NGF与TrkA受体在儿童膀胱过度活动症中的研究进展

神经生长因子(NGF)因其在神经细胞的存活、生长以及分化过程中发挥重要作用而得到广泛研究。它分布于机体的各处,根据所结合受体发挥不同的病理生理作用。原肌球蛋白相关激酶A(TrkA)是其高亲和力受体,诸多研究表明NGF在与其结合后,根据其下游不同的信号转导通路而发挥不同作用。NGF与其结合后还对体内发生的其他信号转导通路有交叉影响作用。本文从不同的疾病症状对NGF与TrkA结合后的信号转导通路进行综述,从而探讨NGF/TrkA信号通路在儿童膀胱过度活动症的作用。

NGF/TrkA轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)/原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养正常宫颈上皮细胞HUCEC和宫颈癌细胞SiHa,将SiHa细胞分为对照组(正常培养)、L-NGF组(50μg/L重组人NGF蛋白)、H-NGF组(100μg/L重组人NGF蛋白)、H-NGF+L-K252a组(100μg/L重组人NGF蛋白+50μg/L K252a)、H-NGF+H-K252a组(100μg/L重组人NGF蛋白+100μg/L K252a)。Western blot检测NGF、TrkA、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;CCK-8法检测SiHa细胞增殖情况;流式细胞术检测SiHa细胞凋亡;划痕愈合实验测定细胞迁移;Transwell试验测定细胞侵袭。结果SiHa细胞较HUCEC细胞NGF、TrkA水平升高(P<0.01)。与对照组相比,L-NGF组、H-NGF组NGF、TrkA水平,增殖活力,迁移率,侵袭细胞数量以及N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著增加,凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著下降(P<0.05),且H-NGF组较L-NGF组以上指标差异更显著(P<0.05);与H-NGF组相比,H-NGF+L-K252a组、H-NGF+H-K252a组NGF、TrkA水平,增殖活力,迁移率,侵袭细胞数量以及N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著降低,凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),且H-NGF+H-K252a组较H-NGF+L-K252a组以上指标差异更显著(P<0.05)。结论下调NGF/TrkA轴可以抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭,促进其凋亡。

骶神经电针刺激对脊髓全横断损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓神经生长因子NGF及其受体TrkA表达的影响

目的观察电针刺激骶2神经对脊髓全横断损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱重量、排尿量、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其酪氨酸激酶受体(TrkA)的影响,探讨骶神经电针刺激治疗脊髓全横断损伤后神经源性膀胱的机制。方法以尖刀横断T9脊髓方式建立大鼠脊髓全横断损伤后神经源性膀胱模型,通过膀胱重量、排尿量的测量观察空白组、模型组、电针组大鼠的膀胱功能变化;通过Western blot方法观察各组大鼠脊髓内NGF及TrkA表达情况,并统计分析各组间的差异。结果治疗4周后,与空白组比较,模型组和电针组膀胱重量均明显增高(P<0.05)。与模型组比较,电针组膀胱重量降低(P>0.05)。与空白组比较,模型组手法排尿量增加(P<0.05)。与空白组比较,电针组手法排尿量增加(P>0.05)。与模型组比较,电针组手法排尿量减少(P>0.05)。空白组和电针组的NGF及TrkA的表达明显高于模型组(P<0.05)。电针组的NGF高于空白组,TrkA的表达低于空白组(P>0.05)。结论骶神经电针刺激治疗可以通过提高损伤脊髓局部神经生长因子NGF及其高亲和力受体TrkA的表达,抑制脊髓损伤局部神经细胞凋亡,保护神经细胞并促进损伤神经的恢复。同时电针刺激促进排尿反射的协调进行,改善SCI后NB的膀胱功能。

NGF及其受体trkA及p75NTR在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达及其与内异症疼痛的关系

