猪水肿病毒素A亚单位基因的克隆及表达的尝试

以聚合酶链式反应 ( PCR)技术从大肠杆菌 TB1中扩增出猪水肿病毒素 ( SLT- IIe)的 A亚单位基因的 960 bp。将此 PCR扩增产物 ( slt- IIe A)在 Eco RI和 Bam HI位点间克隆进质粒p UC1 8中 ,获得了重组质粒 p1 8slt- IIe A,经 Micro Genic computer program分析证明在其整个序列中含有与已发表的 slt- IIe序列相同的序列 ,说明质粒 p1 8slt- IIe A是含有 slt- IIe A的重组质粒。切割重组质粒 p1 8slt- IIe A,将 slt- IIe A基因插入到表达性质粒载体 p GEX- 6p- 1中处于谷胱苷肽转移酶 ( GST)基因的下游 ,构建成重组质粒 ppslt- IIe A,并证明其中含有 slt- IIe A基因。然而 ,与原初预计结果相反 ,受到质粒 ppslt- IIe A转染的大肠杆菌 BL2 1 (名为重组质粒 PPSLT- IIe A)在不同温度条件、不同培养时间和不同 IPTG浓度下 ,却未表达预期的融合蛋白 GST- SLT- IIe A。本文对未能表达一事的可能原因进行了讨论。