期刊文献+
共找到80篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
Studies on Digestive Enzymes in Alimentary Tract of Southern Sheatfish (Silurus meridionalis Chen) Larvae Ⅰ-Trypsin and Pepsin 被引量:1
1
作者 Huang Feng, Yan Ansheng, Zhang Guirong,Yu Haiyan Fisheries College of Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China Jiang Xiaotao Wuhan civil administrative school, Wuhan 430061, China 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 1999年第1期120-124,共5页
The pepsin and trypsin activities and some of the properties of the two enzymes of southern sheatfish larvae were studied. The results were as follows: the highest level of trypsin activity is in the foregut in all... The pepsin and trypsin activities and some of the properties of the two enzymes of southern sheatfish larvae were studied. The results were as follows: the highest level of trypsin activity is in the foregut in all measured tissues; from foregut to hindgut, trypsin activities decrease; the pH optimum of trypsin activity is pH9.0; the strongest pepsin activity is in the stomach; the proper density of haemoglobin for detecting pepsin activity is 1.0%. These data are useful in solving applied nutritional problems, such as the adequacy of artificial food to the digestive abilities of the fish. 展开更多
关键词 southern sheatfish ( Silurus meridionalis ) trypsin PEPSIN digestive enzyme
下载PDF
Change of Digestive Physiology in Sea Cucumber Apostichopus japonicus(Selenka) Induced by Corn Kernels Meal and Soybean Meal in Diets
2
作者 YU Haibo GAO Qinfeng +2 位作者 DONG Shuanglin HOU Yiran WEN Bin 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2016年第4期697-703,共7页
The present study was conducted to determine the change of digestive physiology in sea cucumber Apostichopus japonicus(Selenka) induced by corn kernels meal and soybean meal in diets. Four experimental diets were test... The present study was conducted to determine the change of digestive physiology in sea cucumber Apostichopus japonicus(Selenka) induced by corn kernels meal and soybean meal in diets. Four experimental diets were tested, in which Sargassum thunbergii was proportionally replaced by the mixture of corn kernels meal and soybean meal. The growth