TLR4,TLR9 mRNA在P0 180-199诱导Lewis大鼠EAN模型中的动态表达及TWP对其的影响

目的:观察TLR4,TLR9 mRNA在P0180-199诱导Lewis大鼠EAN模型中动态表达,以及雷公藤多甙对其的影响。方法:以周围神经髓鞘蛋白P0180-199免疫Lewis大鼠,给予雷公藤多甙灌胃TWP40mg/(kg.d)干预治疗。观察免疫后大鼠症状和组织病理学改变及TWP对其的影响,利用RT-PCR检测TLR4,TLR9的mRNA表达水平。结果:EAN组出现EAN行为学改变、炎性细胞浸润和髓鞘脱失,TLR4、TLR9的表达高于CFA组(P<0.05)。EAN+TWP组大鼠症状较EAN+NS组稍改善,炎性浸润减少,EAN+TWP组TLR4和TLR9的表达低于EAN+NS组(P<0.05)。CFA组大鼠无症状,TLR4和TLR9的表达高于NS组(P<0.05)。结论:TLR4和TLR9可能参与EAN发病;雷公藤多甙可能通过抑制TLR4和TLR9的功能来减轻EAN的发病。

雷公藤多苷片生殖系统毒性及增效减毒研究进展

(1)检索雷公藤多苷片致生殖系统毒性的相关文献,探讨雷公藤多苷片使用累积剂量和时间与生殖系统损伤之间的相关性,为临床安全应用雷公藤多苷片提供指导。(2)检索雷公藤多苷片的增效减毒的相关文献,分析雷公藤多苷片与其他药物相互作用机理,最终为临床高效应用雷公藤多苷片提供循证依据。

益肾调经方对阿霉素肾病伴雷公藤多苷致性腺抑制的雌性大鼠肾保护作用的实验研究

目的:在阿霉素尾静脉注射造成微小病变肾病动物模型的基础上,建立雷公藤多苷致雌性肾病大鼠性腺抑制的模型,并观察益肾调经方(YSTJF)对其的影响,探讨YSTJF对阿霉素肾病伴性腺抑制的雌性大鼠肾保护作用。方法:雌性SD大鼠50只,随机挑选6只作正常对照组。余用阿霉素5mg/kg一次性尾静脉注射造成微小病变肾病动物模型,并随机分为6组:(1)肾病模型组:再予蒸馏水灌胃。(2)性腺抑制组:再予雷公藤多苷80mg·kg-1·d-1。(3)YSTJF高、中、低剂量组:予雷公藤多苷80mg·kg-1·d-1、YSTJF水煎浓缩液(分别为含生药75、50、25g·kg-1·d-1)合用每日灌胃。(4)西药对照组:予雷公藤多苷片80mg·kg-1·d-1和结合雌激素倍美力0.02mg·kg-1.d-1合用每日灌胃。该实验共8周,实验结束后收集标本,24h尿蛋白、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),血肌酐(Scr),尿素氮(BUN);光镜下观察肾脏组织的病理。结果:肾病模型组的尿蛋白、尿NAG酶明显高于正常对照组;性腺抑制组、YSTJF各剂量组和西药对照组能降低尿蛋白、尿NAG酶;YSTJF中低剂量组降低尿蛋白与性腺抑制组比较(P<0.05);YSTJF高剂量组降低尿NAG酶优于低剂量组和性腺抑制组。肾病模型组BUN高于正常对照组(P<0.05);性腺抑制组、YSTJF各剂量组和西药对照组均低于肾病模型组(P<0.05);YSTJF各剂量组、西药对照组比性腺抑制组降低更明显(P<0.05),YSTJF各剂量组比西药对照组为佳(P<0.05)。从肾脏病理改变的小管间质病变积分分析:YSTJF各剂量组积分低于肾病模型组、性腺抑制组(P<0.05),高、中剂量组较西药对照组为佳。结论:YSTJF可以通过降低尿蛋白、NAG酶、BUN,降低肾小管间质积分,改善肾小管间质病理改变,对于阿霉素肾病伴性腺抑制的雌性大鼠有一定的肾保护作用。

