梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法 PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论 PET-28a(+)表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。

重组蛋白抗原Tp0608对梅毒诊断的血清学评价

目的探讨重组蛋白抗原Tp0608对梅毒诊断的血清学评价价值。方法收集各期梅毒患者406例以及可能有交叉反应的患者90例,建立了一个重组蛋白抗原Tp0608,用酶联免疫吸附试验(ELISA)对梅毒各期患者及可能有交叉反应的患者进行了检测,并与常规的快速血浆反应素试验(RPR)+梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行对比。结果对各期梅毒患者,Tp0608重组蛋白筛查的灵敏度为95.3%,RPR+TPPA筛查灵敏度为93.1%。对可能有交叉反应的患者,Tp0608重组蛋白筛查的特异度为99.1%,ROC曲线的AUC为0.99;RPR+TPPA筛查的特异度为97.2%,ROC曲线的AUC为0.96。Tp0608重组蛋白对梅毒筛查的灵敏度、特异度均高于常规的RPR+TPPA检测方法,特别是对先天性梅毒、一期梅毒的检测优于常规方法。结论 Tp0608重组蛋白是非常有前景的梅毒筛查的诊断性抗原,但其在细胞内的位置和保护性反应还未确定,还有待进一步研究和验证。