慢性间断缺氧通过上调大鼠海马HMGB1和NF-κB损伤学习记忆

目的:探索慢性间断缺氧(CIH)导致大鼠学习记忆功能障碍,以及对海马区高迁移率族蛋白1(HMGB1)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:制作CIH大鼠模型,40只SD大鼠分为常氧组(normoxia)、缺氧4周组(CIH4组)、缺氧8周组(CIH8组)和缺氧12周组(CIH12组)。采用Morris水迷宫评估大鼠学习记忆能力,免疫组织化学染色和ELISA法检测大鼠海马区HMGB1和NF-κB的表达。结果:与常氧组相比,CIH12和CIH8组的逃避潜伏期延长,穿越平台次数和平台所在象限停留时间显著缩短,CIH4组的无显著差异。另外,常氧组海马区HMGB1和NF-κB的表达未见明显表达,CIH4组可见少许表达,CIH8组和CIH12组可见明显表达,同时CIH12组的表达显著高于CIH8组。结论:CIH可导致大鼠的学习记忆功能下降,且间断缺氧时间越长对其学习记忆功能的影响越显著。此外,CIH还导致海马区HMGB1和NF-κB的表达水平升高,并且缺氧12周比8周增加更为明显。

HeLa细胞的反式作用因子CTF／NF－1与其顺式作用元件的特异性作用

本文运用凝胶延迟反应（ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎＡｓｓａｙ）和足迹法（Ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｉｎｇ）研究了ＨｅＬａ细胞核蛋白中的反式作用因子ＣＴＦ／ＮＦ－１与其对应的顺式作用元件的特异性作用。研究结果表明ＨｅＬａ细胞的ＣＴＦ／ＮＦ－１包含有不同分子量的组分，它们均能特异性结合于特异位点ＡＴＡＴＴＧＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡ序列，形成至少５种不同分子量形式的因子－元件复合物。这一结果对阐明ＣＴＦ／ＮＦ－１复杂多样的调控机制及其组成种类有重要意义。此外，本文还建立了一种制备核蛋白提取物的新方法，有效地解决了因反式作用因子含量极低带来的研究上的困难。

B7-1与B7-2对调节人IL-2基因的转录因子NF-κB和AP-1的相同作用

为了解B7共刺激对细胞因子 ,特别是对IL 2mRNA及转录因子NF κB和AP 1的影响 ,探讨B7介导的IL 2调节的分子机制 ,在异基因混合淋巴细胞反应 (MLR)体系中分别或联合加入抗B7 1、抗B7 2单克隆抗体和CTLA 4Ig以阻断B7/CD2 8信号传导 ,通过竞争性PCR定量检测其对IL 2和IL 4mRNA的影响 ,并初步测定IFN γmRNA的改变 ,同时用转染MHCⅡ类分子及联合转染等量B7 1或B7 2的NIH3T3转基因细胞tDR7,tDR7/B7 1和tDR7/B7 2刺激CD2 8+ T细胞 ,通过DNA 蛋白结合实验观察B7对IL 2转录因子NF κB和AP 1的影响。结果表明 :抗B7 2单抗和CTLA 4Ig可明显抑制B7介导的IL 2和IL 4mRNA合成 ,而抗B7 1单抗仅有轻度抑制作用 ,2种或 3种抗体联合应用时抑制作用相加。MLR 1 - 6小时 ,单独tDR7即可诱导NF κB的表达 ,联合转染B7早期对其结合活力无明显影响 ,6小时后tDR7诱导作用减弱 ,B7却可显著延长tDR7的诱导作用至 72小时。tDR7早期同样可诱导AP 1的表达 ,联合转染B7分子在 2 4小时内对其有一定的抑制作用 ,而在反应后期可延长tDR7对AP 1的上调作用 ,B7 1与B7 2间作用未见明显不同。结论 :B7通过减少IL 2mRNA降解和影响基因转录而上调IL 2分泌 ,并可同时影响多种细胞因子分泌 ;在转录水平B7 1与B7 2作用未见明显不同 。

F10基因对转录因子NF-κB、AP1活性的影响

目的:研究F10基因对转录因子NF-κB、AP1活性的影响。方法:质脂体共转染F10基因和报道质粒NF-κB-Luc、AP1-Luc,通过测定荧光素酶的活性以确定F10基因对NF-κB和AP1转录活性的影响;提取各实验组不同时点细胞核蛋白,用电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测AP1、NF-κB和DNA的结合活性。结果:F10基因瞬间转染A549细胞48h NF-κB-Luc和AP1-Luc荧光素酶的活性较其对照组分别下降0.3和上升2倍、AP1和NF-κB与DNA的结合活性分别上升23%和下降49%。结论:F10基因上调AP1活性、下调NF-κB的活性。

NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子转录活性的影响

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响。方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327)。将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性。结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05)。结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控。

TLR4、AP-1及NF-κB在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、转录因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)(通常是c-Jun和c-Fos的异源二聚体)及核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测54例NSCLC组织及54例癌旁正常肺组织中TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果:TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白的表达在NSCLC组织中高于癌旁正常肺组织,且差异具有统计学意义(P<0.05)。TLR4、AP-1及NF-κB蛋白的表达分别与NSCLC组织的分化程度、有无淋巴结转移及组织类型有关。在NSCLC组织中,TLR4与c-Jun、c-Fos及NF-κB的蛋白表达水平之间呈正相关。结论:TLR4、AP-1及NF-κB的高表达可能与NSCLC的发生发展有着密切关系,对其检测有助于判断肺癌的恶性程度及生物学行为。

NF-1在瘢痕疙瘩中表达的研究

目的:通过比较人瘢痕疙瘩与正常皮肤组织中NF-1(nulear factor 1)在mRNA水平的表达量,来研究该基因在瘢痕疙瘩中发生的变化,并探讨其意义。方法:收集了3例正常皮肤标本和3例瘢痕疙瘩标本,用荧光定量PCR分别检测两种组织中NF-1在mRNA水平的表达量。结果:正常皮肤组和瘢痕疙瘩组中NF-1在mRNA水平的表达差异显著(P<0.05),正常皮肤组中NF-1的表达量是瘢痕疙瘩组的35倍。结论:NF-1mRNA的高表达可能与瘢痕疙瘩疙瘩的发生相关,具体机制尚需进一步研究。

肺炎衣原体感染和高脂血症对心肌细胞NF-kappa B和AP-1的影响

目的:探讨肺炎衣原体感染和高脂血症对心肌细胞炎症的影响。方法:用间接免疫荧光的方法检测肺炎衣原体感染或给予高脂饮食的C57BL/6J小鼠,观察NF-κB亚单位P50和c-Fos在小鼠心肌细胞中表达程度。结果:肺炎衣原体感染和高脂血症能引起心肌细胞中P50和c-Fos的激活。对照组心肌细胞核中未见P50和c-Fos的表达,而3个实验组心肌细胞核中都有不同程度的P50和c-Fos表达。实验组和对照组比较P<0.01,在3个实验组间无显著差异。结论:在肺炎衣原体感染和高脂血症形成的早期,心肌细胞的炎症通路已被激活。

HIV-1的转录因子NF-κB及其抑制剂的研究进展

在病毒复制循环过程中,HIV-1的转录是其中的关键步骤,可作为HIV-1治疗的新靶点。在此过程涉及的所有因子中,细胞核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是HIV-1转录过程中重要的诱导剂。NF-κB通过与HIV-1的长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)增强子区的连接来激活HIV-1的转录。许多化合物通过抑制NF-κB的活性来抑制HIV-1的转录。本文综述了NF-κB对HIV-1转录过程的调节及当前NF-κB抑制剂的研究进展。

三七皂苷对造血细胞AP-1家族转录调控蛋白NF-E2,c-jun和c-fos的诱导作用

为了进一步研究三七总皂苷 (PNS)对转录调控蛋白AP 1家族的主要成员NF E2、c jun和c fos转录因子的诱导作用 ,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径 ,选用人粒系HL 6 0、红系K5 6 2、巨核系CHRF 2 88和Meg 0 14个细胞株作靶细胞 ,经PNS刺激处理后提取细胞核蛋白 ,分别用人抗NF E2、c jun和c fos抗体与核蛋白作Wes ternblot杂交试验 ,并用3 2 P标记的具有与NF E2、c jun和c fos转录因子共同结合位点的AP 1双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验 (EMSA)。结果表明 :①Westernblot显示PNS诱导HL 6 0 ,K5 6 2 ,CHRF 2 88和Meg 0 14株细胞的NF E2和c jun转录因子蛋白水平分别是未经处理细胞的 1.5 - 2 .5倍和 2 .0 - 3.0倍。诱导的c fos蛋白在K5 6 2 ,CHRF 2 88和Meg 0 13株细胞分别提高 2 .0 - 3.0倍 ,但HL 6 0细胞的c fos在PNS处理后无明显变化 ;②EMSA显示AP 1转录调控蛋白与DNA结合复合物的特异性条带 ,经PNS诱导后 4株细胞的AP 1蛋白与DNA复合物条带密度明显高于未经处理的细胞。结论 :PNS在造血细胞内对基因的转录调控涉及到AP 1家族转录因子成员NF E2、c jun和c fos,通过诱导这些转录因子量的增加 ,与特异性DNA促进子结合的活性增高而调控与细胞增殖分化相关的基因的表达。