performance, body composition and intestinal digestive enzyme activities in A. japonicus fed these 4 diets were examined. Results showed that the sea cucumber exhibited the maximum growth rate when 20% of S. thunbergii in the diet was replaced by corn kernels meal and soybean meal, while 40% of S. thunbergii in the diet can be replaced by the mixture of corn kernels meal and soybean meal without adversely affecting growth performance of A. japonicus. The activities of intestinal trypsin and amylase in A. japonicus can be significantly altered by corn kernels meal and soybean meal in diets. Trypsin activity in the intestine of A. japonicus significantly increased in the treatment groups compared to the control, suggesting that the supplement of corn kernels meal and soybean meal in the diets might increase the intestinal trypsin activity of A. japonicus. However, amylase activity in the intestine of A. japonicus remarkably decreased with the increasing replacement level of S. thunbergii by the mixture of corn kernels meal and soybean meal, suggesting that supplement of corn kernels meal and soybean meal in the diets might decrease the intestinal amylase activity of A. japonicus. 展开更多
关键词 soybean cucumber amylase digestive intestine replaced Selenka trypsin Sargassum altered
下载PDF
比较羊水细胞原位培养法和胰酶消化法在产前诊断染色体检查中的应用价值 被引量:1
3
作者 候舒文 陈薇 +2 位作者 严雅兰 刘慧 袁静 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第5期526-530,共5页
目的比较载玻片-原位培养法(以下简称原位法)和胰酶消化法在羊水细胞染色体检查中的应用价值。方法选取2020年7—12月来该院进行产前诊断的1105例孕妇的羊水标本,分别采用原位法和胰酶消化法进行培养、收获及制片,成功制片后用GSL-120... 目的比较载玻片-原位培养法(以下简称原位法)和胰酶消化法在羊水细胞染色体检查中的应用价值。方法选取2020年7—12月来该院进行产前诊断的1105例孕妇的羊水标本,分别采用原位法和胰酶消化法进行培养、收获及制片,成功制片后用GSL-120扫描、捕获核型,对两种方法的羊水细胞培养成功率、培养时间、分裂相、核型结果等进行比较分析。结果1105例羊水标本同时采用原位法、胰酶消化法两种方法进行培养,这两种方法的培养成功率的差异无统计学意义(χ^(2)=0.33,P>0.05)。原位法和胰酶消化法羊水需求量分别为5、10 mL,培养基用量分别为7、8 mL。与胰酶消化法相比,原位法羊水细胞培养时间短,分裂相及优质分裂相数目多,差异均有统计学意义(Z=-31.83,P<0.001;Z=-2.937,P=0.003;Z=-2.943,P=0.003)。两种方法的羊水染色体核型分析均检出972例正常核型、128例异常核型,其中染色体数目异常真嵌合7例,染色体核型结果符合率为100%。结论与胰酶消化法相比,原位法具有培养时间短、培养基用量少、羊水需求量少、操作步骤简单、优质分裂相多,以及可以有效诊断真假嵌合等优点,但胰酶消化法相较于原位法具有制片可重复性相对较高且耗材相对经济的优势,结合原位法和胰酶消化法的优缺点,羊水细胞培养可以采用原位法为主、胰酶消化法为辅的培养模式,提高产前诊断的效率、准确率与成功率。 展开更多
关键词 羊水细胞 染色体 原位培养法 胰酶消化法 产前诊断
下载PDF
不同pH值消化液对ST细胞分散作用的影响
4