目的:研究子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜神经生长因子(NGF)及其受体trkA、p75NTR的表达,探讨上述因子与内异症疼痛的关系。方法:选择就诊于北京协和医院并进行了腹腔镜手术的28例子宫内膜异位症患者作为研究组,非子宫内膜异位症患者10例作为对照组(B组),收集上述患者分泌期在位子宫内膜。根据患者有无痛经,分为内异症疼痛组(A1组,18例)及内异症非疼痛组(A2组,10例)。采用免疫组化比较各组病灶中NGF及其受体trkA、p75NTR的表达,并分析其与痛经的关系。结果:各组在位内膜腺上皮中NGF的表达显著高于间质(P<0.05);内异症疼痛组腺上皮NGF表达较非疼痛组明显升高(359.9±18.7 vs 201.3±34.3,P<0.05)。p75NTR主要在子宫内膜间质细胞中表达;内异症组明显高于非内异症组(58.8±21.1、22.5±16.1 vs 0,P<0.05);内异症疼痛组较非疼痛组p75NTR表达明显升高(58.8±21.1 vs 22.5±16.1,P<0.05)。trkA在非内异症组子宫内膜间质中表达明显高于腺上皮(P<0.05);在内异症组腺上皮中,trkA的表达较非内异症组明显增高(P<0.05);trkA的表达量与内异症患者疼痛无关。结论:p75NTR可能参与内异症的发病,NGF及其受体p75NTR在在位内膜中的表达与患者疼痛相关,表明其可能参与了内异症疼痛发病机制。

早期干预与TrkA受体在脑损伤修复中的作用

目的:研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑功能的影响及其与神经生长因子TrkA受体表达的关系。方法:将HIBD大鼠分为干预(H1)组和非干预(H0)组,用跳台试验检测各组大鼠学习记忆能力,并用酶免疫组织化学技术检测TrkA受体的表达情况。结果:H0组错误反应潜伏期较正常对照组明显缩短,而H1组的学习记忆能力则明显提高。同时,H1组额皮质和海马CA3区TrkA受体阳性神经元数目明显多于H0组。结论:早期干预方法可提高HIBD大鼠学习记忆能力,其促进脑功能修复的机制与提高脑神经细胞TrkA受体表达有关。

针刺抗脑缺血再灌注损伤中TRkA对PSD-95表达的调节作用

目的在肯定针刺抗缺血性神经元凋亡的基础上,进一步探讨电针对大鼠局灶性脑缺血脑内PSD-95表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞为局灶性脑缺血模型,以针刺穴位为治疗手段,用免疫组化SABC技术DAB显色的方法显示PSD-95受体。结果缺血组大鼠丘脑网状核阳性神经元的表达高于正常组的表达。电针组的表达低于缺血组。针刺对缺血侧神经元PSD-95表达的下调作用可以被TRKA的拮抗剂LY所抑制。结论针刺对缺血侧神经元PSD-95表达的下调作用与TRKA有关。

甲状腺激素通过NGF及TrKA调节中枢胆碱能神经元发育

目的探索甲状腺激素通过神经生长因子(NGF)及其受体TrKA对大鼠顶叶皮层、海马部位中枢胆碱能神经元发育的作用。方法将Wistar大鼠分为3组:①甲状腺功能减退(甲减)组:从母鼠妊娠5～6d起饲以含0.02%的他巴唑饮用水;②甲状腺功能亢进(甲亢)组:仔鼠出生即日起,按体质量腹腔注射T4(0.4μg/g);③对照组:饲以普通饲料及饮用水。于出生后第14、21、28天,免疫组化法检测大鼠顶叶皮层、海马中胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞,原位杂交法测定NGF、TrkA mRNA的表达。结果①出生后第21、28天顶叶皮层、海马中,甲减组(159.42±5.26、162.37±4.67,98.60±7.67、101.50±4.39)ChAT阳性细胞数较对照组(174.80±5.10、171.40±3.87,213.40±16.93、274.60±6.69)明显减少(P<0.05或<0.01),甲亢组(312.50±3.75、296.30±6.13,324.60±15.72、319.10±8.85)ChAT阳性细胞数较对照组明显增加(P<0.01);②对照组顶叶皮层、海马中,ChAT阳性细胞数、NGF、TrkA mRNA表达高峰期分别为第28、21、28天,甲亢组未见高峰期改变,而甲减组除TrkA mRNA表达高峰期未改变,仍为第28天外,ChAT阳性细胞数、NGF mRNA表达高峰期分别变为第21、28天;③在顶叶皮层、海马中,第14、21、28天NGF、TrkA mRNA表达甲减组均低于对照组(P<0.05或<0.01);第14、21天甲亢组与对照组相比,NGF mRNA明显升高(P<0.05或<0.01),TrkA mRNA各时点两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胆碱能神经元在脑发育期内对甲状腺激素失衡十分敏感,NGF、TrkA mRNA在发育过程中的变化对中枢胆碱能神经元的存活、发育可能起一定的调节作用,甲状腺激素可能通过NGF及其受体TrkA调节海马及顶叶皮层中枢胆碱能神经元的发育。

