IL-31与TGF-β1在小鼠肺纤维化过程中的表达及关系

目的探讨白细胞介素3l与转化生长因子13，在博莱霉素（BLM）致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达规律以及关系。方法取48只雄性昆明种小鼠，随机分为两组：对照组和实验组，分别给予生理盐水和博莱霉素（5mg／kg）一次性气管内灌注后，第7、14、21和28d处死小鼠，应用WesternBlotting法测定肺组织中白细胞介素3l蛋白与转化生长因子β1蛋白表达。结果1）实验组肺组织中白细胞介素31与转化生长因子13，蛋白表达水平均高于对照组（P〈0．05）。2）实验组中白细胞介素31蛋白表达从第7d开始高于对照组，第21d达到高峰，第28d降低。转化生长因子β1蛋白表达高峰在第7d，此后无明显下降，保持高水平表达。结论白细胞介素31与转化生长因子β1在肺纤维化形成过程中存在高表达，尤其白细胞介素31在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。转化生长因子β1除本身具有促纤维化功能之外，还可能刺激白细胞介素31的表达。

沉默转化生长因子β1对肝星状细胞-T6生长及增殖的影响

目的观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响。方法用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照。倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达变化;CCK-8法检测TGFβ1 shRNA慢病毒对HSC-T6细胞生长及增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测HSC-T6细胞TGFβ1及增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达,并予以定量分析。结果经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSCT6细胞显著表达GFP。CCK-8法检测结果显示:经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞的生长及增殖慢于对照细胞,培养48 h后差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Western blotting检测结果显示:TGFβ1shRNA慢病毒能有效沉默HSC-T6细胞TGFβ1,并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达,与对照细胞的差异有统计学意义(P<0.01)。结论沉默TGFβ1能明显抑制HSC-T6的生长及增殖,并下调其核抗原PCNA的表达。

双环醇对肺间质纤维化小鼠TGF-β_1表达的影响

目的采用盐酸博来霉素建立小鼠肺间质纤维化模型,观察双环醇对小鼠肺间质中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将54只小鼠随机分为正常对照组、模型组、双环醇干预组,各18只。模型组和双环醇干预组小鼠经乙醚麻醉后经气管滴入盐酸博来霉素(5μg/g),建立肺间质纤维化动物模型。双环醇干预组于模型建立1天后予双环醇10mg/kg灌胃,正常对照组与模型组予等量生理盐水灌胃,于干预后第7、14、28天3个时间点各组随机处死6只小鼠,取肺组织进行病理学观察并按照Szapiel方法评价肺泡炎和肺纤维化程度,免疫组化染色观察TGF-β1蛋白的表达。结果模型组干预后第7、14、28天肺间质损伤评分分别为3.37±0.80、5.03±0.75、6.12±1.09,而双环醇干预组分别为2.22±0.73、3.86±0.79、5.24±1.05,双环醇干预组明显低于模型组(P<0.05)。模型组干预后第7、14、28天肺组织TGF-β1的相对表达分别为9.67±1.92、12.53±1.43、14.34±1.43,而双环醇干预组分别为5.02±1.27、8.45±1.19、10.81±1.73;双环醇干预组明显低于模型组(P<0.05)。结论双环醇对小鼠肺间质纤维化具有显著的改善作用,可减轻小鼠肺间质纤维化程度,其机制可能与双环醇下调TGF-β1的表达有关。

氟伐他汀在大鼠腹膜透析模型中对腹膜的保护作用

目的：探讨氟伐他汀（fluvastatin,Flu）对腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）大鼠腹膜组织形态影响的初步研究。方法：通过SD雄性大鼠（体重180-200 g）腹腔注射4.25%浓度的葡萄糖腹透液的方式模拟腹膜透析。随机分为5个组：①正常对照组;②4.25%腹透液组;③单纯Flu组;④生理盐水组;⑤Flu干预的4.25%腹透液组。4周后留取各组大鼠壁层腹膜组织,光镜观察各组大鼠壁层腹膜形态学的变化,同时采用RT-PCR法测定各组大鼠腹膜转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）及纤维连接蛋白（fibronectin,FN）mRNA的表达。结果：光镜下HE染色显示4.25%腹透液组大鼠腹膜较正常对照组显著增厚,Flu干预组的壁层腹膜厚度薄于未干预组,生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜的形态较正常对照组未见明显改变。4.25%腹透液组大鼠腹膜TGF-β1及FN mRNA的表达量均高于正常对照组（均P 〈 0.05）,Flu干预组两者mRNA的表达量均明显低于未干预组（均P 〈 0.05）,生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜两者的mRNA表达量较正常组无明显统计学意义。结论：长期使用高糖腹透液会改变腹膜的结构,氟伐他汀在一定程度上对腹膜有保护作用,但具体机制仍需进一步研究。

