创伤性肌筋膜触发点的形成对大鼠骨骼肌肌梭内NT-3及受体TrkC的表达影响

目的:确定创伤性肌筋膜触发点的形成对其周围肌梭组织内部蛋白和基因表达水平的影响,并分析触发点牵涉痛临床特点和针刺“打跳”的分子生物学依据。方法:32只7周龄雄性SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组采取对腓肠肌定点钝性打击结合离心运动的模式进行连续8 w造模。造模结束后两组均正常饲养4w。12 w结束后,检测造模成功指标,并在此基础上提取各组腓肠肌触发点组织和非触发点组织,以及各组比目鱼肌、胫骨前肌和跖肌处骨骼肌分别进行NT-3和NT-3的受体TrkC蛋白的免疫印迹学实验和基因的聚合酶链式反应实验。结果:与对照组相比,NT-3蛋白在触发点大鼠内外侧腓肠肌中的含量均表现为降低(P<0.05),而NT-3 mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌、趾肌、胫骨前肌和比目鱼肌中的含量均表现为降低(P<0.05);TrkC蛋白在触发点大鼠内侧腓肠肌、趾肌和胫骨前肌中的含量也均表现为降低(P<0.05),而TrkC mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌和趾肌含量也均表现为降低(P<0.05)。结论:慢性肌筋膜触发点的形成诱发了受累肌和多块关联肌肌梭内NT-3、受体TrkC蛋白和基因的下调。

NGF、BDNF及受体trkA、trkB、trkC在正常猴脊髓的表达

采用免疫组织化学方法观察了神经生长因子 (NGF) ,脑源性神经营养因子 (BDNF)以及 NGF家族因子受体 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应在正常猴脊髓的分布。结果表明 :NGF免疫反应阳性的神经元在脊髓灰质各层中均有分布 ,灰、白质内也可见较多的 NGF免疫反应阳性的胶质细胞。 BDNF在脊髓各型神经无有明显的表达 ,特别是前角运动神经元。 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应产物主要分布在灰质的神经元及胶质细胞。本实验结果揭示了在正常猴脊髓中神经营养因子 (NGF、BDNF )及受体 trk A、trk B、trk C的表达状况 ,提示这些神经营养因子及受体在维持猴脊髓神经元的正常生理功能中具有重要作用。

推拿对坐骨神经损伤大鼠NT-3、TrkC的影响

目的研究推拿对坐骨神经损伤大鼠感觉功能及NT-3、TrkC表达的影响。方法采用夹持法建立坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,以按摩推拿手法模拟仪进行干预,通过热痛阈实验观察各组大鼠行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠背根节内NT-3、TrkC表达情况。结果模型组、模型对照组大鼠的PWL值与正常组相比明显延长,推拿组与模型组相比PWL值明显缩短,与正常组相比无显著差异。模型组、模型对照组及推拿组NT-3免疫组化表达与正常组比较均有明显提高,推拿组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,对神经元胞体和突起的生长产生积极的影响,促进损伤神经的修复,改善坐骨神经损伤大鼠的感觉功能。

Aβ_(25-35)诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元NT3及trkC的表达

目的:观察Aβ25-35诱导阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马神经营养素3(neuro-trophin-3,NT3)及其受体trkC的表达,并探讨其与AD的关系。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组。采用立体定向下双侧海马注射A2β5-35建立AD模型,对照组大鼠采用相同方法注射等量生理盐水。2周后,用水迷宫实验测试大鼠学习和记忆功能;然后处死,光镜下观察海马组织结构,免疫组织化学法检测NT3和trkC蛋白的表达。结果:NT3与其受体trkC在两组大鼠海马各区表达变化不同。AD组大鼠海马CA1、CA2、CA3区NT3免疫反应阳性细胞数少于对照组,差异有统计学意义,尤以CA1和CA3区较为明显(P<0.01),而CA4区和hilar区NT3免疫反应阳性细胞数以及海马各区trkC免疫反应阳性细胞数在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:海马神经元NT3的表达含量减少而非其受体trkC的下调与AD模型大鼠学习和记忆功能损害相关,提示补充外源性NT3可有助于减轻A2β5-35的神经元毒性,从而改善其学习和记忆功能。

针刺对备用背根节神经元TrkC表达的影响

目的 探讨针刺对备用背根节 (DRG) Trk C表达的影响。方法 将成年雄猫分为三组 ,即假手术组、单侧部分背根切除术组、单侧部分背根切除术并针刺组。通过免疫组化 ABC法 ,观察各组 L6 DRG中 Trk C免疫反应 (Trk C- IR)神经元数量。结果 在假手术组 Trk C- IR主要定位于 L6 DRG的大神经元及少数中小神经元胞浆内 ;部分背根切断后 ,Trk C- IR大神经元数量明显减少 ,而中小神经元数量则明显增多 (P<0 .0 5 ) ;针刺后 ,Trk C- IR大神经元数量较手术组又明显增多 ,且反应强度明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中小神经元 Trk C阳性细胞数无明显影响。结论 针刺促进 Trk C在大神经元的表达上调 ,提示 Trk

