宁夏肉牛皮肤病原真菌的分离与鉴定

【目的】从患真菌性皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮等病料样本中分离皮肤病原真菌并对其进行种属分类鉴定,为牛真菌性皮肤病的诊断及防治提供参考依据。【方法】无菌采集宁夏地区患皮肤病肉牛的毛发、皮屑、痂皮,将病料样本置于载玻片上,滴加10%KOH溶液1滴,静置5 min后进行镜检观察;将病料样本接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)中进行真菌的分离、纯化培养,对分离的真菌用乳酸酚棉兰染液进行染色观察,根据真菌形态学特征对其进行初步分类;用分离的真菌制备浓度为1×108 cfu·m L-1的孢子悬液涂抹健康ICR小鼠皮肤,根据其致病性筛选病原真菌;提取病原真菌DNA,对其内部转录间隔区(ITS)进行PCR扩增并测序,登录NCBI Gen Bank数据库,对病原真菌ITS序列进行同源性比较并构建系统发育树,根据其同源性比较及系统发育分析结果,结合真菌形态学特征对病原真菌作出种属分类鉴定。【结果】病料中含真菌菌丝及链状厚垣孢子,毛发中存在大量小分生孢子;从病料样本中共分离、纯化到23株真菌,分属于毛癣菌属(Trichophyton)、曲霉属(Aspergillus)、横梗霉属(Lichtheimia)、链格孢属(Alternaria)、镰刀菌属(Fusarium)、附球菌属(Epicoccum)、毛霉菌属(Mucor);小鼠皮肤感染试验表明,分离的毛癣菌属真菌NXGY1、NXGY2具有较强的致病性,试验组小鼠均出现瘙痒、皮屑增多、形成结痂、脱毛等临床症状;毛癣菌属NXGY1、NXGY2的ITS序列长度大小分别为660、662 bp,其同源性比较及系统发育分析结果表明,NXGY1、NXGY2与疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)同源性高达99%,在系统发育树上属于同一分支,遗传距离最近。【结论】根据真菌形态特征及系统发育分析结果,鉴定分离的肉牛皮肤病原真菌NXGY1、NXGY2为疣状毛癣菌(T.verrucosum)。

进口奶牛皮肤真菌病病原疣状毛癣菌的分离鉴定

为了解进口奶牛皮肤真菌病的病原情况,选择2013-2014年河北进口的具有不同程度皮肤真菌病症状的奶牛,刮取病灶处皮屑样品34份,进行病原分离,并通过形态学和DNA条形码方法进行鉴定。结果表明,共分离得到17株真菌,其中10株被鉴定为人畜共患性真菌——疣状毛癣菌。这为进一步了解中国进口种牛皮肤真菌病病原,开展有效治疗,探索疫苗免疫方案以及预防从业者感染奠定了基础。

奶牛疣状毛癣菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解奶牛皮肤真菌病的病原及其对常见抗真菌药物的敏感性,给临床治疗提供依据,从具有皮肤真菌病症状奶牛病灶处的皮屑样品中,使用沙氏培养基分离病原真菌,通过核糖体r DNA ITS序列对其分析鉴定。使用ATB FUNGUS 3真菌药敏试纸条测定5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑对所分离病原真菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,在沙氏培养基上分离到的10株中心蜡状成堆、边缘"杉树状"的真菌,经ITS序列分析,鉴定为人兽共患性致病真菌——疣状毛癣菌;所分离的疣状毛癣菌对伏立康唑、伊曲康唑均为敏感,对氟康唑均为中介,而对两性霉素B及5氟胞嘧啶均为耐药;ITS序列分析可实现对真菌的快速、准确鉴定;伏立康唑、伊曲康唑对本研究中分离的疣状毛癣菌具有良好的体外抗菌活性。

疣状毛癣菌致母女共患体癣分析

母亲上肢出现皮损1年,女儿面部皮损4个月,皮损表现为大小不一的环形红斑,表面覆有鳞屑及少许痂皮,境界清楚,边缘稍隆起。患者家中养牛。两例皮损真菌镜检均可见菌丝,真菌培养均阳性,分离菌株经表型及分子鉴定,两株菌均为疣状毛癣菌,体外药敏试验显示对伊曲康唑及特比萘芬均敏感。2例患者经口服和外用抗真菌药物联合治疗获痊愈。

山羊疣状毛癣菌鉴定与敏感天然药物的体外筛选试验

为鉴定一次黑山羊养殖场暴发的皮肤癣菌病原,采集患病羊病变皮屑进行病源分离,对分离的真菌进行形态学鉴定和ITS序列分析,并采用CLSI M38-A2微量稀释法筛选敏感天然药物。结果表明:分离的真菌菌落形态、孢子和菌丝结构与疣状毛癣菌相符,其ITS序列(登录号:KX619436)与Pchelin公布的T.verrucosum(登录号:KU378220)同源性最高,达99.99%;18味天然药提取物对分离真菌最低抑菌浓度和最低杀菌浓度试验表明,知母的抗菌效果最好(40 mg/m L,160 mg/m L)。这表明,引起该养殖场黑山羊皮肤癣菌病的病原为疣状毛癣菌,知母为该分离菌的最佳敏感天然药。