口服转胸腺素α1基因聚球藻对小鼠T细胞亚群作用的研究

为探讨口服后转胸腺α1(Tα1)基因聚球藻对T细胞亚群的作用,将小鼠随机分为空白对照组、野生藻组、转化藻(小剂量、中剂量和大剂量)组和日达仙组,用灌服的方式,给予空白对照组20mL·kg^(-1)的生理盐水,野生藻组0.4g·kg^(-1)的野生聚球藻;转化藻小、中、大剂量组,分别0.2g·kg^(-1)、0.4g·kg^(-1)和0.6g·kg^(-1)的转Tα1基因聚球藻;日达仙组则肌注给予3.2mg·kg^(-1)的胸腺素α1(日达仙)。结果表明转Tα1基因藻口服后可显著提高CD3亚群水平,显著提高CD4亚群水平,明显提高CD4/CD8的比值。提示转Tα1基因聚球藻具有增强机体免疫功能的作用。

利用响应面方法优化转小鼠金属硫蛋白-Ⅰ基因聚球藻7002的培养基成分

为实现转小鼠金属硫蛋白基因-Ⅰ聚球藻7002的高密度培养,并将其应用于实际的重金属废水处理过程,首先需要对培养基的成分进行优化。本文利用响应面这一多因素过程优化的有效工具,通过全因子实验、最陡爬坡实验和中心组合实验,对转小鼠金属硫蛋白基因-Ⅰ聚球藻7002培养基的主要成分以及初始pH进行了优化。优化后的培养基组成为:NaHCO_3 1.696 g/L,NaNO_3 8.57 g/L,初始pH为8.57,其他成分同Medium A。优化条件分别在2 L和20 L气升式光生物反应器中得到了验证,最大细胞浓度分别达到每升4.16 g干重和每升3.12 g干重,分别比优化前提高了9倍和7倍,从而为其产业化应用打下基础。

人表皮生长因子(hEGF)基因在蓝藻中的表达

人表皮生长因子 (hEGF)是由 5 3个氨基酸组成的蛋白 ,在临床上内服与外敷可促进内外表皮细胞的生长。将人工合成的hEGF基因连接到质粒pRL_489上 ,位于启动子psbA下游。验证连接成功后 ,用三亲接合转移方法将载体pRL_hEGF导入聚球藻Synechococcussp .PCC 70 0 2和鱼腥藻Anabaenasp .PCC 712 0。由于pRL_hEGF没有能在单细胞蓝藻中自主复制的复制子 ,通过筛选 ,hEGF在聚球藻 70 0 2中是整合到蓝藻染色体上进行表达的。用PCR扩增的方法在两种转基因藻中均检测到hEGF基因的存在。放射免疫分析证明 ,hEGF基因在两种转基因藻中均得到了表达。而且 ,在聚球藻 70 0

转hTNF-α基因聚球藻培养条件的初步研究

以转hTNF-α基因聚球藻7002为对象,在摇瓶培养下对其生长条件进行了初步研究.结果表明,当光照强度为100 μmol/(m2·s)时,藻细胞生长速率最大;35℃为其最佳培养温度;氯化钠浓度为12～24 g/L时生长良好,最适浓度为24 g/L;转hTNF-α基因的聚球藻7002能利用铵盐和硝酸盐为氮源,其中硝酸盐对其生长最有利,硝酸钠最适浓度为1 g/L;加入有机碳源可以显著促进藻细胞生长,其中5 g/L的蔗糖对其促进作用最明显.