作者 范珞菲 《福建畜牧兽医》 2023年第1期9-11,共3页
本试验采用不同pH值胰蛋白酶消化液分别消化转瓶ST细胞,并观察记录ST细胞消化时间、分散效果、瓶壁残留情况、细胞计数、细胞粒径以及细胞再次贴壁生长状态,获得转瓶培养ST细胞的胰蛋白酶消化液最佳pH值,为ST细胞在转瓶传代培养过程中... 本试验采用不同pH值胰蛋白酶消化液分别消化转瓶ST细胞,并观察记录ST细胞消化时间、分散效果、瓶壁残留情况、细胞计数、细胞粒径以及细胞再次贴壁生长状态,获得转瓶培养ST细胞的胰蛋白酶消化液最佳pH值,为ST细胞在转瓶传代培养过程中出现的细胞不脱壁、团块大的问题提供数据支持。 展开更多
关键词 胰蛋白酶消化液 PH值 ST细胞 细胞培养
下载PDF
胰蛋白酶消化法和组织块法原代培养人包皮成纤维细胞的比较 被引量:21
5
作者 王志强 梁锐 +5 位作者 陈明清 邓俊 李文亮 陈天星 文政琦 杨军 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期242-247,共6页
小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成... 小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成纤维细胞(hFFs),探索hFFs原代培养的最佳方法,为hFFs作为饲养层在hESCs研究中的应用提供可靠的科学依据;通过倒置显微镜下观察其生长状态和免疫细胞化学染色鉴定,结果显示两种原代培养方法获得的hFFs的形态及生物学特性均符合成纤维细胞;通过测定细胞生长曲线及MTT法检测,结果显示两种原代培养方法获得的不同代数的hFFs均具有较高的增殖活性,传代10余代仍能保持较好的细胞形态,可以制备成饲养层用于hESCs的研究. 展开更多
关键词 人包皮成纤维细胞 原代培养 胰蛋白酶消化法 组织块法 饲养层 人胚胎干细胞
下载PDF
视网膜血管铺片技术的改进及在糖尿病视网膜病研究中的运用 被引量:5
6
作者 哈文静 严宏 +1 位作者 张伟 朱少君 《国际眼科杂志》 CAS 2005年第6期1139-1141,共3页
目的:改进视网膜血管铺片的制备方法,并用于糖尿病视网膜病的研究。方法:分别用胰蛋白酶消化法及胃蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法制备视网膜血管铺片,比较铺片成功率。一次性腹腔注射STZ诱导糖尿病大鼠模型,成模13wk时以胃蛋白酶-胰蛋白酶... 目的:改进视网膜血管铺片的制备方法,并用于糖尿病视网膜病的研究。方法:分别用胰蛋白酶消化法及胃蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法制备视网膜血管铺片,比较铺片成功率。一次性腹腔注射STZ诱导糖尿病大鼠模型,成模13wk时以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法制备视网膜血管铺片,行HE染色观察血管形态改变,免疫组织化学染色方法观察RAGE、ICAM-1的表达。结果:胃蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法较胰蛋白酶消化组铺片成功率高(80%vs53.3%,P<0.05),能显示清晰、完整的视网膜血管网。糖尿病大鼠视网膜无细胞毛细血管较正常大鼠增加2.67倍,毛细血管RAGE及ICAM-1免疫活性分别上调1.26倍,1.43倍(P<0.001)。结论:胃蛋白酶—胰蛋白酶联合消化法是一种稳定的重复性好的视网膜血管铺片技术,可用于糖尿病视网膜病变的研究。 展开更多
关键词 视网膜血管铺片 糖尿病视网膜病 胰蛋白酶消化 胃蛋白酶-胰蛋白酶消化
下载PDF
家猪体外胰蛋白酶消化关节软骨的7.0T磁共振T2弛豫时间图与量化分析 被引量:4
7
作者 周智洋 单鸿 +6 位作者 邹学农 Steffen Ringgaard 邹立津 李海声 谢学斌 Hans StФdkilde-JФrgensen Cody Bünger 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2009年第3期355-358,共4页
目的应用超高场7.0T磁共振T2加权成像技术、弛豫时间图和量化分析的方法评价体外胰蛋白酶消化与未消化家猪髌骨软骨T2弛豫时间的改变。方法选择10头家猪,各取左、右侧髌骨。左侧髌骨10个为实验组,右侧髌骨10个为对照组,分别浸泡于含有... 目的应用超高场7.0T磁共振T2加权成像技术、弛豫时间图和量化分析的方法评价体外胰蛋白酶消化与未消化家猪髌骨软骨T2弛豫时间的改变。方法选择10头家猪,各取左、右侧髌骨。左侧髌骨10个为实验组,右侧髌骨10个为对照组,分别浸泡于含有胰蛋白酶的PBS溶液及PBS中,4h后取出。利用7.0T磁共振机,分别采用多回波SE序列进行扫描,获得离体家猪髌骨关节软骨的T2加权图像。用自行编制的软件重构T2弛豫时间图,人工标注感兴趣区,分层定量测定关节软骨的T2值。结果经酶诱导消化的离体家猪髌骨关节软骨T2W成像清晰,呈分层状表现,对比度好,无异常伪影。对照组与实验组关节软骨T2WI关节软骨未见局部信号异常改变。与对照组比较,实验组软骨全层、表层、中间层T2值差异有统计学意义(P<0.05),而两者的深层与钙化层差异无统计学意义(P>0.05)。结论经胰蛋白酶诱导消化可引起退变软骨T2弛豫时间改变,在软骨的表层及中间层变化明显,提示T2弛豫时间是较敏感、特异的检测指标,可进一步应用于关节软骨退变的早期诊断。 展开更多
