Trizol法提取鸡肝组织总RNA及miRNA的条件优化研究

试验旨在优化总RNA及miRNA的Trizol法提取条件。试验利用Trizol法提取鸡肝脏组织总RNA,在RNA的沉降阶段,将样品置于室温、4℃、-20℃和-80℃条件下分别放置10 min、30 min和60 min,另外将样品在-80℃条件下放置3 h、6 h、12 h,分别探究不同沉降温度和不同沉降时间对总RNA完整度、纯度、质量浓度以及miRNA提取量的影响。结果显示:不同沉降温度和不同沉降时间均不影响总RNA的完整性;沉降时间能显著降低RNA的A260/A280比值(P<0.05),但仍在1.90~1.95范围内;不同沉降温度和不同沉降时间均显著影响总RNA和miRNA的提取量(P<0.05)。研究表明,-20℃放置30 min是总RNA提取的适宜条件,-80℃放置3 h为miRNA提取的适宜条件,-80℃放置10 min、4℃放置30 min和-20℃放置60 min的miR⁃NA提取效果良好,适合短时间提取miRNA的相关研究。

Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0.4mL上清液相比,吸取0.2mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。

改良Trizol法提取香蕉叶片总RNA

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良Trizol法,成功地从香蕉叶片中提取了总RNA。所提取的总RNA A260/A280和A260/A230值分别为1.91和2.10。电泳检测显示28 s、18 s条带完整清晰,以此RNA为模板进行RT-PCR,结果成功得到目标特异条带。试验结果表明:改良Trizol法具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对具有香蕉叶片类似成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义。

改良Trizol法提取高质量蒙古沙冬青总RNA

以木本植物蒙古沙冬青的叶片和根为材料,采用改良Trizol法提取总RNA。结果表明,与传统Trizol法相比,改良Trizol法能有效去除提取过程中残留的异硫氰酸胍、β-巯基乙醇以及植物本身的糖、酚类物质,获得高质量总RNA。改良Trizol法提取总RNA技术已被成功应用于蒙古沙冬青转录组数据库的建立。该方法可为木本植物提取高质量RNA提供借鉴。

Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选

采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明：1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9-2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR.

改良TRIzol法同步提取血液RNA和DNA

目的建立一种应用TRIzol试剂针对同一生物检材在提取总RNA的同时又能提取DNA的新方法。方法使用传统TRIzol法将含有总RNA的水相移除,调节中间层和有机相的pH值,乙醇沉淀DNA,运用DNA IQTMsystem试剂盒纯化DNA。检测DNA纯度和质量浓度,并以之为模板进行PCR-STR分型。与传统TRIzol法提取的基因组DNA进行比较。结果改良TRIzol法提取的基因组DNA较传统TRIzol法提取的基因组DNA纯度和质量浓度高,扩增后STR分型良好。结论改良TRIzol法可靠易行,能够实现同一样本同时提取RNA和DNA的目的,可以满足法庭科学个体识别和亲缘鉴定的要求。

Trizol法提取新生小鼠脑组织总RNA优化比较

目的对Trizol法中不同组织研磨方法进行比较,优化新生鼠脑总RNA提取方法。方法取新生24h小鼠脑组织,分别采用常规玻璃组织研磨器(常规研磨法)、剪刀剪碎法、液氮研钵研磨(液氮研磨法)3种方法对组织匀浆进行分离,采用Trizol试剂提取总RNA,紫外分光法测定浓度和纯度,凝胶电泳验证完整性。结果 3种方法均可以提取出总RNA,但相对剪碎法和常规研磨法,液氮研磨法提取的总RNA浓度、纯度及完整性更佳(P<0.05)。结论液氮研磨法虽然对实验条件有一定要求,但仍然是目前最为可靠的脑组织总RNA提取方法,可以完全满足后续实验需要。

改良Trizol法快速提取棉叶片总RNA

棉叶片组织中存在含量较高的棉酚、多糖等次生代谢物质,使用单纯的Trizol很难获得高质量的RNA。首次采用改良Trizol法成功从棉叶片中快速的提取了总RNA,其所提的总RNA完整性好、纯度高,能进一步满足分子生物学的试验要求。

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV)RNA定量检测结果的影响。方法收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息。分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCV RNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异。结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2=0.973)。Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P>0.05)。基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测。