转基因聚球藻7942培养中光传递及其对细胞生长的影响

对转人源胸腺素α1基因聚球藻7942光生物反应器分批培养过程中光的分布、平均光强变化及其对藻细胞生长的影响进行了分析. 结果表明,Hyperbolic光衰减模型较之Lambert-Beer光衰减模型能更好地描述转基因聚球藻7942培养液中的光衰减;随着藻细胞密度的增加,光生物反应器内平均光强不断减小,藻细胞的光能比吸收速率也不断降低,反应器中'暗区'体积不断加大;培养时间0~1.5 d,藻细胞能获得充足光能,因而呈指数生长;1.5 d后藻细胞处于光限制,比生长速率不断下降,但体积光能吸收速率达到最大并保持恒定,藻细胞进入线性生长期;5 d后光生物反应器'暗区'体积超过了反应器总体积的50%,藻细胞吸收的光能用于维持的比例不断增加,从而导致生长速率下降;培养8 d,转基因聚球藻7942中人源胸腺素α1表达量为4.53 mg/L.

转小鼠金属硫蛋白-Ⅰ基因聚球藻7002净化重金属废水的研究

以转小鼠金属硫蛋白-Ⅰ基因（mMT-Ⅰ）聚球藻7002为对象,研究了其在含Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋的培养基中的生长特性及其对重金属的净化性能.结果表明,无论从生长速率还是对重金属的耐受特性来看,转mMT-Ⅰ聚球藻7002均明显优于野生藻;随着培养进程的延续和细胞浓度逐渐提高,体系中Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋的浓度逐渐降低,降幅最大的时间约在试验开始后1-3 d左右;经3 d培养,转mMT-Ⅰ聚球藻细胞对Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋的净化率分别为63.90%、65.99%和96.27%,吸附量分别为10.75、58.89和112.61 mg·g^-1,而野生聚球藻的吸附量分别为3.40、27.01和1.12 mg·g^-1,前者分别是后者的3.16、2.18和100.45倍;并建立了操作时间和细胞浓度对净化率的单因子模型,以及总括动力学模型方程,模型对实验结果拟合良好.

转基因聚球藻PCC7942及其野生藻的培养条件优化

通过考察培养温度、光照强度、培养基初始pH和碳、氮源浓度等单因子对转人源胸腺肽α1基因聚球藻PCC7942及其野生藻生长的影响,对其中NaHCO3浓度、KNO3浓度和初始pH进行三因素三水平的正交试验,获得以BG-11为基础的培养基成分的最佳组合及最适培养条件.实验结果表明,转化藻于28℃,光照强度1500Lx,往复式光照摇床转速75r/min,初始pH=9.0,NaH-CO330mg/L,KNO31.7g/L(其他同BG-11培养基)培养;野生藻于28℃,光照强度2000Lx,往复式光照摇床转速75r/min,初始pH=9.0,NaHCO340mg/L,KNO32.2g/L(其他同BG-11培养基)培养,藻细胞生物量均得到有效地提高,其比增殖速率分别达0.375d-1和0.382d-1,比优化前分别增加106%和99%,这为微藻的进一步高密度放大培养提供依据.

氮源和初始NaHCO_3浓度对转Tα1基因聚球藻7942生长与表达的影响

研究了氮源和初始NaHCO3浓度对转基因聚球藻 794 2生长与胸腺素α1表达的影响。结果表明 :最适的氮源为NaNO3,NaNO3浓度低于 1g/L时 ,增加NaNO3浓度能提高藻细胞的生长和表达 ,但 1～ 2 .5 g/LNaNO3对转基因聚球藻 794 2生长与表达没有明显的影响。最适的初始NaHCO3浓度为 8.0 g/L。生长在 8.0 g/L初始NaHCO3浓度培养基中藻细胞密度和胸腺素α1最大表达能力分别为BG 11培养基中的 1.94倍和 2 .0 1倍。

轮虫对2种不同微藻饵料的摄食量研究

[目的]通过探测轮虫对2种微藻(小球藻和转基因金属硫蛋白聚球藻)的摄食情况,研究轮虫对不同微藻的摄食量,确定轮虫在生长繁殖的过程中每天摄食单细胞藻的量,并比较了2种细胞大小相差悬殊的微藻对轮虫的投喂效果。[方法]分别置于不同培养条件(自然、黑暗)下,利用不同的微藻作壶状臂尾轮虫(Brachionus urceus)的饵料,每天计数轮虫密度,并用分光光度计测微藻的OD值。[结果]结果表明,轮虫每天摄食量与饵料的密度密切相关,密度越高摄食量越大,而且小球藻的饵料效果好于转金属硫蛋白聚球藻。[结论]为有效地促进轮虫养殖业的发展奠定了基础。

