旋毛虫南阳猪体分离株的生物学特性研究

观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm,(2.627±0.246)mm×(0.056±0.018)mm和(1.112±0.185)mm×(0.038±0.013)mm;其在昆明小白鼠和三元杂交猪体中的繁殖力指数分别为(112.0±59.65)和142.5;平均每条雌虫体外产新生幼虫(56.76±5.13)条;在猪肉中的感染性肌幼虫置-32℃36 h或-22℃60 h即全部死亡。结果表明,该旋毛虫南阳猪体分离株的上述生物学特性与猪旋毛虫(T.spiralis)的特性相似。

IFN-γ、L-Arg及L-NNA对感染旋毛虫的沙鼠血液及腓肠肌NO合成和组织病理变化的影响

目的探讨IFN-γ、L-Arg和L-NNA对感染旋毛虫的沙鼠血液及腓肠肌NO合成和组织病理变化的影响。方法经腹腔给予感染旋毛虫后不同时期的沙鼠不同剂量的IFN-γ、L-Arg和L-NNA,检测沙鼠血清及腓肠肌NO的含量。观察腓肠肌的病理变化。结果IFN-γ和L-Arg组沙鼠血清及腓肠肌NO含量随药物浓度的增加而升高;L-NNA阴性对照组血清NO含量和感染25 d的L-NNA组腓肠肌NO含量升高,L-NNA实验组血清NO含量及阴性对照组、旋毛虫感染7 d组4、0 d组腓肠肌NO含量降低。实验组腓肠肌内囊包数较阳性对照组略有减少。结论IFN-γ和L-Arg能促进感染旋毛虫的沙鼠血液及腓肠肌NO合成,L-NNA则具有增强或抑制NO合成的双重作用。

旋毛虫T626-55基因减毒沙门氏菌疫苗的构建及其在小鼠体内表达

采用PCR方法扩增旋毛虫强反应原性基因T626-55,与真核表达载体pcDNA3.1相连,构建携带编码旋毛虫T626-55基因真核表达质粒的沙门氏菌,将构建好的重组质粒T626-55-pcDNA3.1通过电穿孔转化入沙门菌中。小鼠口服免疫该重组沙门菌,5 d后通过反转录PCR(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)检测目的基因在小鼠组织内的转录和表达情况。结果表明:成功构建含有目的基因真核表达质粒的沙门菌T626-55-pcD-NA3.1-PQ,通过口服免疫该菌,在小鼠脾脏及派伊尔氏结(PP)内检测到目的基因的转录,在脾脏内检测到目的基因表达。

旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达的变化

目的构建旋毛虫感染诱导的小鼠乳腺癌MCF-7细胞基因表达变化的cDNA消减文库,探讨旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞基因表达的变化。方法复制MCF-7细胞小鼠模型,设对照组和旋毛虫感染组(实验组),采用抑制性消减杂交技术构建旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,并利用反向Northernblot技术对所获得基因的特异性表达进行验证。结果成功构建了旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞上调基因表达消减文库,克隆的目的基因片段大小分布在200～500bp之间,20个阳性克隆的测序结果经BLAST比对,获得差异表达的已知功能基因8个和未知功能基因4个,这些基因在小鼠乳腺癌细胞中均有表达,而在肌肉组织中无表达。结论旋毛虫感染诱导的MCF-7细胞差异表达基因上调,其中RB基因可能与乳腺癌细胞的生长抑制密切相关,为在基因水平研究旋毛虫抗肿瘤机理奠定了基础。

环介导等温扩增技术检测旋毛虫的研究

目的用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术检测旋毛虫DNA。方法用酚．氯仿法提取旋毛虫基因组DNA，设计两对扩增旋毛虫18SrRNA基因的LAMP引物．以日本血吸虫DNA作对照．进行LAMP反应。将旋毛虫基因组DNA经梯度稀释，进行LAMP反应，验证该方法的敏感性。产物经SYBRGreenI显色后观察结果，绿色判为阳性，棕色判为阴性。结果LAMP反应结果显示．旋毛虫基因检测管经显色后呈绿色，对照组均呈棕色。LAMP技术可检测到的旋毛虫最低浓度为415fg/μl。结论建立了检测旋毛虫DNA的LAMP技术。