关键词 磁共振成像 胰蛋白酶 消化 软骨 关节
下载PDF
神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤 被引量:17
8
作者 曲艺 孙正巍 +1 位作者 杨东波 蒋传路 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第10期1876-1883,共8页
背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展。方法:以"neural stem cells,stem cell transplan... 背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展。方法:以"neural stem cells,stem cell transplantation,ischemic brain injury"为检索词,检索Pubmed数据库1990至2012年相关文献;以"神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤"为检索词,检索CNKI数据库2005至2012年相关文献。分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究。结果与结论:①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离。②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等。③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等。正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等。④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活。神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高。缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞综述 神经干细胞 干细胞移植 缺血性脑损伤 细胞培养 机械分离法 胰酶消化法 巢蛋白 波形蛋白1 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 神经元特异性烯醇化酶 脑内移植 立体定向移植
下载PDF
组织块结合酶消化法培养婴幼儿血管瘤内皮细胞 被引量:3
9
作者 廖洪跃 邢新 +5 位作者 欧阳天祥 郭伶俐 李军辉 薛春雨 袁斯明 李鸣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期147-150,共4页
目的:探讨血管瘤内皮细胞体外培养的方法并观察其生物学特性。方法:收集新鲜手术切除的婴幼儿血管瘤标本,采用组织块结合酶消化法培养内皮细胞,免疫组化EnVision法对培养的细胞进行鉴定;流式细胞仪FITC-CD34检测内皮细胞纯度;相差显微... 目的:探讨血管瘤内皮细胞体外培养的方法并观察其生物学特性。方法:收集新鲜手术切除的婴幼儿血管瘤标本,采用组织块结合酶消化法培养内皮细胞,免疫组化EnVision法对培养的细胞进行鉴定;流式细胞仪FITC-CD34检测内皮细胞纯度;相差显微镜下观察血管瘤内皮细胞的生物学特性。结果:共收集血管瘤标本14例,有8例成功培养出内皮细胞,内皮细胞呈现两种形态:多角形和梭形,经免疫组化鉴定为内皮细胞;培养的细胞中CD34+细胞数为76.28%;血管瘤内皮细胞有明显的"管腔形成"。结论:组织块结合酶消化法能成功培养较纯的婴幼儿血管瘤内皮细胞,培养的内皮细胞具有某些生物学特性。 展开更多
关键词 血管瘤 婴幼儿 内皮细胞 细胞培养 组织块结合酶消化法
下载PDF
小鼠胃内消化对胰蛋白酶抑制剂活性影响的初步研究 被引量:4
10
作者 关萍 于业辉 +2 位作者 王惠 张梅 张立军 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期149-152,共4页