慢性阻塞性肺疾病患者血清NF-κB、SIRT1、FKN水平变化及预测预后的价值

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清核转录因子-κB(NF-κB)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、不规则趋化因子(FKN)水平变化及与预测预后的价值。方法选取2018年1月-2020年2月吉林省前卫医院及哈尔滨医科大学附属第一医院呼吸内科收治的198例COPD患者为研究对象,根据患者1年后生存情况分生存组(157例)和病死组(41例)。比较两组患者血清NF-κB、SIRT1、FKN水平、BODE指数,分析血清NF-κB、SIRT1、FKN水平变化与BODE指数、预后间关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析各生化指标预测COPD预后的价值。结果与生存组比较,病死组血清NF-κB、FKN水平升高,SIRT1水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BODE指数1级比较,BODE指数2级、3级、4级血清NF-κB、FKN水平逐级升高,血清SIRT1水平逐级降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清NF-κB、FKN水平与BODE指数呈正相关,血清SIRT1水平与BODE指数呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归方程校正混杂因素后,NF-κB、SIRT1、FKN仍与COPD患者病死有关(P<0.05);联合预测COPD患者预后的AUC值为0.963,大于单一指标预测(P<0.05)。结论COPD患者血清NF-κB、SIRT1、FKN水平变化与其病情发生发展关系密切,且是预后的显著相关因素,联合检测可为临床评估预后提供参考,便于临床积极完善治疗方案。

热休克转录因子2通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进克罗恩病炎症反应的作用机制研究

目的:研究热休克转录因子2(HSF2)通过HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应的作用机制。方法:2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)构建小鼠克罗恩病模型,将小鼠分为正常组,模型组,对照组,实验组。对照组采用高迁移率族蛋白1(HMGB1)抗体处理阻断HMGB1信号,对照组和实验组均采用重组HSF2干预。观察小鼠一般生活状况(包括:生存状态、体质量状态、大便性状、进食饮水状态、毛发光泽度、精神状态和活动状态),小鼠疾病活动指数(DAI)评估小鼠疾病情况,苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肠组织病理改变,免疫组织化学染色(IHC)检测小鼠肠组织中p-65的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠结肠组织中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB(p-P65)、髓样分化因子(MyD88)的表达水平。结果:TNBS成功诱导小鼠克罗恩病,实验组小鼠一般生活状态较差,且DAI评分显著高于对照组、模型组,具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示实验组小鼠结肠黏膜糜烂、水肿、炎症反应程度高于模型组和对照组。实验组小鼠结肠组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组组织中HMGB1、TLR4、NF-κB(p-P65)、MyD88的表达水平显著高于模型组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HSF2可以通过激活HMGB1-TLR4-NF-κB信号促进小鼠克罗恩病炎症反应。

梓醇对T2DM大鼠大血管病变的保护作用及与oxLDL/LDL和NF-κB信号通路的关系

目的探讨梓醇对2型糖尿病(T2DM)大鼠大血管病变的保护作用与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)/低密度脂蛋白(LDL)和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的关系。方法用高糖高脂饲料喂养和腹腔注射STZ复合因素对大鼠进行T2DM造模,将大鼠分为模型组、二甲双胍组(134 mg·kg^(-1)·d^(-1))、梓醇组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),另设对照组,每组10只,模型组和对照组给予相同体积的0.9%氯化钠溶液,干预4周。结束后,自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平;酶联免疫吸附法测定人巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、oxLDL含量;RT-PCR法检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA表达;Western blot检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达;透射电镜观察大鼠主动脉内皮细胞结构。结果对照组大鼠主动脉内皮细胞形态正常,模型组细胞显著肿胀,连续性中断、见空泡,部分内皮细胞有显著脱落,细胞核褶皱变形,线粒体、内质网中度肿胀,嵴肿胀紊乱或溶解,见脂滴、糖原颗粒;二甲双胍组和梓醇组内皮细胞形态结构轻微肿胀,线粒体、内质网结构正常,细胞核轻微变形,部分内皮细胞有轻微脱落,损伤程度显著轻于模型组。与对照组比较,模型组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性升高(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍组和梓醇组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性降低(P<0.05)。结论梓醇可能通过oxLDL/LDL和NF-κB信号通路减轻T2DM大鼠大血管病变。

