胃腺癌中抗原处理相关转运蛋白1的表达和临床意义

目的探讨胃腺癌(stomach adenocarcinoma,STAD)中抗原处理相关转运蛋白1(transporter associated with antigen processing 1,TAP1)表达与临床病理特征的关系及其预后意义。方法通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库收集TAP1在STAD组织中的mRNA表达水平和患者临床资料。采用GraphPad Prism软件分析TAP1表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线分析其与患者总生存期的关系。采用蛋白质印迹法检测STAD细胞株MKN45和AGS以及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中TAP1的蛋白表达。收集2020年1月1日至12月31日武汉大学中南医院病理科的STAD组织标本122例和2020年10月1日至12月31日武汉大学中南医院病理科的正常胃切除标本24例,采用免疫组织化学法检测组织中的TAP1表达,分析其与患者临床病理特征的关系。结果TCGA数据库分析和组织标本的免疫组织化学分析均显示,TAP1在STAD组织中较正常胃组织高表达(均P<0.05)。TAP1在STAD细胞株MKN45中的表达较正常胃黏膜上皮细胞株GES-1高(P<0.01),而人STAD细胞株AGS与GES-1中TAP1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在STAD组织中,TAP1蛋白表达水平在STAD的Laurén分型方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。TCGA数据库分析发现,TAP1表达水平随肿瘤组织分级的增加而升高(P<0.05)。TCGA数据库中STAD患者按TAP1表达中位数6.82分为TAP1高表达组和低表达组。TAP1高表达组中位总生存期更长(57.1个月vs 25.1个月,P<0.05)。结论TAP1在STAD组织中高表达,且与Laurén分型和组织分级相关,为预后保护因素,可作为STAD预后的潜在标志物。

1型糖尿病TAP基因多态性的Meta分析

目的用Meta分析的方法综合评价国内外有关TAP基因各位点多态性与1型糖尿病关联性的研究。材料与方法检索中国生物医学文献数据库、MEDLINE和EMBASE数据库,收集所有相关的病例对照试验,应用RevMan4.2软件对符合条件的所有研究结果进行Meta分析,包括异质性检验、合并效应量以及评估发表偏倚。结果符合纳入标准的共12篇文献。TAP1-333V/V纯合子、TAP2-665A/T杂合子可能是1型糖尿病的保护性基因型,合并OR值及其95%置信区间分别为0.31(0.16,0.59)和0.46(0.30,0.72),P<0.05;TAP2D单倍体型可能是1型糖尿病的保护性单倍体型,其合并OR值和95%置信区间为0.67(0.47,0.93),P<0.05。TAP2F单倍体型可能是1型糖尿病的易感性单倍体型,其合并OR值和95%置信区间为2.51(1.62,3.90),P<0.05。结论1型糖尿病与TAP基因的多态性可能具有关联性。

TAP-1、TAP-2及HLA-I在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌组织中MHC-I类分子抗原加工提呈"操纵子"(即TAP-1、TAP-2及HLA-I)表达的变化及其与临床因素的关系。方法免疫组织化学法(IHC)检测鼻咽癌石蜡切片中TAP-1、TAP-2及HLA-I的表达,采用流式细胞仪(FCM)检测鼻咽癌患者及对照组外周血中CD4+T、CD8+T细胞比例,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测空腹外周静脉血IL-10含量,并对以上结果进行统计分析。结果 TAP-1、TAP-2及HLA-I在鼻咽癌组织中表达分别为43.1%、46.55%、50%,均低于鼻咽正常组织中的表达90%、95%、95%(P<0.05);鼻咽癌组CD4+T细胞比例明显低于对照组[(33.41±10.04)%vs.(40.15±3.56)%](P<0.05),CD8+T细胞比例与对照组比较差异无统计学意义[(25.32±8.29)%vs.(22.89±2.24)%,P>0.05],鼻咽癌IL-10表达明显高于对照组[(13.12±1.23)ng/mL vs.(3.69±1.03)ng/mL,P<0.05];TAP-1、TAP-2及HLA-I表达与年龄、性别无相关性(P>0.05),与TNM分期、有无淋巴结转移及有无远处转移密切相关(P<0.05);CD8+T细胞比例与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达成正比,IL-10表达与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达成反比,而CD4+T细胞比例与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达无明显相关性;Kaplan-Meier分析提示,临床分期、有无淋巴结转移、有无远处器官转移、病理分型、TAP-1表达、TAP-2表达、HLA-I表达与鼻咽癌患者预后相关,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示,有无远处器官转移及HLA-I表达为鼻咽癌患者独立预后因素(P=0.043,P=0.045)。结论鼻咽癌中TAP-1、TAP-2及HLA-I低表达,且与患者免疫功能低下相关;远处器官转移及HLA-I低表达预示鼻咽癌患者预后不良。

