曲利本红与氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

在弱酸性条件下 ,酸性双偶氮染料曲利本红 (TR)或硫酸卡那霉素 (KANA)、硫酸新霉素 (NEO)、硫酸庆大霉素 (GEN)和硫酸妥布霉素 (TOB)等氨基糖苷类抗生素的各自共振瑞利散射 (RRS)十分微弱 ,但两者相互作用形成离子缔合物时能使RRS急剧提高并产生新的RRS光谱 ,在 40 0～ 5 3 5nm之间有一个强的散射带 ,最大散射峰位于 40 0nm处 ,在 0 0 13～ 6 0 μg·mL-1范围内RRS强度与抗生素浓度成正比 ,可用于氨基糖苷类抗生素的测定 .对不同抗生素的检出限 (3σ)在 12 9～ 17 6ng·mL-1之间 ,其灵敏度的顺序是KANA >NEO >TOB >GEN .方法有较好的选择性 ,可用于市售抗生素注射液或滴耳液中药物含量和临床血药浓度的快速测定 .文中还用量子化学方法对反应机理进行探讨 。

曲利本红分光光度法测定氨基糖苷类抗生素

在pH2.8~7.0的条件下,曲利本红(TR)与硫酸妥布霉素(TOB)、硫酸庆大霉素(GEN)和硫酸新霉素(NEO)等氨基糖苷类抗生素反应生成红色离子缔合物,最大显色波长位于392nm(NEO、GEN)和570nm(TOB),不同体系的线性范围从0~14.0mg.L-1至0~16.0mg.L-1,摩尔吸光系数(ε)在7.65×103~1.40×104L.mol-1.cm-1之间;最大褪色波长位于502nm(NEO)和498nm(GEN、TOB),线性范围从0~13.0mg.L-1至0~16.0mg.L-1,摩尔吸光系数(ε)在4.02×103~9.32×103L.mol-1.cm-1之间。当用双波长叠加法测定时,ε值在1.46×104~2.67×104L.mol-1.cm-1之间。探讨了适宜的反应条件及主要的分析化学性质。该法用于市售药物中氨基糖苷类抗生素含量的测定,结果满意。

测定新药雷洛昔芬的曲利本红共振瑞利散射法

在 pH1.4的醋酸钠 -盐酸缓冲溶液中,曲利本红和雷洛昔芬自身的共振瑞利散射(RRS)均很微弱,只在470nm处有很弱的散射信号,但当它们结合形成离子缔合物后,RRS大大增强,而且产生了新的散射峰,在310～530nm范围内呈现高的散射强度,且以396nm处的散射信号最强 ;RRS强度在0～6.3mg·L-1的范围内与雷洛昔芬的质量浓度成正比 ;方法灵敏度高,对雷洛昔芬的检出限(σ=3)为10.9μg·L-1,而且选择性、稳定性俱佳,由此建立了一种用RRS法测定痕量雷洛昔芬的方法 ;方法用于Evista片中雷洛昔芬含量的测定。

镧-曲利本红光度法测定新霉素及庆大霉素

在pH3.0～6.5的条件下,镧(Ⅲ) 曲利本红(TR)与硫酸新霉素(NEO)或硫酸庆大霉素(GEN)反应生成三元红色离子缔合物,其最大吸收波长位于388nm,摩尔吸收光系数(ε)为4.86×104、2.10×104L·mol-1·cm-1;最大负吸收波长位于432nm(NEO)和428nm(GEN),摩尔吸收光系数(ε)为1.38×104、1.19×104L·mol-1·cm-1。当用双波长叠加时,ε值为6.24×104(NEO)、3.28×104(GEN)L·mol-1·cm-1。探讨了适宜的反应条件和主要分析化学性质。该法用于市售药物中新霉素、庆大霉素含量的测定,结果满意。

铜绿微囊藻中性红染色研究

以铜绿微囊藻为材料,研究了中性红染色法在藻细胞活性检测方面的运用。对染色剂浓度、染色时间、细胞密度和细胞活性等条件进行了研究。结果显示,中性红浓度为1/5000,染色时间15min时,染色率可以达到98%以上。而常用的台盼蓝染色效果较差,只有50%左右。在藻细胞活性检测中,中性红比台盼蓝更准确和可靠。

