂苷R1为 99 8% ,人参皂苷Rb1为 10 0 6 % ,人参皂苷Rg1为98 9% ,RSD <1 1%。结论 :高效液相色谱梯度洗脱法能将多种皂苷很好地分离检测 ,提高了时效 ,减少了误差 ,结果表明该方法准确可靠 ,重现性好 ,结果稳定。

三七抗肿瘤作用实验研究概况

三七根中可分离出三七皂苷R1、R2、R3、R4、R5、R6和人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1等多种单体皂苷成分,三七总皂苷含量高达12%。已经明确三七总皂苷和部分三七单体皂苷在抗肿瘤方面具有的多种活性:直接抑制肿瘤细胞、促肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、逆转肿瘤细胞多药耐药、抗肿瘤转移等作用。三七在抗肿瘤方面具有很大研究潜力与开发前景,如果能从细胞、分子,或基因水平上更深入进行研究,明确其抗肿瘤的多种机制,将对临床合理应用三七治疗肿瘤产生更重大意义。

HPLC法测定三七总皂苷分散片中三种皂苷的含量

目的：采用HPLC法测定三七总皂苷分散片中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和Rg1三种皂苷含量，为建立三七总皂苷分散片质量标准含量测定方法提供依据。方法：用Zorbax Eclipse XDB-C18（4．6×250mm，5μm）分析柱；乙腈-水线性梯度洗脱；流速1．0mL／min，检测波长203nm。结果：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的线性范围分别为0．12～2．4μg，0．4～8μg，0．5～10μg。该方法回收率三七皂苷R1为99．36％（RSD=1．53％）、人参皂苷Rg1为98．69％（RSD=0．86％）和人参皂苷Rb1为98．92％（RSD=1．27％）。结论：HPLC梯度洗脱能将三种皂苷很好地分离检测，方法准确灵敏，稳定可靠，可用于三七总皂苷分散片的质量控制。

三七总皂甙对兔血管平滑肌细胞核因子κappaB和细胞周期的影响

目的观察三七总皂甙对兔VSMC生长增殖、细胞周期和NF-κB活性的影响 ,以探讨其药理机理。方法胎牛血清刺激体外培养的兔VSMC使其快速增殖生长 ,加入不同浓度的三七总皂甙作用一定时间后 ,通过MTT法测定三七总皂甙对VSMC生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和NF -κB活性的影响。结果三七总皂甙能明显抑制胎牛血清刺激的VSMC的增殖 (IC50 为14.8μg/ml)。三七总皂甙还以浓度依赖方式减少S期细胞 ,阻滞细胞于G0/G1 期 ,并下调NF-κB活性 ,与对照组相比具有显著差异 (P<0.01)。结论三七总皂甙能显著抑制VSMC的增殖生长 。

三七总皂甙预处理对体外循环胃肠缺血的抗损伤作用

目的观察三七总皂甙(血塞通注射液)预处理对体外循环(CPB)患者胃肠循环和全身炎症反应的影响.方法将67例先心病行心内直视手术的患者随机分为对照组(34例)、三七总皂甙组(33例).三七总皂甙组在术前1周每天静脉滴注三七总皂甙注射液5 mg/kg预处理至手术当天.术中持续监测心电图(ECG)、动脉血氧饱和度(SPO2)、中心静脉压(CVP)、心率(HR)、血压(BP)、呼吸频率(RR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、呼末二氧化碳分压(PETCO2),同时监测尿量、鼻咽温和肛温.在气管插管后经鼻放置胃管,分别在转机前(T0)、转机后30 min(T1)、停机后30 min(T2)和术后最初24 h(T3)抽取胃液,测pH值(即PcCO2),同时抽取动脉血测[HCO3-],并用Handerson-Hasselbalch方程计算胃粘膜pH值(即pHi);分别抽取静脉血采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测E-选择素(E-Selection)及采用酶联免疫吸附法检测TNF-a和IL-6.结果所有病人胃粘膜pH值(pHi)在转机后不同时段均低于转机前(P<0.05),但三七总皂甙组下降的程度少于对照组(P<0.05);两组病人在转机后30 min(T0)、停机后30 min(T1)和术后最初24 h(T3)血清E-选择素、TNF-a和IL-6较转机前30 min(T0)都升高(P<0.05),但在T1、T2、T3各时间点E-选择素(E-Selection)、TNF-a和IL-6水平三七总皂甙组均低于对照组(P<0.05).结论预防性滴注三七总皂甙注射液可有效改善胃肠粘膜的血液灌注和氧供,从而减轻体外循环(CPB)病人胃肠不良反应及全身炎症反应.