口服左旋甲状腺素联合雷公藤多甙治疗临床伴甲状腺功能减退症的桥本甲状腺炎

目的:观察口服左旋甲状腺素(LT4)联合雷公藤多甙(TWP)治疗临床伴甲状腺功能减退症(OH)的桥本甲状腺炎(HT)的疗效。方法:68例伴OH的HT患者随机分为两组,每组34例。左旋甲状腺素组(LT4组):口服LT4维持血清游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)及超敏促甲状腺素(STSH)在正常范围;雷公藤多甙组(TWP组):除同LT4组处理外,治疗同时加用TWP 10 mg,3次/d。两组于治疗前、后分别检查血清FT3、FT4、STSH、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb),测量甲状腺体积。结果:TWP组在缩小甲状腺肿,降低甲状腺自身抗体滴度方面均优于LT4组(P<0.01)。维持垂体甲状腺轴功能正常状态所需LT4剂量,TWP组明显低于LT4组(P<0.01)。两组均未出现严重药物不良反应。结论:口服LT4联合TWP治疗伴OH的HT患者,疗效肯定且安全可靠。

雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎核因子-κB和IL-2的影响

目的探讨雷公藤多甙(TWP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)Lewis大鼠核因子-κB(NF-κB P65)和IL-2的影响。方法雄性Lewis大鼠随机分为正常对照组(n=10)、TWP治疗组(n=10)及模型组(n=10)。用髓鞘蛋白(MBP)免疫雄性Lewis大鼠制作EAE模型。观察TWP对大鼠发病率、神经功能评分、发病时间和组织病理改变的影响,采用免疫组织化学法检测发病急性期脑组织NF-κB表达的情况,ELISA法检测血浆中IL-2的水平。结果与EAE模型组相比,TWP治疗组神经功能评分降低(3.36±0.64 vs 2.10±0.43,P<0.05),但发病率无明显差异,平均发病时间推迟[(10.13±0.76)d vs(12.22±0.81)d,P<0.05],脑和脊髓的病灶数目也减少(26.21±0.72 vs 12.41±0.56,P<0.05),血清中IL-2的含量减少[(62.56±8.53)pg/ml vs(41.46±6.56)pg/ml,P<0.05],脑组织NF-κB P65阳性细胞数减少(72.46±2.41 vs 32.56±1.56,P<0.05)。结论 TWP能有效干预Lewis大鼠EAE的发病,改善病理变化,其机制可能与下调NF-κB及IL-2表达有关。

雷公藤多甙对非肥胖糖尿病小鼠胰腺和脾脏Fas及其配体表达的影响

目的观察雷公藤多甙(TWP)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨可能的机制。方法用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,TWP组(30只)小鼠于实验第0～3天和第13～16天每日2次、第4～12天和第17～26天每日1次腹腔注射TWP,每次5mg/kg;对照组(33只)腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。监测血糖,记录糖尿病发病率,采用末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测胰岛细胞凋亡,免疫组织化学法检测B细胞胰岛素含量,半定量逆转录聚合酶链反应检测胰腺和脾脏Fas及其配体(FasL)mRNA的表达。结果TWP组实验结束时的糖尿病发病率为43.3%,显著低于对照组的69.7%(P<0.05)。TWP组的凋亡指数为(5.06±0.85)%,显著低于对照组的(9.04±1.02)%(P<0.01)。TWP组胰岛素表达阳性细胞所占百分比为(57.25±11.69)%,略高于对照组的(46.50±11.25)%(P>0.05)。TWP组的胰腺组织FasmRNA半定量值为0.30±0.11,略低于对照组的0.35±0.05(P>0.05);TWP组的胰腺组织FasLmRNA半定量值为0.80±0.11,显著低于对照组的1.33±0.17(P<0.05)。TWP组的脾脏组织Fas和FasLmRNA半定量值分别为0.40±0.09和1.29±0.17,均显著高于对照组的0.27±0.06和1.06±0.10(P值均<0.05)。结论TWP可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与增加脾脏T淋巴细胞Fas和FasL表达及凋亡,降低胰腺Fas和FasL表达,减少胰岛B细胞凋亡有关。