大鼠角膜酸烧伤对角膜内皮细胞损伤和修复的实验观察

目的研究大鼠角膜酸烧伤对内皮细胞的损伤和影响内皮修复的因素。方法建立轻、中、重度大鼠角膜酸烧伤模型,裂隙灯下动态观察角膜水肿、混浊及上皮愈合情况;各组于烧伤后不同时间点取角膜行内皮细胞台盼蓝-茜素红联合活细胞染色及HE染色,观察内皮细胞损伤、修复及白细胞浸润情况。结果轻、中度酸烧伤角膜内皮细胞未见损伤改变,角膜少量白细胞浸润,上皮愈合及水肿消退均较快;重度酸烧伤损伤区内皮细胞坏死、脱落,修复期损伤周边区内皮细胞变形、伸长,向创面移行,角膜大量白细胞浸润,角膜上皮愈合延迟,水肿消退慢。结论重度酸烧伤可直接造成角膜内皮细胞受损,继发性炎症反应参与了酸烧伤后角膜内皮细胞的损害;内皮细胞受损可使角膜溃疡及水肿迁延不愈。

虎红、曲利本红-阿米卡星的光度法研究

在酸性条件下,硫酸阿米卡星(AMK)与虎红(TIR)、曲利本红(TRR)均可反应生成离子缔合物。在可见和近紫外区,TRR-AMK的最大显色波长位于392nm处,最大褪色波长位于350nm处,线性范围为0～16.0μg/ml(显色法)和0～14.0μg/ml(褪色法),表观摩尔吸光系数(ε)为1.50×104L/(mol·cm)(显色法)和5.54×103L/(mol·cm)(褪色法)。TIR-AMK使TIR溶液褪色,最大褪色波长位于538nm处,线性范围为0～16.3μg/ml,表观摩尔吸光系数(ε)为6.97×104L/(mol·cm)。它们在一定浓度范围内均遵从朗伯比尔定律,由此建立了测定硫酸阿米卡星的虎红、曲利本红光度法。该法用于市售药物及尿液中硫酸阿米卡星含量的测定,结果满意。

锥兰联合茜素红染色证实保存后的兔角膜内皮细胞活性

目的:我们应用锥兰联合茜素红染色证实保存后的兔角膜内皮细胞活性。方法:我们随机的将离休的新西兰白兔眼球分为四组,每组5只。将房水抽空,随即前房内注入C_3F_8(全氟乙烷,惰性气体)气体,于湿房4℃条件下分别保存5,7,10,14天,然后取下带巩膜环的角膜片,内皮面向上放在角膜容器内,将0.25％锥兰溶液滴于内皮面,1分半钟后将染料洗净,再将0.2％的茜素红溶液滴于内皮面,染色1分半钟,将染料洗净,将角膜片放于2.48％的成二醛中固定10钟,最后应用光学显微镜检查并照相。结果:正常内皮细胞核未被锥兰染料染色,破损的内皮细胞胞核蓝染,正常与异常内皮细胞的间质被茜素红染料染成粉红色。保存5天和7天的角膜内皮细胞存活率均大于95％,保存10天的内皮细胞存活率在75—80％左右,保存14天的内皮细胞存活率在70％左右。结论:此染色方法不但可以计数破损的内皮细胞,亦可以计数和观察正常的内皮细胞。清晰地观察内皮细胞的结构,有利于病理照相。眼科学报 1995;11:65—66。

一种纤维素酶产生菌筛选方法的改良

纤维素是自然界最为丰富的可再生资源,许多国家已在纤维素酶产生菌上开展了广泛研究。传统的刚果红平板染色筛选方法,不是操作繁琐、菌落混杂,就是微生物产生的透明圈较为模糊,不易区分;利用曲利本蓝作为染料筛选纤维素酶产生菌,操作方便简洁且产生的透明圈明显,而且其粗酶液采用滤纸酶活力(FPA)分析,发现该方法筛选的菌株假阳性低。

三种染色方法检测冻融后兔卵巢组织的活力和质量

目的建立一种简单的评价冷冻前后卵巢组织活力与质量的方法。方法 10只性成熟雌性大耳白兔,取卵巢组织制成皮质片,随机均分成2组(n=5):新鲜组织和冷冻组织。台盼蓝、Calcein AM/EH及中性红染色检测分离卵泡的存活率并对卵巢组织中卵泡的存活情况进行染色。激素释放试验检测冷冻前后兔卵巢组织的功能。结果应用台盼蓝、Calcein AM/EH及中性红对卵巢组织分离卵泡活力的评价效果相似;中性红能较好的评价卵巢组织中卵泡的存活情况。经冷冻解冻后,卵泡的活力下降,差异有统计学意义(P<0.05);体外培养过程中,培养液E2水平不断增加,培养12 d后,E2浓度在新鲜及冷冻复苏组织分别达1054、961 pg/m L。孕酮水平分别为2.31、1.9 ng/m L。结论中性红可有效地评价卵巢组织卵泡的活性;激素释放试验可以提供冷冻解冻卵巢组织存在活性的佐证。