Maresin-1对急性胰腺炎小鼠炎症因子及组织病理损伤的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路,探究Maresin-1对急性胰腺炎(AP)小鼠的影响。方法随机将50只小鼠分为假手术组(sham组)、急性胰腺炎组(AP组)、Maresin-1低剂量组(Mar-1 L组)、Maresin-1高剂量组(Mar-1 H组)和p38 MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组),每组各10只。除sham组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射雨蛙素联合脂多糖(LPS)建立AP模型;sham组注射等量0.9%氯化钠溶液。Mar-1 L组、Mar-1 H组和SB203580组分别在注射Maresin-1和SB203580雨蛙素3 h后,第1次腹腔注射Maresin-1(25、50 ng/kg)和SB203580溶液(5 mg/kg),12 h后进行第2次腹腔注射;sham组和AP组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、脂肪酶、炎性因子水平;试剂盒测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测胰腺组织中CD68表达;RT-qPCR检测胰腺组织炎性因子及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达。结果sham组小鼠胰腺组织结构完整,无细胞坏死和出血;与sham组比较,AP组可见胰腺组织结构紊乱,腺泡细胞水肿、坏死,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度升高,血清和胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平升高,IL-4、IL-10水平降低,巨噬细胞数增多(P均<0.05);胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与AP组比较,Mar-1 L组、Mar-1 H组、SB203580组胰腺损伤明显减轻,仅见腺泡细胞少量坏死与出血,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度降低,血清和胰腺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,IL-4、IL-10水平升高,胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平降低,巨噬细胞数减少(均P<0.05)。结论Maresin-1能够缓解AP小鼠胰腺组织病理损伤,减轻胰腺组织中性粒细胞和巨噬细胞浸润,降低胰腺及全身炎症反应,其可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路发挥作用。

人冠状动脉内SDF-1/CXCR4轴表达水平与斑块稳定性的相关性

目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF)-1/CXCR4轴在人冠状动脉斑块稳定及猝死中的作用及相关性,并寻找其可能参与的信号通路。方法 收集尸检案例的冠脉标本77例,其中非冠心病猝死但明确诊断为冠心病患者24例(CHD组),冠状动脉粥样硬化性心脏病猝死者25例(SCD组),以非冠心病猝死并无动脉粥样硬化者28例为对照组。运用苏木素-伊红(HE)染色检测血管内膜厚度、坏死核心厚度、纤维帽厚度、血管腔面积分数;利用免疫组织化学技术、Western印迹检测冠脉内膜SDF-1、CXCR4及核转录因子(NF)-κB p65蛋白的表达量,分析其表达与斑块结构与其稳定性的关系。结果 与对照组比较,病变各组内膜厚度增高、纤维帽变厚、血管狭窄程度显著增高(P<0.05);病灶内SDF-1、CXCR4蛋白表达水平与内膜厚度、坏死区厚度及血管腔面积分数呈显著正相关(P<0.05)。与对照组比较,病变各组CXCR4与NF-κB p65通路蛋白的表达量显著升高(P<0.05),并呈显著正相关关系(r=0.918,P<0.001)。结论 人冠状动脉粥样硬化病灶内SDF-1/CXCR4轴的表达升高可能通过调节NF-κB相关信号通路从而影响斑块结构稳定性。

ICAM-1、NF-κBp65、sICAM-1检测用于浆细胞性乳腺炎诊断价值评价

目的:将ICAM-1、NF-κBp65、sICAM-1检测用于浆细胞性乳腺炎诊断中,评价其临床价值。方法:选某医院88例浆细胞性乳腺炎患者为对象,随机分成两组,对照组:44例,患者患有的疾病是乳腺增生;试验组:44例,患者患有的是乳腺炎。对两组患者均进行SABC及ELISA检测分析,检查结果。结果:经分析可知,患者在手术后的ICAM-1、NF-κBp65的表达越明显,其染色程度越深;而试验组染色深于对照组;且试验组与对照组患者sICAM-1相比,显然有所下降。结论:ICAM-1、NF-κBp65、sICAM-1可作为检测浆细胞性乳腺炎标志物,其与浆细胞性乳腺炎的发生、发展密切相关,其可作为浆细胞性乳腺炎诊断的评估指标。