鸭抗原相关转运体TAP1和TAP2原核表达及多克隆抗体的制备

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表达鸭抗原相关转运体蛋白,并制备特异性多克隆抗体,试验采用PCR方法扩增HBKB系鸭的TAP1完整基因和TAP2基因的预测肽结合区(PBD),分别命名为TAP1和TAP2PBD,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒p ET-TAP1和p ET-TAP2PBD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDSPAGE及Western-blot鉴定,表达产物经SDS-PAGE后分别切胶免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明:两种目的蛋白均获得了正确表达。说明试验制备了高特异性鸭TAP1和TAP2多克隆抗体,可用于水禽TAP的结构和功能研究。

过表达TAP1上调人胶质瘤细胞株U251 HLA-Ⅰ的表达

目的:探讨抗原提呈相关转运蛋白1(TAP1)过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法:培养U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空载体对照组和TAP1基因转染细胞组细胞的蛋白和RNA,行real-time PCR和Western blotting分析过表达的TAP1对U251细胞HLA-Ⅰ表达的影响,并用流式细胞术分析U251细胞HLA-Ⅰ表面呈现的变化。结果:成功建立TAP1高表达U251细胞株,TAP1 mRNA和蛋白分别升高(8.73±1.07)倍和(11.71±0.83)倍。高表达的TAP1促进U251细胞HLA-A、HLA-B、HLA-C(重链)和β2微球蛋白(轻链)mRNA表达上调,分别升高(3.51±0.36)倍、(4.78±0.85)倍、(2.94±0.28)倍和(3.23±0.24)倍,HLA-Ⅰ蛋白表达升高(3.14±0.53)倍,同时U251细胞HLA-Ⅰ的表面呈现明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达TAP1能促进U251细胞HLA-Ⅰ表达及其在细胞表面呈现的提高。

伏马菌素B1对人外周血单个核细胞抗原加工相关转运子表达的影响

探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞(hPBMC)抗原加工相关转运子(TAP-1)表达的影响。采用流式细胞定量检测(FCM)、免疫印迹(Western印迹)及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(0,10和50μmol/L)处理后人外周血单个核细胞TAP-1在mRNA和蛋白质水平表达的影响。RT-PCR检测结果表明,10和50μmol/L FB1处理24h后,处理组细胞TAP-1mRNA明显低于对照组。在蛋白质水平,FCM定量分析表明,两个处理组细胞表面TAP1的平均荧光强度均较对照组降低,以50μmol/LFB1处理组降低显著(P<0.05)。免疫印迹结果亦表明,FB1处理组TAP-1的表达均较对照组降低。10和50μmol/LFB1可抑制体外培养的hPBMCTAP-1mRNA和蛋白质表达。