改良Trizol法快速高效提取香石竹总RNA

因为多糖等大分子的污染,传统Trizol法难以从香石竹的叶片中获得完整RNA。本研究以香石竹为材料,对传统的Trizol法进行改良,成功地从香石竹花瓣和叶片中提取了总RNA,经琼脂糖电泳,紫外分光光度计测定总RNA完整性好,纯度大,花瓣的OD260/OD280=1.96,每0.1g花瓣可获得RNA61μg,叶片RNA的OD260/OD280=1.94,每0.1g幼叶可获得RNA33μg,花瓣的RNA产量普遍高于叶片。经改良Trizol法提取的被香石竹斑驳病毒侵染的植株的花瓣和叶片的总RNA,经RT-PCR获得了特异性条带,说明用改良Trizol法从香石竹花瓣和叶片中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于香石竹进一步的分子生物学研究。

改良Trizol-SiO2法在咽拭子及疱疹液EV71-RNA提取中的应用

目的 研究改良Trizol-SiO2法在咽拭子及疱疹液EV71-RNA提取中相对于目前常用的Trizol-氯仿-二氧化硅提取法的优势.方法 选取2010年6月-2013年1月传染科及发热门诊300例手足口病患儿咽拭子和（或）疱疹液拭子标本分别采用Trizol-氯仿-二氧化硅提取法和改良Trizol-SiO2法进行实验结果统计学分析.结果 采用Trizol-氯仿-二氧化硅提取法的232例EV71-RNA阳性标本,采用改良Trizol-SiO2法所获得的定性结果均为阳性;采用Trizol-氯仿-二氧化硅提取法的68例EV71-RNA阴性标本,采用改良Trizol-SiO2法所获得的定性结果均为阴性,两种方法差异无统计学意义（P=0.993）.同时所获的EV71-RNA在进行荧光定量PCR扩增后的扩增曲线Ct值,两种方法差异无统计学意义（P=0.874）.结论 与目前实验室常用的提取EV71-RNA Trizol-氯仿-二氧化硅法相比较,改良Trizol-SiO2法剔除了氯仿试剂并延长了SiO2吸附核酸物质的时间,此方法实现了EV71-RNA的快速提取,适用于大样本量的操作,具有很好的临床应用价值.

改良Trizol法提取尖孢镰刀菌RNA

西瓜枯萎病是西瓜的主要病害之一,其病原是尖孢镰刀菌。用经典Trizol法提取RNA的质量不能满足研究尖孢镰刀菌RNA的需要,而改良Trizol法提取的RNA杂质少,质量高,浓度也有所提高,完整性较好。试验结果表明,改良Trizol法可以满足研究尖孢镰刀菌RNA的需求。

Trizol法大鼠心肌总RNA提取方法探讨

目的探讨大鼠心肌总RNA的提取方法,为今后法医学研究和实践工作提供参考。方法用Trizol法,严格注意无RNA酶操作,通过裂解组织,分离、沉淀RNA而提取大鼠心肌总RNA,并用分光光度计、凝胶电泳及RT-PCR检测结果。结果 Trizol法能获得较高纯度和产量的完整总RNA。结论 Trizol法是提取总RNA可靠有效的方法,可望在法医学领域有较广的应用。

酵母破壁酶和蜗牛酶辅助TRIzol试剂法提取酿酒酵母总RNA

该研究以酵母破壁酶、蜗牛酶破碎酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞壁,再使用总核糖核酸(RNA)提取试剂(TRIzol)法提取酵母总RNA,通过对总RNA进行浓度与纯度的分析,比较酶处理对RNA提取的影响。结果表明,酵母破壁酶的最佳提取条件为加酶量37.5μL,提取温度27℃,提取时间15 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1079.05 ng/μL,A260 nm/A280 nm为2.10,A260 nm/A230 nm为2.15;蜗牛酶的最佳提取条件为加酶量30 mg/mL,提取温度37℃,提取时间30 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1673.39 ng/μL,A260 nm/A280 nm为1.99,A260 nm/A230 nm为1.81。结果显示,酵母破壁酶的提取效果优于蜗牛酶。