为探讨不同剂量胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)在高等动物胃内消化作用下,活性的保持程度和对消化系统中胰蛋白酶(trypsin,TP)活性及分泌的影响,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定十二指肠内容物及肠腺和胰腺中TP活性。结果显示,... 为探讨不同剂量胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,TI)在高等动物胃内消化作用下,活性的保持程度和对消化系统中胰蛋白酶(trypsin,TP)活性及分泌的影响,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定十二指肠内容物及肠腺和胰腺中TP活性。结果显示,3个剂量TI均造成小鼠体重增长显著下降(P<0.05);十二指肠内容物及肠腺中TP活性随TI剂量增加而降低并呈正相关性,低剂量TI组为显著降低(P<0.05),中、高剂量TI组均为极显著降低(P<0.01);胰腺TP活性在不同剂量TI作用下发生变化但不呈正相关性,低剂量TI组极显著降低(P<0.01),中剂量TI组极显著升高(P<0.01)而高剂量TI组显著升高(P<0.05)。本试验所设置的3个剂量TI在高等动物胃内消化作用下,没有被完全分解,保持了一定的活性并对试验动物的消化能力产生了负面影响。 展开更多
关键词 胰蛋白酶抑制剂 胃内消化 胰蛋白酶 小鼠
下载PDF
胰酶消化法纯化诱导不同年龄段SD大鼠骨髓破骨细胞的体外培养 被引量:2
11
作者 董强 梁星 +5 位作者 陈悦 徐凌 张庆鸿 夏露 陈明 付俊 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期350-352,361,共4页
目的用胰酶消化法纯化获取大量高纯度破骨细胞,为进行相关分子生物学研究奠定基础。方法以1,25-(OH)2D3/地塞米松诱导培养不同年龄段(1、12、24、36d)SD大鼠的骨髓破骨细胞,采用0.25%胰蛋白酶/0.02%乙二胺四乙酸纯化。通过倒置相差显微... 目的用胰酶消化法纯化获取大量高纯度破骨细胞,为进行相关分子生物学研究奠定基础。方法以1,25-(OH)2D3/地塞米松诱导培养不同年龄段(1、12、24、36d)SD大鼠的骨髓破骨细胞,采用0.25%胰蛋白酶/0.02%乙二胺四乙酸纯化。通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色和扫描电镜观察鉴定破骨细胞,并计数分析。结果1、12、24、36d组大鼠骨髓破骨细胞均培养成功,经Trap染色和扫描电镜观察证实为体外有噬骨能力的破骨细胞,纯化率达到90%。1d和12d组破骨细胞出现较早且数量较多,细胞计数两组间无统计学差异(P>0.05),但它们与其余各组均有统计学差异(P<0.05)。结论采用胰酶消化法纯化1,25-(OH)2D3/地塞米松诱导培养的大鼠骨髓破骨细胞,纯度较高;选用大鼠以10—12d龄较为适宜。 展开更多
关键词 风口破骨细胞 胰酶消化 培养 纯化
下载PDF
肽图分析在重组人甲状旁腺素1-34产品质量控制中的应用 被引量:4
12
作者 曾文珊 廖海明 +1 位作者 杨仲元 徐康森 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第13期1020-1022,共3页
目的通过肽图谱分析,鉴定重组人甲状旁腺素1-34产品一级结构的完整性和准确性。方法采用胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法测定肽图;用LC-MS/MS和N端氨基酸测序鉴定产品氨基酸序列。结果建立重组人甲状旁腺素1-34产品肽图测定法,并鉴定... 目的通过肽图谱分析,鉴定重组人甲状旁腺素1-34产品一级结构的完整性和准确性。方法采用胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法测定肽图;用LC-MS/MS和N端氨基酸测序鉴定产品氨基酸序列。结果建立重组人甲状旁腺素1-34产品肽图测定法,并鉴定出肽图异常产品的氨基酸序列。结论肽图分析能有效地控制重组人甲状旁腺素1-34产品一级结构的完整性和准确性,对该产品的质量控制具有重要意义。 展开更多
关键词 肽图谱分析 重组人甲状旁腺素1-34 胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法 液相色谱-质谱联用 氨基酸序列
下载PDF
人类髓核细胞分离培养方法的优化选择 被引量:3
13
作者 张子言 佟珅 +2 位作者 颜华东 姜睿 武汉 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5151-5156,共6页