抗原处理相关运载体等位基因与1型糖尿病及自身抗体的相关性研究

目的 探讨抗原处理相关运载体 (TAP)等位基因与 1型糖尿病 (DM 1)及胰岛素自身抗体 (IAA)、胰岛细胞抗体 (ICA)和谷氨酸脱羧酶抗体 (GADA)的相关性。方法 用PCR -SSO技术 ,对 5 2例DM 1患者及 61例正常对照人群进行TAP1、TAP2等位基因变异位点氨基酸表型频率分析。用ELISA法测定DM 1患者血清中IAA、ICA、GADA。结果 DM 1患者的TAP13 3 3位Ile/Ile、63 7位Asp/Asp、TAP2 3 79位Val/Val纯合子表型频率显著低于对照 (P<0 .0 0 5 ) ,具有上述纯合子表型的患者中ICA阳性率显著低于阴性率 (P <0 .0 5 )。TAP13 3 3位Ile/Val、63 7位Asp/Gly、TAP2 3 79位于Ile/Val杂合子表型频率明显高于对照 (P <0 .0 0 5 ) ,具有上述杂合子表型的患者中ICA阳性率显著高于阴性率 (P <0 .0 5 )。等位基因为TAP2 3 79位点Ile/Val杂合子表型的患者中GADA阳性率显著高于阴性率 (P <0 .0 5 )。结论 TAP13 3 3位Ile/Ile、63 7位Asp/Asp、TAP2 3 79位Val/Val纯合子表型可能是DM 1的保护基因 ,并对ICA的产生起阻碍作用。TAP13 3 3位Ile/Val、63 7位Asp/Gly、TAP2 3 79位Ile/Val杂合子表型可能是DM 1的易感基因 ,并对ICA。

HPV16E6、TAP2与新疆哈萨克族食管癌交互作用的1∶2病例对照

目的:探讨HPV16E6感染、Tap2379、Tap2665、Tap2687基因多态性对新疆哈萨克族(简称哈族)食管癌产生的影响及相互关系.方法:采用1∶2配比的病例对照研究,收集哈族食管癌90例,对照180例,运用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)检测HPV16E6的感染率,运用序列特异性引物聚合酶链反应-限制片段长度多态技术(PCR-RFLP)检测Tap2379、Tap2665、Tap2687基因多态性,统计分析采用χ2检验,交互作用采用分层分析.结果:食管癌组与对照组间比较:HPV16E6、Tap2379、Tap2665基因型差异均有统计学意义(χ2=11.617,P=0.001;χ2=11.604,P=0.001;χ2=4.451,P=0.035),Tap2687基因型差异无统计学意义(χ2=0.586,P=0.444).HPV16E6感染与Tap2379、Tap2665基因多态性间不存在交互作用;Tap2379与Tap2665基因多态性存在交互作用.结论:HPV16E6感染,Tap2379、Tap2665多态性是哈族食管癌的危险因素,Tap2379位多态性与Tap2665位多态性对哈族食管癌的发生存在效应修饰作用.

天津地区汉族人群TAP1基因的多态性研究

目的:探讨抗原处理相关转运体1(TAP1)基因在天津地区汉族人中的分布。方法:用扩增阻碍突变体系(ARMS)检测,分析TAP1基因多态性在107例天津籍无亲缘关系的汉族健康人中的分布。结果:(1)研究人群的TAP1等位基因分布、基因型分布均符合Hardy-Weinberg定律。(2)天津汉族正常人群中TAP1333位点以I等位基因型(55.66%)、V/I基因型(54.72%)占优势;TAP1637位点以A等位基因型(65.89%)、A/A基因型(51.40%)占优势。单倍体型中则以TAP1A、TAP1C占优势,分别为41.46%和30.49%。结论:TAP1等位基因型、单倍体型在各地区、人种间分布不同。

TAP1、TAP2和HLA-1在恶性黑素瘤组织中的表达

目的:检测抗原处理相关转运蛋白(transporters associated with antigen processing,TAP)和HLA-Ⅰ类分子在恶性黑素瘤组织中的表达。方法:应用免疫组织化学方法检测77例恶性黑素瘤组织TAP1、TAP2和HLA-Ⅰ类分子的表达,并进行半定量分析,以20例色素痣组织作为对照研究。结果:在77例恶性黑素瘤组织中,TAP1、TAP2和HLA-Ⅰ类分子的阳性表达率分别为23.38%、11.69%和63.64%,HLA-Ⅰ类分子的表达与TAP1和TAP2成正相关;而TAP1、TAP2和HLA-Ⅰ类分子几乎在所有的色素痣组织中都为阳性表达。结论:在恶性黑素瘤组织中TAP1、TAP2和HLA-Ⅰ类分子的表达水平下降,可能与人恶性黑素瘤细胞的免疫逃逸表型有关。TAP1和TAP2的表达下降可能是导致HLA-Ⅰ类分子表达下降的重要原因。

