RNA干扰下调人滋养层细胞表面抗原-2基因表达对前列腺细胞侵袭及尿激酶纤溶酶原激活物蛋白的影响

目的 观察人滋养层细胞表面抗原-2（Trop-2）基因对人前列腺细胞侵袭的影响,并探讨其分子机制.方法 采用TROP-2基因小于扰RNA（siRNA）转染处理人前列腺PC-3细胞后,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测TROP-2基因mRNA和蛋白水平;采用Transwell小室法试验检测癌细胞侵袭能力;采用Western blot法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）蛋白变化.结果 siRNA转染组细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.01）.siRNA转染组穿过滤膜的细胞数明显下降,且呈浓度依赖性（P＜0.01）.Transwell小室试验结果显示,Con-A、Con-B、siRNA（5nmol/L）、siRNA（10 nmol/L）、siRNA（20 nmol/L）组穿膜细胞数分别为（128.16 ±3.89）、（127.58 ±3.56）、（102.56 ±3.28）、（76.38 ±3.25）和（39.89±3.18）个.Western blot结果显示,TROP-2 siRNA转染组uPA蛋白表达明显下调,且与浓度相关.结论 TROP-2基因在人前列腺癌细胞侵袭中发挥重要的作用,采用siRNA转染可抑制前列腺细胞侵袭,下调uPA表达,是其重要机制之一.

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P<0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。