脊髓TrkC mRNA的表达及其坐骨神经损伤后的变化

目的和方法：本文利用原位杂交和点杂交的方法，对ＴｒｋＣｍＲＮＡ在大鼠脊髓组织中的分布与坐骨神经损伤后的表达变化进行了研究。结果：ＴｒｋＣｍＲＮＡ几乎存在于所有脊髓神经元与胶质细胞中，在坐骨神经损伤后１ｄ表达增加，以后降到较低水平，到１４ｄ又再次升高，但第二峰较第一峰为低。ＴｒｋＣｍＲＮＡ在大鼠脊髓组织中的广泛分布，表明ＮＴ３对脊髓组织各类神经元均有可能的神经营养作用。坐骨神经损伤后１ｄ表达的增加，可能与损伤应激相关，１４ｄ的再次升高可能由于再生神经渐达靶组织所致。结论：受体表达的改变，可能是受损神经元在损伤与再生修复过程中。

去部分背根后猫脊髓Ⅱ板trKC表达的变化

目的 探讨部分去背根猫脊髓 板 (L3 、 L5) trk C的表达变化。方法 将 15只成年猫分正常组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6备用根 )后 3天和 10天组 (n=5 )。取各组脊髓 L3 、L5节段制作 2 0 μm冰冻切片 ,用 trk C兔抗血清以免疫组织化学 ABC法染片 ,观察 tr KC在脊髓 板层的分布 ,测量各组 板层 tr KC的平均灰度。结果 在正常组 tr KC阳性物主要分布于脊髓腹角中间带及背角深部的神经元。而 板层仅见 tr KC匀质状阳性染色。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的平均灰度均较非手术侧及正常组者增加 (P<0 .0 5 )。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的平均灰度已恢复到近对侧和正常对照组水平 (P>0 .0 5 ) ,而 L3 平面仍较对侧及正常组者高 (P<0 .0 5 ) ,但已较3天者减少 (P<0 .0 5 )。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的含量均较非手术侧及正常组者减少。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的含量已恢复近对侧及正常水平 ,而 L3 平面虽有恢复 ,但仍未达正常者水平。结论 tr KC的表达变化可能与脊髓可塑性有关。

神经营养因子受体TrkA、TrkB、TrkC和TrkE在参环毛蚓体内的分布

高亲和性神经营养因子受体Trk ,广泛存在分布于哺乳动物神经组织。研究表明 :随着动物进化程度的降低 ,亚型Trk受体的类型有所减少 ;在低等动物 ,关于环节动物 (Annelida)Trk受体存在与否、分布如何尚未见报道。以我国环节动物门典型代表参环毛蚓 (Pheretimaaspergillum)为研究对象 ,运用免疫细胞化学染色技术 ,在光镜下观察TrkA、TrkB、TrkC和TrkE阳性细胞和纤维的形态与分布。发现Trk存在于参环毛蚓的神经系统和非神经组织。各亚型分布有所差异 ,TrkA阳性神经细胞存在于咽下神经节和肠神经系 ,阳性神经纤维存在于腹神经索和肠神经系 ;TrkB阳性细胞存在于非神经组织的肠上皮 ;TrkC阳性神经细胞存在于脑、咽下神经节和肠神经细胞 ,阳性神经纤维存在于围咽神经环、腹神经索和肠神经系 ;TrkE阳性神经细胞存在于脑、阳性神经纤维存在于咽下神经节和腹神经索。上述研究结果表明 :Trk存在于进化程度较低的环节动物 ,Trk在进化上具有悠久的历史。各亚型Trk受体的不同分布提示不同部位的神经细胞受不同神经营养因子的作用。