NGF受体TrkA与TGF-β受体相互作用

神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是最早发现的神经营养因子家族成员,它主要通过细胞表面受体酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)来介导复杂的生物学效应。TGF-β(transformation growth factor-β)是一个包含众多成员的细胞因子超家族,它们通过Smad介导的经典信号通路或者不依赖于Smad蛋白的信号通路发挥功能。有报导称,在鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中,NGF可以激活Smad信号通路,但其具体分子机制依然不清楚。为了进一步了解NGF介导的信号与TGF-β信号之间的串话(crosstalk),采用GST-pulldown和免疫共沉淀-免疫杂交的方法,对NGF受体和TGF-β受体之间的相互作用进行了研究,发现NGF受体TrkA与TGF-β超家族的各种I型受体之间均存在相互作用;同时,TrkA也能与TGF-β超家族的Ⅱ型受体TβRII及ActRII结合,但并未检测到Tr-kA与另一个Ⅱ型受体BMPRII之间的相互作用。

神经营养因子受体TrkA、TrkB、TrkC和TrkE在参环毛蚓体内的分布

高亲和性神经营养因子受体Trk ,广泛存在分布于哺乳动物神经组织。研究表明 :随着动物进化程度的降低 ,亚型Trk受体的类型有所减少 ;在低等动物 ,关于环节动物 (Annelida)Trk受体存在与否、分布如何尚未见报道。以我国环节动物门典型代表参环毛蚓 (Pheretimaaspergillum)为研究对象 ,运用免疫细胞化学染色技术 ,在光镜下观察TrkA、TrkB、TrkC和TrkE阳性细胞和纤维的形态与分布。发现Trk存在于参环毛蚓的神经系统和非神经组织。各亚型分布有所差异 ,TrkA阳性神经细胞存在于咽下神经节和肠神经系 ,阳性神经纤维存在于腹神经索和肠神经系 ;TrkB阳性细胞存在于非神经组织的肠上皮 ;TrkC阳性神经细胞存在于脑、咽下神经节和肠神经细胞 ,阳性神经纤维存在于围咽神经环、腹神经索和肠神经系 ;TrkE阳性神经细胞存在于脑、阳性神经纤维存在于咽下神经节和腹神经索。上述研究结果表明 :Trk存在于进化程度较低的环节动物 ,Trk在进化上具有悠久的历史。各亚型Trk受体的不同分布提示不同部位的神经细胞受不同神经营养因子的作用。

雌激素受体α和TrkA在基底前脑的分布与共存

基底前脑为神经营养因子和雌激素作用的靶区之一。为了在受体水平探讨这些配体是否作用于正在发育和成年大鼠的基底前脑同一神经元 ,本文采用免疫组织化学双重反应方法观察了雌性大鼠雌激素受体α和酪氨酸激酶 A在基底前脑的分布与共存。用小鼠抗雌激素受体和兔抗酪氨酸激酶 A分别孵育切片 ,ABC法显示前者的反应产物主要位于胞核内 ,蓝黑色 ,呈点状 ;后者位于胞质和突起内 ,呈棕色。结果表明 :两者都分布于基底前脑神经元。在双重免疫组织化学反应条件下可见三种细胞 :雌激素受体阳性细胞 ,酪氨酸激酶 A阳性细胞和双重反应阳性细胞 ,双重反应阳性细胞所占的比例因部位而不同。雌激素受体和酪氨酸激酶 A共存提示它们的配体可通过共存于基底前脑同一神经细胞上的相应受体而作用于同一神经元 ,协同地调节特异的基因或者基因网络的表达 ,从而影响神经元的存活、分化、成熟。

大鼠脊髓中神经生长因子受体TrkA的表达与分布

目的 :检测神经生长因子受体TrkA在大鼠脊髓中的表达与分布。方法 :通过Westernblot检测TrkA在脊髓中的表达 ;通过免疫荧光组织化学 ,利用激光共聚焦显微镜检测TrkA在神经元中的定位。结果与结论 :TrkA广泛分于脊髓各层神经元及灰质内 。