改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA

获得海葵纯度高、完整性好的高质量RNA,为海葵高通量转录组测序等分子生物学的深入研究提供基础,以南海海葵为研究对象,采用改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA,并利用琼脂糖凝胶电泳、Nano Drop TM 2000分光光度计和Agilent 2100生物分析仪检测其质量。结果表明:改进TRIzol法从不同发育时期的海葵中提取的RNA电泳条带清晰、海葵-大与海葵-中的RNA完整性好,海葵-小RNA完整性不合格;海葵-大、海葵-中和海葵-小的纯度(OD260/280)分别为1.981、1.983和2.071,浓度分别为335ng/μL、357ng/μL和232ng/μL。改进TRIzol法可有效从海葵中提取高质量RNA。

改良TRIzol法高效提取东北林蛙皮肤总RNA

目的:建立一种从两栖动物皮肤组织中提取高质量总RNA的方法。方法:改良传统TRIzol法,提取皮肤总RNA,紫外分光光度计测定RNA纯度和得率,1.1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。结果:改良方法提取的总RNA,其A260/A280值在1.8～2.1之间,A260/A230大于2;琼脂糖凝胶电泳显示清晰的28s rRNA和18s rRNA条带,且28s rRNA条带亮度约为18s rRNA的2倍。结论:改良TRIzol法提取的总RNA纯度高、完整性好、杂质少、得率大,易于操作掌握,可以用于相应的分子生物学试验。

改良Trizol法提取富含花青素马铃薯块茎的总RNA

富含花青素的马铃薯块茎因含有大量多糖和多酚类次级代谢产物而难以大量提取高质量的总RNA。本研究以紫色和红色马铃薯为材料,利用改良Trizol法实现了块茎总RNA的快速高质量提取。试验结果表明,在Trizol法中添加2%(V/V)"-巯基乙醇、0. 75%(W/V)十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和7. 5%(W/V)醋酸钾(KOAc),可以有效去除多糖、多酚类物质,获得高产、完整的总RNA。改良Trizol法提取时间短、操作方便,提取的RNA通过了actin RT-PCR和18S rRNA RT-q PCR检验,可以用于后续的分子生物学试验。

Trizol试剂法提取金鱼藻总RNA的技术方法改进

Trizol试剂法是一种简单有效的总RNA提取方法,由于基因的表达在不同植物或同种植物的不同组织中具有特异性,同种方法很难应用到所有植物中来获得高质量的总RNA,而由于水生植物叶片通常较薄,沉水叶片又常裂为丝状等特点。和陆生植物相比,在提取水生植物总RNA的过程中,经常出现RNA降解的问题。文章以金鱼藻为实验材料,对Trizol法提取金鱼藻总RNA过程中的若干关键步骤进行了探索,优化了适用于提取金鱼藻总RNA提取的实验方法,得到了可用于转录组分析的高得率、纯度好和完整性高的总RNA,为深入开展后续分子生物学研究提供基础保障。

贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取的Trizol改良法

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)是在农业、环境和发酵工业等领域具有重要应用潜力的细菌。但芽孢杆菌属细菌具有较厚的细胞壁且分泌蛋白多,常规方法难以抽提到高质量的总RNA。因此,建立和优化简便有效的贝莱斯芽孢杆菌总RNA提取方法,将为B.velezensis基因表达和功能研究提供重要的技术支撑。通过优化传统Trizol法,对菌体培养条件、菌体洗涤次数、液氮冷冻处理和溶菌酶裂解菌体方法进行改良,建立了一种简便有效的B.velezensis总RNA提取方法。

改良TRIzol法高效提取钉螺组织总RNA

目的解决钉螺组织中总RNA提取难度大的问题,建立一套适合钉螺组织总RNA提取方法。方法采用改良TRIzol法从钉螺组织中提取其总RNA,并与传统TRIzol法提取结果进行比较。结果本方法优于传统TRIzol法,能够在钉螺组织中提取出完整性好、纯度高的总RNA,其A_(260)/A_(280)在1. 9～2. 0之间,A_(260)/A_(230)在1. 8～1. 9之间,电泳结果表明获得总RNA 28S、18S及5S条带清晰完整,无弥散现象;同时,选取β-acting基因检测,电泳结果表明所得总RNA的质量符合钉螺RT-PCR检测的实验要求。结论本方法便于实施,重复性好,适合钉螺组织总RNA提取,同时为改良优化传统TRIzol法提取其他医学贝类组织总RNA提供了研究思路。