顶空气相色谱法测定三七总皂苷中有机溶剂残留量及大孔吸附树脂有机残留物

目的:建立三七总皂苷及大孔吸附树脂有机溶剂丙酮、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、醋酸乙酯、苯乙烯、1,2-二乙基苯残留量测定法。方法:采用顶空 GC 方法测定三七总皂苷及大孔吸附树脂有机溶剂残留量,使用 HP-INNOWAX 固定相的开口毛细管柱;以高纯氮气为载气;以 FID 为检测器。结果:该法有良好的线性,r 在0.9961～0.9999之间;精密度、重现性相对标准偏差均小于6%,平均回收率在93.08%～111.2%之间。结论:此法简便,快速,准确,可用于中药原料,中药制剂的丙酮、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、醋酸乙酯、苯乙烯、1,2-二乙基苯残留量测定。

氟他胺加睾丸切除治疗晚期前列腺癌22例

目的观察三七总皂甙联合氟他胺治疗前列腺癌的临床疗效。方法将60例前列腺癌患者分为对照组和实验组,对照组22例,给予氟他胺250mg,3次/天;治疗组38例,在对照组基础上给予静脉滴注三七总皂苷注射液2mL,每日1次,治疗两个月后通过比较两组患者治疗前后前列腺体积、排尿困难的情况、血清f/tPSA水平的变化及两组的治疗疗效。结果两组患者治疗前前列腺的体积,排尿困难的情况、血清f/tPSA水平均无显著性差异;治疗后两组患者前列腺的体积均显著小于治疗前,排尿困难的发生率较治疗前均显著降低,血清f/tPSA水平均显著高于治疗前;且治疗后实验组患者前列腺的体积小于对照组,排尿困难的发生率低于对照组,血清f/tPSA水平高于对照组。实验组治疗的总有效率为84.21%,显著高于对照组(72.72%)(P<0.05)。结论三七总皂甙联合氟他胺治疗前列腺癌的临床疗效优于单用氟他胺,可进一步研究和推广。

三七茎叶总皂苷促血管新生抗缺血性脑卒中的作用机制

目的探究三七茎叶总皂苷改善缺血性脑卒中、促进缺血性脑卒中损伤后血管新生作用及机制。方法采用网络药理学技术预测三七茎叶总皂苷促进缺血性脑卒中损伤后血管新生可能的机制,利用分子对接技术对筛选出的核心靶点与主要成分的结合进行初步验证。雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及三七茎叶总皂苷低、中、高剂量(73、146、292mg/kg)组和3-正丁基苯酞(3-n-butylphthalide,NBP,60 mg/kg)组,每组20只。建立大鼠脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,给药7 d后取材。每隔1 d对大鼠进行神经功能评分;通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑梗死体积及脑神经细胞形态状况;通过激光多普勒血流仪观察大鼠梗死脑侧血流恢复情况;通过光学相干断层扫描血管成像观察大鼠脑微血管新生状况;通过ELISA和Western blotting测定与血管新生相关蛋白表达。结果网络药理学分析显示,共收集到60个三七茎叶总皂苷活性成分和297个关键靶点,与血管新生和缺血性脑卒中取交集后得到64个交集靶点,并且三七茎叶总皂苷主要成分与这些核心靶点均有较好结合力。三七茎叶总皂苷促进血管新生改善缺血性脑卒中的关键通路主要富集在磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)等通路。动物实验结果显示,与模型组比较,三七茎叶总皂苷能够显著降低MCAO/R大鼠神经功能评分(P<0.01),改善大鼠神经功能,降低大脑梗死体积(P<0.01、0.001),减少脑组织损伤,恢复梗死脑侧脑血流(P<0.05、0.01、0.001),促进梗死脑侧皮层微血管密度(P<0.05、0.01、0.001),提高血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)水平和HIF-1α、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论三七茎叶总皂苷能够显著改善MCAO/R大鼠脑损伤,有效促进MCAO/R大鼠缺血脑区血管新生,促血管新生机制可能与提高MCAO/R大鼠大脑中VEGF、bFGF、HIF-1α表达和激活PI3K/Akt通路有关。

三七总皂甙对新生SD大鼠窒息致脑损伤后Bax表达影响的实验研究

目的:了解三七总皂甙(PNS)对新生SD大鼠窒息后脑细胞中Bax表达的影响。方法:7日健康SD大鼠88只,雌雄不拘,随机分为对照组(Ⅰ组,n=8)、窒息+NS组(Ⅱ组,n=40)和窒息+PNS组(Ⅲ组,n=40)。将新生鼠分别放入55 ml的磨口瓶中,瓶中放入5 g钠石灰,待新生鼠安静后,窒息+PNS组及窒息+NS组塞紧瓶塞30 min,取出后复氧120min,窒息后即刻分别腹腔注射PNS 100 mg.kg-1、同等容积9 g.L-1盐水,每12 h重复腹腔注射1次,注射后放回母鼠身边继续喂养,分别于窒息后6、24、48、72 h和7天处死;对照组放入55 ml磨口瓶中30 min,不塞瓶塞,取出后复氧120 min,放回母鼠身边继续喂养,6 h后全部处死。应用免疫组织化学法检测Bax蛋白的表达情况。结果:Ⅱ组和Ⅲ组各时间点的Bax蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅱ组及Ⅲ组Bax蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),均是48 h达高峰,然后逐渐下降,但7天时仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。相同时间段Ⅲ组Bax蛋白表达水平明显低于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Bax是一种凋亡蛋白,在正常脑组织中很少表达,在窒息致新生SD大鼠缺氧缺血性脑病时表达增加,说明其在缺氧缺血性脑病中起到一定的促细胞凋亡的作用,促进脑损伤;PNS降低了凋亡蛋白Bax的表达,说明PNS可以通过减少脑组织中凋亡蛋白Bax的表达降低细胞凋亡数目,提示PNS对窒息所致的缺氧缺血性脑损伤有明显的脑保护作用。