雷公藤不同样品对正常小鼠急性毒性实验研究

目的进行雷公藤不同样品对正常动物的急性毒性，为雷公藤的实验研究及临床安全使用提供实验依据。方法采用经典的急性毒性实验方法（LD。实验、MTD实验、MLD实验），给小鼠灌胃雷公藤不同样品（全组分、水提组分、雷公藤多甙片），观察其急性毒性症状谱，记录累积死亡数及小鼠体重变化。结果雷公藤全组分的MLD为8．0g·kg-1，相当于人日用量的22．4倍；水提组分的MLD为289．84g·kg^-1，相当于人日用量的811．6倍；雷公藤多甙片的LD。及95％可信限为166．34（157．60～175．51）mg·kg^-1，相当于人日用量的110．9倍，主要毒性症状、体征为怠动、俯卧、呼吸抑制，毒性发生时间较晚、持续时间长。结论雷公藤不同样品急性毒性大小顺序为雷公藤多甙片〉全组分〉水提组分，其体内毒性过程、毒性作用特点、毒性机制等尚待进一步研究。

雷公藤多甙对家兔急性实验性血清病免疫功能的影响

为了探讨雷公藤多甙（ＴＷＰ）对家兔急性实验性血治病（ＡＥＳＳ）的免疫调节作用，我们以家兔ＡＥｓＳ为实验模型，观察ＢＳＡ免疫实验动物后的不同时期ＴＷＰ对家兔外周血Ｔ和Ｂ淋巴细胞增殖的影响、白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性的影响及肾脏组织的病理学变化。结果表明：ＴＷＰ明显抑制ＣｏｎＡ诱导Ｔ淋巴细胞的增殖，但对ＬＰＳ诱导的Ｂ淋巴细胞增殖无影响。抑制ＣｏｎＡ诱导Ｔ淋巴细胞产生ＩＬ－２；抑制循环免疫复合物（ＣＩＣ）的形成；减少肾小球内炎性细胞浸润和肾小球内免疫复合物（ＩＣ）沉积。提示：ＴＷＰ可能通过抑制Ｔ淋巴细胞的功能，发挥对家兔ＡＥＳｓ的免疫调节作用，从而减轻ＡＥＳＳ发病进程中肾脏病理损伤的程度。

雷公藤多甙致大鼠生殖功能低下模型初探

目的:通过测定大鼠动情周期、卵巢和子宫指数、性激素水平及透射电镜下观察卵巢超微结构的改变,探索生殖功能低下大鼠模型的制备方法,进而为临床治疗此类疾病提供可靠的实验依据。方法:采用12周龄SD雌性大鼠20只,随机分为正常组和模型组,模型组借鉴前期研究中小鼠的造模剂量和时间,采用雷公藤多甙40mg/(kg·d)灌胃,连续10周,正常组不给药。分别观察2组大鼠动情周期、性激素、子宫和卵巢指数,并观察卵巢超微结构的改变。结果:与正常组相比,模型组大鼠动情周期紊乱,表现为动情周期缺失、不完整或延长,血清E2/P水平明显下降,子宫及卵巢质量下降且卵巢组织结构受损。结论:胃饲雷公藤多甙40mg/(kg·d)10周能损伤大鼠生殖功能,造成雌性大鼠生殖功能低下。

雷公藤多甙预防nonobese diabetic(NOD)小鼠1型糖尿病的机理研究

目的观察雷公藤多甙(TWP)对nonobese diabetic(NOD)小鼠1型糖尿病的免疫预防作用及机理。方法采用NOD小鼠环磷酰胺加速发病,给TWP后观察血糖、糖尿病发病率、胰岛炎变化,半定量RT-PCR分析胰腺组织干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)mRNA的表达。结果TWP组实验结束时血糖均值(10．73 mmol/L)低于对照组(20．53 mmol/L)(P＜0．01)；糖尿病发病率(43．33%)也低于对照组(71．43%)(P＜0．01)；胰岛炎评分1．45±1．11,低于对照组(2．27±1．22,P＜0．05)；TWP组胰岛素阳性细胞数为242．80±168．93,对照组胰岛素阳性细胞数为95．60±39．55,两者差异显著(P＜0．05)。胰腺组织IFN-γ、TNF-αmRNA的表达降低(P＜0．01),IL-10mRNA的表达无明显改变。结论TWP可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与下调胰腺组织Th1细胞因子表达有关。