热休克蛋白47在转化生长因子β1诱导肾小管间质纤维化中的作用

目的探讨热休克蛋白47（HSP47）在肾小管间质纤维化中的作用及其可能机制。方法常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2），分为对照组、转化生长因子B1（TGF-β1）组、HSP47-siRNA组。RT-PCR检测HSP47、胶原Ⅳ、纤连蛋白（FN）、组织型纤溶酶原激活物抑制剂1（PAl．1）的mRNA表达。Western印迹检测HSP47、胶原1V、FN蛋白表达。ELISA检测PAl-1的蛋白量。结果HK-2细胞有HSP47表达。不同浓度TGF-β1（0、2．5、5、10μg／L）干预不同时间（12、24、48h）时，HSP47基因和蛋白表达呈浓度和时问依赖性增高，10Ixg／LTGF．p1干预HK-2细胞48h时，HSP47mRNA和蛋白表达最强。不同浓度TGF-β1（0、5、10μg／L）干预HK-2不同时间（12、24、48h）时，胶原IV、FN、PAl-1mRNA和蛋白表达亦呈浓度和时间依赖性增高，10μg／LTGF-β1作用48h时，3者mRNA和蛋白表达最强。与TGF-β1组比较，HSP47．siRNA组的HSP47、胶原1V、FN、PAl-1mRNA和蛋白表达都明显下调。结论HSP47可促进肾小管间质纤维化，其机制可能与上调胶原1V、FN、PAl-1表达有关。

苏黄止咳胶囊联合舒利迭对咳嗽变异性哮喘患者血清TNF-α，TGF-β1和IgE水平的影响

目的：分析苏黄止咳胶囊联合舒利迭对咳嗽变异性哮喘患者血清肿瘤坏死因子-aTNF-α，、转化生长因子-β1（TGF-β1）和免疫球蛋白E（IgE）水平的影响。方法：选择2015年3月-2016年9月于我院就诊的咳嗽变异性哮喘患者90例，按抽签法分成对照组及观察组，每组45例。对照组采用舒利迭治疗，观察组基于对照组加以苏黄止咳胶囊治疗，比较两组治疗前后血清TNF-α，TGF-β1、IgE水平、外周血嗜酸性粒细胞（Eos）计数、呼出气一氧化氮（FeNO）、用力肺活量（FVC）、1秒用力呼气容积（FEVl）、咳嗽症状积分、临床疗效和不良反应的发生情况。结果：治疗后，观察组血清TNF-α，TGF-β1、IgE、Eos、FeNO均显著低于对照组，FVC、FEVl水平、咳嗽症状积分、总有效率均明显高于对照组（P〈0．05）。两组治疗期间均未见明显不良反应。结论：苏黄止咳胶囊联合舒利迭治疗咳嗽变异性哮喘患者的临床疗效确切，可有效降低患者血清TNF-α，TGF-β1、IgE等炎症因子水平。

SUMO介导截短型人HGF制备及抗肝纤维化作用

目的研究截短型人肝细胞生长因子突变体(tvNK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2纤维化的影响。方法把经PCR和双酶切的小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)和tvNK1的融合基因SUMO-tvNK1插入原核表达载体pET28a,诱导表达和Ni2+亲和层析纯化SUMO-tvNK1;进一步经SUMO蛋白酶Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,MTT法观察其对TGF-β1诱导LX-2纤维化细胞增殖的影响,qPCR及蛋白印迹(WB)检测其对I型胶原蛋白(col1α1)和α–平滑肌球蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。结果宿主菌Rosetta/pET28a-SUMO-tvNK1在37℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h获得SUMO-tvNK1的可溶性表达,将超声破碎后上清液经Ni2+亲和层析成功获得SUMO-tvNK1,进一步经Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,SDS-PAGE鉴定其分子量约为22.0 kDa,MTT显示20和40 ng/mL的tvNK1能明显抑制TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖,qPCR及WB显示20和40 ng/mL的tvNK1能显著抑制活化的LX-2细胞中Col1α1和α-SMA在m RNA和蛋白水平表达。结论 SUMO蛋白可用于制备tvNK1,其能抑制TGF-β1活化的LX-2细胞增殖并具有抗纤维化作用,为进一步体内外功能研究打下基础。