抗原处理相关蛋白基因多态性及与变应性鼻炎的相关性

目的:为变应性鼻炎患者行抗原处理相关蛋白基因(TAP)分型,探讨这些基因与变应性鼻炎遗传易感性的相关性。方法:用PCR扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS)为69例无亲缘关系的变应性鼻炎患者和92例无血缘关系的健康汉族人行TAP分型。结果:TAPl-333、637位等位基因基因型在广东汉族变应性鼻炎组及正常对照组中均以I和D为主,TAP2-379、565、665等位基因基因型分别为V-A-T。TAP1和TAP2各等位基因基因型频率在变应性鼻炎组和正常人组间差异无显著性(P>0.05)。结论:变应性鼻炎与TAP基因可能无相关性。

TAP基因多态性与维吾尔族人群类风湿关节炎的相关性

目的研究抗原处理相关转运体(TAP)在新疆维吾尔族人群基因多态性及其与类风湿关节炎(RA)的相关性。方法采用ASPCR方法对64例RA患者和72例正常人的TAP基因进行分析。结果健康维吾尔族人群TAP1 333位和637位等位基因基因型分别以I和D为主,表现型主要为II和DD,TAP2 379、565、665、687等位基因基因型分别以I-A-T-S为主,表现型以II-AA-AT-SS为主;RA患者TAP2 379-V,687-Q,687-QQ频率显著降低,687-S,379-II,687-SS频率显著升高。结论维吾尔族健康人群及RA患者TAP基因多态性有不同于其他民族人群的基本特点。TAP2 379-II、687-SS型患RA的相对危险性增加,并可能是维吾尔患者RA的易感基因。

广东汉族人群LMP和TAP基因多态性及与变应性鼻炎的相关性

目的对广东地区汉族变应性鼻炎患者作抗原处理相关肽(TAP)和低分子量多肽(LMP)分型,探讨这些基因与广东人群中变应性鼻炎遗传易感性的可能关系。方法采用PCR扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS)法和PCR-RFLP法对62名无亲缘关系的变应性鼻炎病人和95名无血缘关系的广东籍健康汉族人作TAP、LMP分型。结果TAPl-333、637位等位基因基因型在广东汉族变应性鼻炎组及正常对照组中均以I和D为主,TAP2-379、565、665等位基因基因型分别为V-A-T。TAP1和TAP2各等位基因基因型频率在变应性鼻炎组和正常人组间差异无显著性(P>0.05)。变应性鼻炎患者LMP7A/A频率占8.70%,低于正常对照组的21.35%,有显著差异(P<0.05),其余各型与正常对照组无明显差异(P>0.05)。变应性鼻炎病人中LMP7等位基因A的频率占36.23%,B的频率占63.77%,与正常对照组的A为47.09%、B为52.91%有显著差异(P<0.05)。结论提示LMP7等位基因A与AR的发病呈负关联,B与AR的发病呈正关联。变应性鼻炎与TAP基因可能无相关性.

导入TAP基因上调其在肺腺癌细胞系的表达

目的 克隆TAP1及TAP2基因 ,分别转染TAP1及TAP2表达下调的人肺腺癌细胞系Anip973,以提高其表达水平 ,从而增强肿瘤细胞的抗原提呈能力。方法 采用RT PCR方法自EBV刺激的B LCLs克隆TAP1及TAP2基因 ,与pcDNA3.1 V5 His TOPOTAExpressionvector连接 ,构建真核细胞表达载体 ,脂质体法 (LipofectamineTM2 0 0 0 )转染人肺腺癌细胞系Anip973,经G4 1 8筛选 4～ 6周 ,通过RT PCR检测TAP1及TAP2的表达。结果 经测序确认已成功克隆人TAP1及TAP2基因 ,建立稳定表达TAP1或TAP2的细胞系 ,经RT PCR分析 ,Anip973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加。结论 基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达 。

基于VHSE结构表征的TAP亲和活性预测及选择特异性分析

应用氨基酸描述子VHSE(Principal component score vector of hydrophobic,steric,and electronic proper-ties)对613个抗原9肽进行结构表征,在此基础上,采用支持向量机结合逐步回归变量筛选方法,成功建立了抗原肽抗原处理相关转运蛋白(Transporter associated with antigen processing,TAP)亲和活性预测模型,最优线性支持向量机模型的R2,Q2和R2ext分别为0.7386,0.7270和0.6057.模型结果分析表明,影响TAP亲和活性的首要因素是电性,其次是立体和疏水性质;底物9肽的P1(N端)及P2,P7和P9(C端)位氨基酸物化性质对TAP亲和活性有重要影响,而P3,P4,P5和P6位对模型贡献相对较小,P8位则与活性无关.依据最优模型对模拟点突变9肽的TAP亲和活性的预测结果,并结合变量载荷分析,对TAP底物选择特异性进行了分析和总结.