CO_2对转基因聚球藻7942生长、表达等的影响

研究了不同浓度CO2 对转基因聚球藻 794 2生长、胸腺素α1表达和光合作用的影响 ,结果表明 :不同浓度的CO2 对藻细胞指数生长期的比生长速率没有明显的影响 ,通入空气与 5 %CO2 空气对藻细胞线性生长速率和最终藻细胞浓度影响也不显著 ;高浓度CO2 会减少NO-3 的吸收 ,提高硝酸还原酶的活性 ,这表明NO-3 的吸收与还原是不偶联的。低浓度CO2 对藻细胞的生化组成和胸腺素α1表达没有影响。而高浓度的CO2 明显降低可溶性蛋白及光合色素叶绿素a、类胡萝卜素和藻蓝蛋白的含量 ,胸腺素α1含量也显著降低。不同CO2 浓度培养的藻细胞P I曲线表明 ,不同浓度的CO2 对藻细胞的光合作用效率没有明显的影响 ,但生长在高浓度CO2 中藻细胞的最大光合速率明显增加。

固定化转小鼠金属硫蛋白-Ⅰ基因聚球藻去除重金属的研究

利用海藻酸钠/CaCl2凝胶包埋法固定转小鼠金属硫蛋白-Ⅰ(mMT-Ⅰ)基因聚球藻7002及其野生宿主藻,就固定化藻的生长、对重金属的耐受性及其去除重金属的性能进行了初步研究。结果表明,固定化藻细胞比游离藻细胞生长较慢,培养周期较长,且最大细胞浓度偏低,但固定化可有效提高藻细胞对重金属的耐受性。固定化转mMT-Ⅰ聚球藻对Pb,Cd和Hg的耐受系数(以每单位的细胞吸光值OD750计)分别为6.077,0.610,1.093 mmol/L,而固定化野生聚球藻对于Pb,Cd和Hg的耐受系数分别为1.981,0.170,0.091 mmol/L;固定化转mMT-I聚球藻对重金属的去除效能明显优于游离藻:经3 d的处理,固定化转MT藻对Pb,Cd,Hg的去除率分别为88.09%,81.23%,91.45%,而固定化野生藻在相同的条件下则分别为77.3%,73.47%,85.44%。

葡萄糖浓度对转基因聚球藻表达hTNF-α和光合作用的影响

为了开发海洋药物,把人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)转入海洋单细胞蓝藻聚球藻7002。然而,转基因聚球藻的hTNF-α表达率很低,仅为可溶性蛋白的0.08%,这不利于进一步纯化。不同浓度的葡萄糖对转TNF-α聚球藻的生长、hTNF-α的表达和光合作用的影响。当葡萄糖浓度为125mmol/L,hTNF-α的表达率达到最高,是不含葡萄糖的6.57。此外,当葡萄糖浓度为75mmol/L时,藻细胞的净光合作用速率达到最大,是光自养藻细胞的1.69倍。在各种葡萄糖浓度下,藻细胞对葡萄糖的吸收都不明显。

转基因聚球藻7942的vp19基因表达效率及其光合生理特性研究

采用荧光定量PCR方法检测转基因聚球藻7942在不同生长阶段vp19基因的相对表达量,在此基础上,通过氧电极的方法测定转vp19基因聚球藻7942在不同温度、光强、pH和盐度下光合活性的变化,探究其最适生长条件。结果表明:转基因聚球藻7942的最佳采收时间是对数生长后期(约12 d),其vp19基因相对表达率达到9.2%,VP19蛋白的产率达到7.31 mg∕L。转vp19基因型聚球藻的最适生长条件为:温度38℃,光照强度2500 lx,pH 8.0,盐度0 mol∕L NaCl。研究结果可为转vp19基因型聚球藻口服疫苗规模制备提供依据。