锥兰联合茜素红活细胞染色法观察角膜中央碱烧伤内皮细胞愈合过程

目的:研究角膜碱烧伤内皮细胞的愈合过程。方法:锥兰联合茜素红内皮细胞染色法对角膜中央碱烧伤内皮细胞形态学变化进行观察。结果:伤后20分钟内皮细胞已破坏。72小时,损伤区的周边内皮细胞变形向创面内迁移。第7天后缺损区大部分范围均可见梭形细胞覆盖。结论:兔碱烧伤损伤区内皮细胞的修复由邻近内皮细胞变形,增殖和移行长入创面内完成,修复的内皮细胞具有纤维细胞特征。眼科学报1999;15:218-220。

不同类型白内障晶状体上皮细胞的组织病理学观察

背景 白内障的发生与晶状体上皮细胞（LECs）结构和功能的受损有直接关系,而白内障LECs的特征性形态学变化是目前证实细胞结构和功能受损最有力的证据,了解不同类型白内障的LECs形态变化对于研究不同环境或不同疾病对LECs的生物学行为有重要意义. 目的 观察不同类型白内障LECs的形态学变化.方法 在白内障摘出手术过程中分别收集年龄相关性白内障、糖尿病性白内障及高度近视并发性白内障的晶状体前囊膜各15片,各种类型白内障的前囊膜分别进行锥虫蓝-茜素红（TB-AR）染色和苏木精-伊红染色,评估LECs的活性和形态,并在透射电子显微镜下观察各种类型白内障LECs的超微结构改变,对不同类型白内障的LECs生物学行为进行比较.结果 TB-AR染色结果表明,年龄相关性白内障LECs大小不等,呈多边形,镶嵌样排列,少量细胞死亡,细胞膜模糊不清,细胞核呈圆形;糖尿病性白内障LECs水肿,体积增大,细胞大小不等;而高度近视并发白内障LECs体积较小,大部分细胞死亡.苏木精-伊红染色显示,年龄相关性白内障晶状体囊膜为一均质膜,LECs层呈单层排列,多数细胞结构完整,紧密贴附于前囊膜上;糖尿病性白内障前囊膜部分区域LECs与囊膜间有空隙,细胞核大小不等;高度近视并发性白内障LECs较小,形态不规则,细胞着色深.透射电子显微镜下观察发现,年龄相关性白内障前囊膜及多数LECs形态正常,细胞间以及细胞与囊膜间连接尚可;糖尿病性白内障LECs之间以及细胞与囊膜间也可见紧密连接,但显示细胞水肿,细胞间隙扩大,高度近视并发性白内障LECs可见细胞质嵌合突起,细胞质内有空泡变性.结论 年龄相关性白内障、糖尿病性白内障和高度近视并发性白内障均以LECs的变性、坏死、凋亡为共同的细胞学基础,但糖尿病性白内障和高度近视并发性白内障的LECs改变明显重于年龄相关性白内障.

应用台盼蓝-茜素红联合染色实时观察晶状体上皮细胞形态与活性的研究

目的:探讨台盼蓝-茜素红染色应用于晶状体上皮细胞形态及活性研究的可行性。方法:取大耳白兔、正常人、白内障患者的晶状体前囊膜,行台盼蓝-茜素红染色,光镜下观察细胞的形态、染色效果并判断其活性。结果:兔、正常人、白内障患者晶状体上皮细胞通过台盼蓝-茜素红联合染色均可获得良好的染色效果。光镜下可清楚显示晶状体上皮细胞的形态并能区分正常与死亡的细胞。结论:台盼蓝-茜素红活性染色可用于观察晶状体上皮细胞的形态、密度、面积以及细胞的活力,是研究晶状体上皮细胞的一种良好而实用的方法。

不同缝合方式对大鼠角膜穿通伤后内皮细胞影响的研究

目的:通过手术缝合治疗大鼠角膜穿通伤,探索全层缝合、深板层缝合、及不缝合对角膜内皮细胞的影响。方法:建立大鼠角膜穿通伤模型,同一手术者对角膜切口进行全层、深板层、及不缝合操作。在裂隙灯下动态观察角膜创伤愈合情况;对不同时间点愈合角膜行内皮细胞台盼蓝-茜素红联合活细胞染色及HE染色,观察内皮细胞损伤、修复及白细胞浸润情况。结果:无论是全层缝合还是板层缝合以及不缝合组角膜内皮细胞均损伤明显。但从第1天观察至1月,三组损伤区面积大小无明显差别。结论:全层和深板层缝合及未缝合组可直接造成角膜内皮细胞受损,继发性炎症反应损伤后角膜内皮细胞的损害;伤口周围1.5 mm处角膜内皮几乎损失殆尽,内皮细胞受损可使角膜损伤区水肿迁延不愈,最终形成瘢痕愈合,所以角膜内皮损伤及最终愈合程度三组间无明显差异。