TAP基因转染提高其在肿瘤细胞系的表达

目的 筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系 ,将TAP1、TAP2基因分别转染其表达下调的肿瘤细胞系 ,检测基因转染后的mRNA表达水平。方法 用RT -PCR方法检测肺腺癌细胞系Anip 973,AGZY83a ,LH - 7,BE - 1,胃癌细胞系BGC - 82 3TAP1及TAP2mRNA水平 ,筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系。用脂质体法 (LipofectaminTM2 0 0 0 )将TAP1、TAP2分别转染人肺腺癌细胞系Anip 973,经G4 18筛选 4～ 6周 ,通过RT -PCR检测TAP1及TAP2的表达。结果 Anip 973,AGZY 83a细胞TAP1、TAP2mRNA表达下调 ,LH - 7,BE - 1TAP1PCR产物均为 2条带 ,BE - 1TAP 2mRNA表达下调 ,而LH - 7与B细胞相同。转染后的Anip 973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加。结论 基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达 。

抗原处理相关转运蛋白基因多态性与原发性肝细胞癌的相关性研究

目的探讨抗原处理相关转运蛋白（TAP）基因多态性与原发性肝细胞癌发生的相关性。方法采用PCR-扩增抗拒突变系统（PCR-ARMS）技术分析76例原发性肝细胞癌患者及150例健康个体的TAP1、TAP2等位基因多态性。结果肝癌组和健康对照组中共检测出4种TAP1及7种TAP2等位基因。TAP2B在肝癌组的分布频率显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05,OR=1.80,95%CI=1.06-3.04）。结论TAP2B可能导致患原发性肝细胞癌的相对危险性增加。

抗原处理相关运载体等位基因与I型糖尿病的关联研究

目的 :探讨抗原处理相关运载体 (transporterassociatedwithantigenprocessing ,TAP)等位基因与I型糖尿病 (DM1)的关联性。方法 :用聚合酶链反应 序列特异性寡核苷酸探针杂交技术 ,对 5 2例DM1患者及 6 1例正常对照人群进行TAP1、TAP2等位基因变异位点氨基酸表型频率分析。结果 :DM1患者TAP1333位Ile Ile、6 37位Asp Asp、TAP2 379位Val Val纯合子表型频率显著低于对照 (P <0 0 0 5 ) ,DM1患者TAP1333位Ile Val、6 37位Asp Gly、TAP2 379位Ile Val杂合子表型频率明显高于对照 (P <0 0 0 5 )。TAP基因的其它变异位点氨基酸表型频率在DM1患者与正常对照组之间的差异无显著性意义。结论 :TAP1333位Ile Ile、6 37位Asp Asp、TAP2 379位Val Val纯合子表型可能是DM1的保护基因。TAP1333位Ile Val、6 37位Asp Gly、TAP2 379位Ile

抗原处理相关转运蛋白的研究进展

抗原处理相关转运蛋白(TAP)是一类转运蛋白,在MHCⅠ类分子抗原呈递过程中有重要作用,负责抗原肽从胞质到内质网腔的转运。由于TAP基因具有多态性,改变机体的免疫应答,从而增加了个体对疾病的易感性;体内外多种因素可调节TAP的表达及活性,TAP基因突变、调节机制的缺陷均可导致其表达下调,有利于病毒感染细胞,肿瘤细胞逃避免疫监视,从而影响疾病的发生发展。

抗原处理相关转运体基因多态性与疾病相关性的研究进展

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机体产生细胞免疫应答。某些特定的人类疾病同TAP的多态性相关,包括多种肿瘤疾病、自身免疫疾病和传染性疾病等。本文就实验动物的TAP基因在与疾病相关性方面的比较医学研究进展做一综述。