过表达NT-3 SCs和过表达TrkC NSCs移植减少脊髓损伤处瘢痕形成和促进神经再生

目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)和NT-3受体(TrkC)基因修饰神经干细胞(NSCs)联合移植能否减少大鼠脊髓全横断损伤处的瘢痕组织,并促进下行神经纤维再生。方法用NT-3基因的重组腺病毒(Ad-NT-3)感染培养的SCs(NT-3-SCs),同时用含TrkC基因的重组腺病毒(Ad-TrkC)感染培养的NSCs(TrkC-NSCs)。此外,还将Ad-LacZ分别感染SCs和NSCs。然后建立大鼠脊髓全横断损伤模型,将NT-3-SCs+TrkC-NSCs联合移植到损伤处。所有动物存活60 d后,在脊髓横断处远端3 mm组织内注射荧光金(FG),动物再存活7 d。最后灌注固定动物、取材和切片,并行形态学观察。结果①在移植组中,脊髓横断处头侧端、中脑红核及大脑体感运动区皮质内锥体细胞层有少量FG标记神经元。②在脊髓损伤区内,细胞移植组比对照组的纤维粘连蛋白(FN)阳性细胞减少,S-100阳性细胞增多。③电镜下可见,细胞移植组的脊髓损伤区内成纤维细胞和胶原纤维减少。结论 NT-3基因修饰SCs和TrkC基因修饰NSCs联合移植能够减少大鼠脊髓全横断损伤处的瘢痕组织,促进下行神经纤维的再生。

管灸对面神经损伤家兔面神经核内受体TrkC表达的影响

目的:研究管灸对面神经损伤家兔面神经核中受体Trk C表达的影响。方法:采用机械压榨法制作家兔面神经损伤模型,将家兔随机分为假手术组、模型组、管灸组、热疗组,通过免疫组化学、组织原位杂交和RT-PCR三种方法分别检测各组面神经核中受体Trk C蛋白和基因的表达变化。结果:在三种方法检测下发现家兔面神经损伤后面神经核Trk C的表达均明显下降(P<0.01),管灸组面神经核Trk C的表达均显著高于模型组(P<0.01)结论:管灸疗法可显著提高面神经核中受体Trk C的表达,这可能对促进面神经损伤后的再生和修复有重要作用。

人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体的表达和生物学活性检测

目的探讨人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体(Adeno-TrkC)在神经干细胞内的表达及其对神经干细胞的生物活性作用。方法用RT-PCR检测Adeno_TrkC感染的293细胞的TrkCmRNA含量。用免疫细胞化学和Westernblotting检测Adeno-TrkC感染的神经干细胞表达TrkC受体蛋白。在体外培养条件下,观察人神经营养素-3(NT-3)对感染了Adeno-TrkC的神经干细胞分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞的影响。结果在Adeno-TrkC感染的293细胞和神经干细胞中检测到TrkCmRNA和TrkC受体蛋白,且表达产物和其配体NT-3结合后能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞,分化率达到55.2%,均高于其他对照组。结论Adeno_TrkC能在神经干细胞内表达TrkC受体蛋白,这种TrkC受体蛋白具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞活性的作用,这为进一步应用NT-3和TrkC联合进行基因治疗中枢神经损伤研究奠定了基础。

TrkC在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨TrkC在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集1994～2006年住院接受根治手术的女性乳腺癌患者共100例,进行随访;收集同期接受手术的乳腺纤维腺瘤或乳腺增生症共30例。分3组:实验组为术后复发转移者共46例,对照组1为手术时间及发病年龄相近的术后未发生复发转移者共54例,对照组2为乳腺纤维腺瘤或乳腺增生症共30例。常规病理蜡块切片,应用免疫组织化学技术,检测TrkC在3组中的表达情况。结果实验组TrkC的表达率均较对照组1、2高(P<0.05);TNM分期越差,肿瘤越大,TrkC表达越强(均P<0.05)。结论 TrkC是乳腺癌根治手术后复发转移的危险因素;TrkC是评估乳腺癌术后预后的肿瘤标志物;

正常大鼠脊髓内微血管及TrkC分布的研究

目的研究正常大鼠脊髓内微血管及TrkC分布情况及意义.方法采用墨汁灌注及免疫组织化学双标技术显示大鼠脊髓内微血管及TrkC分布.结果脊髓微血管主要分布在灰质,而且在灰质中腹角微血管密度大于背角.腹角、背角及白质三个部位之间的平均血管密度相比均有显著性差异(P<0.01);在正常脊髓中,TrkC免疫阳性反应物主要分布在腹角、腹角外侧、中央管背外侧及背角深部.结论微血管及TrkC主要分布于脊髓腹角,以IX板层最为显著,提示脊髓运动神经元的存活及其完成生理功能时亦需要大量的血供及神经营养因子NT-3的支持.