基于成分状态分析溶液环境对三七总皂苷超滤分离行为的影响

目的基于三七总皂苷(PNS)存在状态,明确溶液环境对其分离行为的影响。方法以成分透过率、溶液表面张力为指标,分析单因素乙醇、无机盐、表面活性剂和pH值对PNS存在状态的影响,进而采用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,考察乙醇浓度、氯化钠浓度、溶液pH值对三七皂苷R1(R1)和人参皂苷Rb1(Rb1)超滤分离的影响,分析因素交互作用,明确影响规律。结果乙醇可以降低皂苷分子间作用力,pH值促进皂苷离子化,增加临界胶束浓度,PNS超滤透过率增加;无机盐的盐析作用降低临界胶束浓度,PNS透过率降低;表面活性剂类型与PNS超滤分离行为相关;通过响应面分析成分超滤透过行为,Rb1对考察因素的敏感度高于R1。结论明确了溶液环境因素对PNS超滤分离的影响规律,可以动态调节成分状态,实现皂苷类成分的目的性分离。

三七总皂苷对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40,VCAM-1表达的影响

目的探讨三七总皂苷(TPNS)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)白细胞分化抗原40(CD40)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法原代培养HUVECs。细胞分为空白组、刺激组、小剂量(100mg/L)TPNS组、大剂量(200mg/L)TPNS组及辛伐他汀组并予相应处理。采用MTT法测定HUVECs活性,实时定量RT-PCR检测VCAM-1的基因表达,Western blot分析CD40蛋白表达量。结果 TPNS及辛伐他汀均可以升高HUVECs的活性(P<0.05,P<0.001),下调HUVECs表达免疫炎症因子CD40(P<0.05,P<0.01)及VCAM-1(P均<0.001)的水平。且大剂量TPNS作用优于小剂量TPNS(P<0.05)。结论 TPNS能够减轻oxLDL对内皮细胞的损伤,降低内皮细胞免疫炎症因子的表达,在防治动脉粥样硬化中具有重要作用。

丹七方不同剂型的体外溶出度比较

目的:以丹七方不同剂型为模型,探讨中药多组分体外溶出度研究的新思路与方法。方法:采用小杯法,以水为溶出介质,浆速50 r.min-1,利用HPLC测定滴丸和普通片剂中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的体外摩尔溶出率,利用各成分在三七总皂苷的比例作为自定义权重系数,计算三七总皂苷的体外摩尔溶出率。结果:在30 min时,滴丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1的体外摩尔溶出率分别为96.87%,97.15%,96.10%,接近释放完全;片剂分别只有16.10%,15.48%,16.03%;片剂在120 min的体外摩尔溶出率才达到90%。Weibull方程拟合表明滴丸中3种成分和三七总皂苷的Td和T50均<片剂。结论:通过三七总皂苷各成分摩尔浓度自定义权重系数的整合体外溶出结果符合中药同类成分的体外分析,得到的参数基本可以表征中药同类物质的整体释放规律。

基于熵权法的灰色关联法-TOPSIS法对不同产地三七及其炮制品质量的评价研究

目的 利用熵权法结合灰色关联法-TOPSIS法建立三七Panax notoginseng质量评价模型,评价不同产地三七及其炮制品质量。方法 以水分、醇浸出物、皂苷含量、多糖得率、多糖总糖含量、糖蛋白含量及糖醛酸含量作为检测指标,以熵权法计算权重,结合灰色关联法与TOPSIS法对各项指标进行统计分析,建立三七质量评价模型,综合考察红河、文山和曲靖3个产地共15个批次的三七及其炮制品的质量。结果 检测结果表明不同产地不同批次的三七各指标水平大不相同;将三七炮制前后各项指标进行对比,发现蒸制后水分降低,浸出物含量增加,皂苷减少,多糖含量增加;15批三七及炮制品质量排序结果 TOPSIS与灰色关联分析基本一致。结论 基于熵权法的灰色关联法-TOPSIS法建立的质量评价模型方便有效,可用于三七质量评价。