神经生长因子高亲和力受体(TrkA)cDNA片段的克隆

目的 :克隆大鼠背根神经节中 NGF高亲和力受体基因。方法 :从出生 1周大鼠背根神经节中抽提总RNA,设计 Trk A引物 ,进行 RT- PCR扩增。扩增产物直接与 T载体连接后转化 E.coli DH5 α,用蓝 /白斑试验筛选阳性克隆 ,抽提质粒进行酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 :经 RT- PCR获得预期 416bp的目的片段 ,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实 ,克隆片段与 Genbank中 Trk A基因序列 10 0 %同源。结论 :成功地构建了含 Trk A基因 c D-NA的 T载体克隆 。

NGF及其受体TrkA、p75在翼状胬肉组织中的表达

目的研究翼状胬肉组织中的NGF及其受体TrkA、p75蛋白表达,探讨其与翼状胬肉形成的关系。方法应用免疫组织化学检测30例翼状胬肉组织以及5例正常结膜组织中NGF、TrkA和p75蛋白的表达。结果NGF、Tr-kA和p75蛋白在翼状胬肉组织的上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞中呈阳性表达;NGF、TrkA蛋白在正常结膜组织上皮细胞和成纤维细胞中呈弱阳性表达;p75蛋白仅在正常结膜组织上皮细胞中呈弱阳性表达。结论NGF、TrkA、p75可能共同参与翼状胬肉的发生、发展过程。

神经生长因子-TrkA信号通路在疼痛中的作用机制及TrkA抑制剂的研究进展

TrkA是神经生长因子(NGF)的受体酪氨酸激酶,选择性结合NGF,除了在神经系统多种神经元的生长发育、分化和轴突形成过程中起关键作用外,神经生长因子及其功能性受体TrkA在疼痛的产生及维持过程中也起了重要作用。研究证明,阻断NGF-TrkA信号可有效抑制疼痛及痛觉过敏。对于疼痛的治疗,目前主要有3种针对NGF-TrkA信号的药理学方法:隔绝或消除内源性NGF、拮抗TrkA受体以阻止其与NGF结合、阻断TrkA激酶活性。以TrkA受体为靶点,应用TrkA抑制剂阻断TrkA信号可为更好治疗疼痛提供新方法。本文就TrkA受体在疼痛中的作用以及TrkA抑制剂的研究进展作一综述。

中药参乌胶囊对老年大鼠学习记忆及海马组织学的影响

目的探讨中药复方参乌胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法雌性Wistar大鼠 ,老年为 2 2月龄 ,青年为 5月龄。参乌胶囊高剂量 1 8g/kg ,低剂量 0 9g/kg ,每日灌胃给药一次 ,连续灌胃 2个月。通道式水迷宫检测动物学习记忆功能 ,HE染色显示神经元 ,ABC法行星形胶质细胞、神经生长因子 (NGF)及其受体TrkA免疫组化染色。VISILOG 5 0图像分析系统对组织切片进行分析。记数海马CA1区总阳性细胞数量、阳性细胞总面积 (像素单位 )及阳性细胞灰度积分值 (灰度单位 )。结果老年大鼠水迷宫游出时间延长、错误次数增多 (P <0 0 0 1) ;海马CA1区神经元数量减少 (P <0 0 5 ) ,星形胶质细胞增生 (P <0 0 1) ;NGF及其受体TrkA阳性细胞数、阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值较青年对照减少 (P <0 0 5 )。参乌胶囊使老年大鼠水迷宫游出时间缩短、错误次数减少 (P <0 0 1) ;海马CA1区神经元数量增加 ,星形胶质细胞增生减少 (均P <0 0 1) ;NGF及其受体TrkA阳性细胞数、阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值明显增多 (P <0 0 1— 0 0 5 ) ;参乌胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论参乌胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrkA表达 ,增加神经元数量、减少胶质细胞增生 。