MRMT-1致骨癌痛模型脊髓内TRKC表达变化

目的:研究TRKC在MRMT-1骨癌痛模型的表达变化。方法:利用MRMT-1细胞胫骨注射复制骨癌痛大鼠模型,同时设立正常组做对照。术后28 d活取脊髓腰膨大采用Real Time PCR检测TRKC表达量,并进行统计学分析。结果:正常组大鼠脊髓可见TRKC mRNA表达,骨癌痛组大鼠脊髓中TRKC mRNA表达较正常组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验发现骨癌疼大鼠脊髓内TRKC表达明显下降,为进一步研究TRKC与疼痛的关系提供了重要依据。

束缚应激引起小鼠脾内TrkC mRNA水平变化

用地高辛标记的寡核苷酸探针进行RNA缝隙杂交,观察了束缚应激不同阶段的BALB/c小鼠脾内TrkC mRNA表达水平的变化。结果显示脾内TrkC mRNA于应激8h时表达明显增加,而于4和12h时均有不同程度的降低。提示NT-3/TrkC系统在应激引起的神经-免疫系统相互调节中起一定作用。

树突状细胞通过NT-3/TrkC信号通路调控神经干细胞存活的体外研究

目的研究共培养状态下树突状细胞(dendritic cell,DC)对神经干细胞(neural stem cell,NSC)存活的影响及其作用机制。方法体外分离、纯化SD大鼠原代DC和NSC,将二者用Transwell技术共培养,用NT-3特异性抗体中和NT-3的表达;然后采用qRT-PCR方法检测DC中神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)的mRNA水平,流式细胞术检测NSC凋亡;同时用免疫荧光、Western blot技术确定NSC表面NT-3特异性受体Trk C的表达。结果与DC单独培养组相比,共培养体系中,DC表达NT-3水平显著性增强(P<0.05);同时共培养能显著增加NSC存活,该效应能被NT-3特异性中和性抗体阻断;共培养能够增加NSC中NT-3特异性受体TrkC表达(P<0.05),并上调TrkC磷酸化水平,而NT-3特异性抗体能够抑制TrkC表达和磷酸化上调(P<0.05)。结论 DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达,高表达的NT-3则通过NSC膜上的TrkC受体促进NSC的存活。

部分背根切断对备用背根节trkC表达的影响

为探讨去部份背根（切除一侧L1－L5， L7－S2背根节，保留L6背根为备用根）猫备用L6背根节（DRG）trkC表达的变化，用特异的trkC兔抗血清以免疫组织化学方法染片，观察trkC在DRG的分布。计数正常组一侧，术后3天及10天组手术侧L6 DRG大、小神经元trkC的阳性细胞数，结果用q检验进行统计分析。结果：trkC的免疫阳性反应（trkC－IR）主要分布于DRG的大细胞及少数小神经元胞浆内。部分去背根后3天， L6 DRG大、小 trkC－IR阳性神经元数与正常组者比较无显著变化（P＞0.05）。但10天组者，trkC阳性大神经元的数量明显减少，而小神经元数则明显增多（P＜0.05），表明部分背根切断使备用DRG trkC的表达在大神经元减少，而小神经元则增加。以上提示，备用DRG trkC的表达变化可能与脊髓可塑性有关系。

推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究

目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制。方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后统计比较各组差异。结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高。结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复。

ShcD通过PTB和SH2结构域和TrkC受体相互作用

目的探讨ShcD与TrkC的相互作用,以深入认识TrkC下游信号转导的分子机制。方法利用酵母双杂交技术,将TrkC及TrkC各种突变体的胞内区分别克隆到酵母质粒pAS2-1中,将ShcD及ShcD的4个结构域(CH2、PTB、CH1和SH2结构域)分别克隆到酵母质粒pACT2中,将它们分别共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测它们之间的相互作用。将TrkC克隆进pmRFP载体(带红色荧光蛋白),ShcD克隆进pEGFP载体(带绿色荧光蛋白),并将pmRFP-TrkC和pEGFP-ShcD共转染至293T细胞中,采用荧光共聚焦显微镜观察其定位情况。结果ShcD可以和TrkC但不能和激酶失活突变体TrkCM1(K572A)结合;PTB和SH2结构域均可以与TrkC受体结合并且PTB结构域结合于TrkC的NPQY模体;ShcD和TrkC在293T细胞中共同定位于胞膜和胞浆中。结论ShcD通过PTB和SH2结构域以依赖于受体激酶活性的方式结合TrkC。

施万细胞通过NT-3/TrkC信号通路促进SACC嗜神经侵袭的研究

目的:研究共培养状态下施万细胞(SCs)对唾液腺腺样囊性癌细胞(SACCs)侵袭、迁移能力的影响及可能机制。方法:用ELISA等检测NT-3、TrkC在共培养状态下的表达情况;通过划痕、侵袭、迁移实验和3D共培养实验,评估各组细胞的侵袭与迁移能力。结果:共培养条件下,NT-3,TrkC表达较单独培养明显升高;SACC-83细胞和SCs的侵袭、迁移能力均显著增强;SCs可早期定向趋化迁移至肿瘤。结论:NT-3/TrkC信号通路可能通过介导SCs向肿瘤细胞的迁移来促进SACC嗜神经侵袭的发生。