赤芍总苷通过Nrf2/HO-1通路对糖尿病肾脏病大鼠肾纤维化的改善作用研究

目的:探讨赤芍总苷(TPG)对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠肾纤维化的改善效果及可能作用机制。方法:从60只雄性Wistar大鼠中随机选择10只作为对照组,剩余50只大鼠利用尾静脉注射链脲佐菌素(55 mg/kg)诱导DKD大鼠模型。成功建模43只,随机选择40只并随机分为模型组、TPG低剂量组、TPG高剂量组及二甲双胍组,每组10只。各给药组分别灌胃给予相应药物,模型组和对照组灌胃给予等体积生理盐水,连续给药12周观察大鼠一般状态,计算肾脏指数(KI);采用ELISA法测量24 h尿白蛋白(Alb)含量;采用生化分析仪检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾脏组织形态学变化;高碘酸-希夫(PAS)染色观察系膜基质、基底膜组织学变化;Masson染色观察胶原蛋白沉积情况;采用比色分析法检测大鼠肾组织中氧化应激因子丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用Western blotting法检测总转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、核Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的相对表达量。结果:成功构建DKD大鼠模型;模型组大鼠一般体征失常,肾组织出现明显病理变化,肾组织结构改变,炎症细胞浸润明显,肾小球系膜基质扩张、基底膜增厚,胶原蛋白过度沉积,肾纤维化严重。TPG低、高剂量组及二甲双胍组大鼠一般体征逐渐恢复正常,病理损伤逐渐好转,肾小球系膜基质范围减小、基底膜变薄,胶原蛋白沉积减弱,肾纤维化逐渐改善。模型组大鼠KI,24 h尿Alb含量,FBG、Scr、BUN,以及肾组织中MDA含量和α-SMA、FN蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05);肾组织中SOD活性、核Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均低于对照组(P<0.05)。TPG低、高剂量组及二甲双胍组大鼠KI,24 h尿Alb含量,FBG、Scr、BUN,以及肾组织中MDA含量和α-SMA、FN蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05);肾组织中SOD活性、核Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均高于模型组(P<0.05)。结论:TPG可改善DKD大鼠肾纤维化程度,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。

丹参酮Ⅱ_A对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤及ERK/Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对脂多糖(LPS)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用,及其潜在的分子作用机制。方法:TanⅡA(5,10,20μmol·L^-1)处理大鼠H9c2心肌细胞,10μg·ml^-1LPS诱导建立心肌细胞损伤模型。CCK8法检测H9c2心肌细胞增殖情况。流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹(WB)检测H9c2心肌细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白水平,荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与正常对照组相比,LPS模型组细胞增殖能力、p-ERK、核内Nrf2、HO-1蛋白水平降低,细胞凋亡率、核外Nrf2、ROS表达水平升高(P<0.05)。与LPS模型组相比,TanⅡ_A低剂量组细胞增殖、p-ERK、核内Nrf2、HO-1蛋白水平升高,细胞凋亡率、核外Nrf2蛋白表达水平降低(P<0.05);TanⅡA中、高剂量组细胞增殖、p-ERK、核内Nrf2、HO-1蛋白水平升高,细胞凋亡率、核外Nrf2、ROS表达水平降低(P<0.05)。各组EPK差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TanⅡA对LPS诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1通路信号实现,为TanⅡA应用于LPS诱导的心肌细胞损伤治疗提供一定的参考依据。

BMAL1对H_(2)O_(2)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制探讨

目的探讨节律基因BMAL1对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法构建BMAL1稳定过表达的H9C2细胞系后,实验分为2个部分。(1)实验1。对照组、H_(2)O_(2)组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组(BMAL1稳定过表达H9C2细胞)、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组(0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h)。(2)实验2。H_(2)O_(2)组、BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达+抑制NRF2+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组(NRF2抑制剂2μmol/L的ML385预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)、BMAL1过表达+抑制HO-1+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2))组(HO-1抑制剂5μmol/L的Znpp预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H_(2)O_(2)处理24 h)。CCK-8法检测细胞活力,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、TBA法检测丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测BMAL1、核因子E2相关因子2(NRF2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果(1)与Control组相比,BMAL1-OE组BMAL1 mRNA表达水平升高,H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性下降、MDA含量增加,BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性增加,MDA含量减少,而BMAL1、NRF2和HO-1蛋白相对表达水平升高(P<0.05);(2)与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组和BMAL1-OE+Znpp+H_(2)O_(2)组细胞活力和细胞上清液SOD活性降低,MDA含量增加(P<0.05)。结论BMAL1可能通过上调NRF2/HO-1信号轴,减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。