连续小剂量吗啡腹腔注射对CCI大鼠抗伤害效应的实验研究

目的观察坐骨神经慢性收缩损伤(CCI)后小剂量吗啡连续腹腔注射对大鼠痛敏的影响,以及脊髓背角c-fos基因及TrkA受体表达,探讨吗啡耐受的可能机制.方法选择雌性SD大鼠40只,随机分为4组,A组:假手术组,B组:CCI组,C组:CCI+生理盐水组,D组:CCI+吗啡组[5 mg/(kg·d)],分别于术前2 d,术后7、14 d进行热痛阈测试,免疫组织化学方法检测术后7、14 d c-fos基因及TrkA受体的表达.结果 A组术后术侧热痛阈轻度下降,与术前相比差异无显著性意义.B、C、D组术后术侧呈现不同程度热痛阈下降,以术后14 d为著,B、C组与A组相比,差异均有极显著性意义(均P<0.01),D组与A组相比,差异有显著性意义(P<0.05).CCI术后14 d脊髓c-fos基因、TrkA受体的表达较术后7 d明显增加,c-fos基因的表达主要集中于脊髓背角表层Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ层的中间内侧部,TrkA受体分布于Ⅱ～Ⅴ层.c-fos基因、TrkA受体的表达在B、C、D 3组与A组相比,差异具有显著性意义(P<0.05);D组与B组相比,差异无显著性意义(P>0.05).结论小剂量吗啡连续腹腔注射不能有效抑制坐骨神经损伤后热痛觉过敏及脊髓背角c-fos基因、TrkA受体的表达,可能与长时间使用吗啡导致脊髓背角神经元兴奋性进一步升高,发生中枢可塑性改变,以及脊髓背角神经元μ-阿片受体脱敏感有关.

灯盏花素干预体外培养大鼠脑皮质神经元的存活与生长

背景:神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用。目的:观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响,并初步探讨其机制。方法:取新生SD大鼠胚胎,取其大脑皮质后,对神经元进行原代培养,随机分为3组,其中灯盏花素组加入10 g/L灯盏花素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像,之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶A mRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。结果与结论:正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异(P>0.05),但正常组及对照组均有随时间点延长,3个指标均上调(P<0.05),灯盏花素组细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力均较正常组及对照组升高(P<0.05)。神经生长因子及TrkA mRNA的表达在正常组和对照组在各时间点无明显差异(P>0.05),灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调(P<0.05)。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。

蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜TekA、p75NTR表达的影响

目的:探讨蛴螬促进激光损伤兔血-视网膜屏障后的修复作用及机理。方法:30只成年健康有色家兔随机分为正常对照组、模型对照组、蛴螬组。采用激光损伤血-视网膜屏障动物模型,在屏障损伤后1周及2周2个时相,观察蛴螬对兔血-视网膜屏障损伤修复情况、血-视网膜屏障组织形态结构及神经营养因子受体TrkA、p75NTR表达及影响。结果:蛴螬能促进损伤的血-视网膜屏障修复,减轻激光导致的视网膜组织及细胞形态学损伤,促进TrkA、p75NTR的表达,抑制视网膜细胞增殖与变性,从而改善视网膜功能。结论:蛴螬可能通过改善视网膜组织能量代谢,清除氧自由基,促进神经营养因子受体的表达,抑制视细胞增殖,从而起到保护血-视网膜屏障组织结构,促进损伤后功能恢复的作用。

神经生长因子及其受体在卵巢癌中的作用

神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子家族的一种多肽激素,除能促进神经纤维的生长外,还可以通过自分泌和旁分泌的方式作用于某些特定类型的肿瘤组织,影响其发生、发展和转移。在卵巢癌中,NGF通过与其受体TrkA和p75NTR结合而促进肿瘤供给血管的生成,影响细胞因子的水平,在卵巢癌的发生、发展、侵袭和转移中发挥着不可忽略的作用。充分认识NGF的作用机制,将为其在肿瘤早期诊断、治疗及判定预后方面开辟新领域。

胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义

目的:研究神经生长因子(NGF)高亲和受体TrkA与低亲和受体p75在胰腺癌中的表达意义.方法:应用实时定量PCR法检测56例胰腺癌组织中TrkA及p75的表达并进行临床病理及预后分析.结果:所有组织标本中均可检测出TrkA及p75的表达呈负相关.p75与TrkA的表达水平与患者的腹背部疼痛和神经浸润程度有关(P均<0.05).Cox单变量分析揭示,高p75表达患者较高TrkA患者的总生存时间延长(P<0.05),Cox多变量分析揭示,p75及TrkA均为影响预后的独立因素.结论:胰腺癌中TrkA的表达促进肿瘤的恶性进展,而p75则相反,NGF刺激增长或抑制胰腺癌的双重作用可能与TrkA及p75的表达比率相关.