雷公藤多苷对IgAN大鼠血清IgA水平及γδT细胞表达的影响

目的研究雷公藤多苷对IgA肾病大鼠外周血γδT细胞表达影响。方法尾静脉注射葡萄球菌肠毒素诱导IgA肾病大鼠模型,并予雷公藤多苷干预治疗,同时给予强的松对照,运用流式细胞仪检测IgAN大鼠用药前后外周血γδT细胞比率;放射免疫法检测血清IgA水平。结果雷公藤多苷能抑制血清IgAN外周血γδT细胞表达从而抑制血清IgA的升高。结论通过抑制血清IgAN外周血γδT细胞表达,从而降低血清IgA水平,是雷公藤多苷治疗IgAN的作用机制之一。

舌癌酸性环境下雷公藤多甙对单核/巨噬细胞杀伤活性的影响

目的通过模拟舌癌局部的酸性环境,加入雷公藤多甙(TWP),检测其对单核/巨噬细胞杀伤肿瘤细胞功能的影响。方法在p H值6.6,6.8酸性环境中,人单核/巨噬细胞THP-1与人舌鳞癌细胞Tca8113共同培养,经不同浓度的TWP干预,MTT法检测Tca8113细胞数量变化,观察此舌癌酸性环境下TWP对单核/巨噬细胞杀伤舌癌细胞作用的影响。结果酸性环境下,经不同浓度TWP干预,THP-1细胞与Tca8113细胞共同培养4小时,THP-1细胞杀伤活性随TWP浓度增加而增大,与浓度成正相关(P<0.05);p H值为6.6,TWP浓度为5×10-1μg/m L时,THP-1细胞杀伤活性随时间延长而增加,与时间成正相关(P<0.05)。结论体外模拟的舌癌酸性环境中,经一定浓度的雷公藤多甙干预,可使单核/巨噬细胞杀伤活性较未干预组增强,与药物浓度及时间成正相关。

雷公藤多苷抗巨噬细胞炎症及对TLR4/NF-κB调控炎症作用的研究

为研究雷公藤多苷(Tripterygium wilfordii polycoride,TWP)对LPS诱导巨噬细胞炎症反应时,对炎症因子TNF-α,IL-1β的抑制作用,对TLR4/NF-κB调控炎症作用的干预研究,同时观察其对TLR4/NF-κB调控炎症作用的影响。采用噻唑蓝(MTT)法检测受试药物TWP、地塞米松(DXM)及硫唑嘌呤(AZA)对细胞生长的影响,选择合适的药物浓度。通过LPS诱导小鼠RAW264.7细胞株产生炎症反应,ELISA法检测TNF-α及IL-1β的释放,Westen blotting法检测TLR4及NF-κB p65蛋白表达水平,荧光定量PCR(RT-PCR)测定TLR4及NF-κB的表达。实验结果显示TWP剂量依赖性抑制巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α,IL-1β的释放,TWP各剂量组作用均逊于DXM,但TWP高剂量组与AZA组作用比较,对TNF-α作用其优于AZA组;对IL-1β作用其相当于AZA组。对TLR4/NF-κB调控炎症作用的影响,TWP剂量依赖性下调TLR4及NF-κB p65的表达,其作用相当于或优于DXM及AZA。最终得出结论:该项研究显示TWP具有抑制TNF-α及IL-1β的作用,下调TLR4,NF-κB p65受体的表达是其作用的机制之一。

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88非依赖信号通路的作用研究

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TWP低、中、高剂量组(3,6,12 mg·kg^(-1)),硫唑嘌呤(AZA)组(6 g·kg^(-1)),每组15只。各组分别给予相应药物连续灌胃14 d。每隔3 d评估UC大鼠疾病活动指数(DAI)。14 d后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分。采用Western blot法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/My D88非依赖信号通路相关分子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB,IFN-γ)在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果提示,DAI评分、大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。RT-PCR及Western blot实验均提示,与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/My D88非依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。与AZA组相比,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子IFN-γmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义。因此,在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,My D88非依赖信号通路参与了炎症活动的调控,TWP可以通过抑制TLR4/My D88非依赖信号通路抑制IFN-γ的释放,发挥抗炎作用,其作用强度与剂量呈正相关。

雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨不同剂量雷公藤多苷(TWP)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法高糖高脂喂养联合小剂量STZ(30 mg/kg)构建T2DM大鼠模型,予不同剂量TWP治疗8周,测定大鼠24 hUAlb及血液生化指标,并观察肾脏病理变化,检测肾脏nephrin、podocin和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化。结果 DM组24 hUAlb高于NC组[(253.7±53.0)vs(45.7±14.5)μg/24 h];与DM组比较,TWP干预后,24 hUAlb减少[(253.7±53.0)vs(183.5±78.7)、(123.8±74.8)、(119.0±52.0)μg/24 h],TWP可改善糖尿病大鼠肾脏病理改变,并使nephrin和podocin表达量增高,VEGF表达量下降。结论 TWP通过上调nephrin和podocin及下调VEGF的表达,对糖尿病大鼠肾脏起到保护作用。

雷公藤多甙对NOD小鼠胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶表达的影响

用环磷酰胺促进NOD小鼠1型糖尿病的发病,腹腔注射雷公藤多甙(TWP)4周,监测糖尿病发病率,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡,免疫组化法观察胰岛β细胞半胱天冬蛋白酶(caspase)3的表达,RT-PCR方法检测胰腺caspase-8 mRNA的表达。结果提示TWP组糖尿病发病率下降,胰岛β细胞凋亡减少,胰岛β细胞caspase-3蛋白及胰腺caspase-8 mRNA的表达均减少。

雷公藤多苷对IgAN大鼠外周血γδT细胞分泌TGF-β1功能的影响

目的:研究雷公藤多苷对IgA肾病(IgAN)大鼠外周血γδT细胞分布及表达转化生长因子β1(TGF-β1)功能的影响。方法:复制IgAN大鼠模型,并予雷公藤多苷干预治疗,同时给予泼尼松对照,运用流式细胞仪检测各组用药前后外周血γδT细胞比率、放射免疫法检测血清IgA水平;以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδT细胞。在体外培养的条件下,以抗CD3抗体刺激48h后,用ELISA法测定培养体系中TGF-β1的表达。结果:雷公藤多苷能抑制血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA的升高,同时还能抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌。结论:通过降低血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA水平,同时抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌,可能是雷公藤多苷治疗IgAN的作用机制之一。

雷公藤多苷对TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠脂质过氧化损伤的保护作用

目的:研究雷公藤多苷对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎大鼠脂质过氧化损伤的保护作用。方法:通过TNBS联合乙醇灌肠的方法,建立TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后,90只雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组15只,分别为正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg、硫唑嘌呤6mg/kg,每组各自给予相应药物灌胃治疗,连续14天。每3天进行一次大鼠疾病活动指数(DAI)评分,所有大鼠在14天后均被解剖,相应结肠组织被留取,对各组大鼠结肠组织进行大体及镜下病理评分;同时,进行心脏取血,离心后取上清液,用ELISA法检测血清中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1β和TNF-α含量。结果:DAI评分,大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇大鼠模型是研究溃疡性结肠炎的极佳模型,雷公藤多苷可显著改善溃疡性结肠炎大鼠临床症状及促进高质量的黏膜愈合,即镜下黏膜愈合,该作用与硫唑嘌呤6mg/kg相当或强于硫唑嘌呤6mg/kg。脂质过氧化反应相关因子ELISA结果提示:与正常对照组相比,模型对照组大鼠体内MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低。与模型组相比,雷公藤多苷呈现剂量依赖性地抑制大鼠血清中MDA水平,增加大鼠血清中SOD、GSH-Px水平,其中雷公藤多苷12mg/kg组能显著抑制MDA、促进SOD、GSH-Px释放。同时,硫唑嘌呤6mg/kg的作用略好于雷公藤多苷12mg/kg,但无统计学差异。炎症因子ELISA结果提示雷公藤多苷呈剂量依赖性地抑制血清中IL-1β及TNF-α的表达,其中雷公藤多苷6mg/kg、12mg/kg、硫唑嘌呤6mg/kg与模型对照组相较抑制炎症因子释放更显著;雷公藤多苷12mg/kg与硫唑嘌呤6mg/kg对炎症因子IL-1β及TNF-α的抑制作用相当,但差异无统计学意义。结论:雷公藤多苷可显著减少TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜镜下炎性细胞浸润,最终达到镜下黏膜愈合的目的,其机制之一是通过减少自由基生成、抑制脂质过氧化反应和增强抗氧化能力,抑制炎症因子释放,重新建立氧化还原平衡,抑制结肠炎症。