背景:关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法:髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人... 背景:关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法:髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人椎间盘3例。无菌条件下取突出至椎管内的急性创伤后椎间盘组织,可见到外周白色的纤维环和中心胶冻样的髓核组织。按不同混合酶组分划分为2组,Ⅰ组成分为0.2%Ⅱ型胶原酶;Ⅱ组成分为先用0.25%胰酶消化30min,再用0.2%Ⅱ型胶原酶。每组再按消化时间分为2,4h,过夜3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位2mL并计数,采用含胎牛血清的DMEM培养液体外培养细胞。观察不同组分酶对分离所得髓核细胞数量、活性及增殖能力的影响,采用锥虫蓝染色计数细胞总数及活细胞比值,MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果与结论:采用2种不同酶组分进行消化,发现消化时间2,4h时,Ⅱ组消化细胞较Ⅰ组多,但差异无显著性意义(P>0.05)。孵育过夜时,Ⅰ组和Ⅱ组的存活细胞率较消化2,4h明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。在作用4h时,组织块消失,计数细胞数量最多。提示以Ⅱ型胶原酶为主要成分的Ⅰ组对分离髓核细胞有利,消化时间以4h为宜,该条件具有操作简单,效率较高,成本较低等优点,可以认为0.2%Ⅱ型胶原酶消化髓核组织块4h为获取髓核细胞的最佳条件。 展开更多
关键词 组织构建 软骨组织构建 髓核细胞 人类 Ⅱ型胶原酶 胰酶 消化 分离培养 MTT 国家自然科学基金
下载PDF
Fe_3O_4磁性纳米粒子固定化胰蛋白酶 被引量:8
14
作者 阮贵华 刘玉花 +2 位作者 陈正毅 李海云 杜甫佑 《桂林理工大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期569-574,共6页
以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ(戊二醛)=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可... 以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ(戊二醛)=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可达50.5%,且保持77.3%相同含量酶的活性。对牛血清蛋白的酶解实验表明,在微波辅助作用下,磁性微球材料固定化酶可快速高效地酶解牛血清蛋白,酶解液在λ=280 nm处有较明显的吸收信号变化,HPLC分析表明酶解液中多肽片段吸收值变化明显,同时有新的多肽片段生成。 展开更多
关键词 磁性微球 固定化酶 微波辅助酶解 胰蛋白酶
下载PDF
超高效液相色谱-串联质谱法测定牛源性酪蛋白方法中酶解条件的优化及酶解性能的评价 被引量:6
15
作者 孙姗姗 李婷婷 +3 位作者 陈启 罗娇依 李刚 曹进 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1157-1163,共7页
为提高质谱法测定蛋白质的准确性,对酶解条件的优化和选择并建立最佳条件,以期提高回收率。设计了7种酶解方法进行了比较,并引入豆浆作为阴性基质。其中直接酶解法被选为最佳方法,其操作操作过程如下:取1g豆浆粉溶于10mL的50mmol·L... 为提高质谱法测定蛋白质的准确性,对酶解条件的优化和选择并建立最佳条件,以期提高回收率。设计了7种酶解方法进行了比较,并引入豆浆作为阴性基质。其中直接酶解法被选为最佳方法,其操作操作过程如下:取1g豆浆粉溶于10mL的50mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中制成豆浆提取液,取200nmol·L^-1β-酪蛋白溶液200μL,加入豆浆提取液300μL,再加10μg质谱级胰蛋白酶,混匀后于37℃恒温酶解16h,加入10%(体积分数)甲酸溶液10μL,终止反应,加水定容至1.0mL,高速离心10min,取上清液进样,按仪器工作条件测定VLPVPQK特征肽段的峰面积。此方法的平均酶解效率为106%,相对标准偏差(n=5)为5.1%。方法中选择酶的加入量w酶与β-酪蛋白量wβ-酪蛋白量之比为1∶20。在方法的优化过程中不建议进行还原和烷基化步骤。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 酪蛋白 特征肽段 胰蛋白酶 酶解效率
下载PDF
基于生物信息学和质谱技术的阿胶特异性肽段筛选与鉴定 被引量:8
16
作者 王芳 范雨 +4 位作者 叶茂 曹秀君 童芯锌 彭成 国锦琳 《中国现代中药》 CAS 2019年第9期1256-1261,1266,共7页
目的:建立基于生物信息技术和液质联用技术识别特征肽鉴别阿胶的新方法。方法:利用生物信息技术对驴皮、牛皮和猪皮I型胶原蛋白α1链氨基酸序列进行同源性比对发现3种皮类胶原蛋白氨基酸序列存在差异,通过生物学软件模拟胰酶酶解,分析... 目的:建立基于生物信息技术和液质联用技术识别特征肽鉴别阿胶的新方法。方法:利用生物信息技术对驴皮、牛皮和猪皮I型胶原蛋白α1链氨基酸序列进行同源性比对发现3种皮类胶原蛋白氨基酸序列存在差异,通过生物学软件模拟胰酶酶解,分析比对驴皮、牛皮、猪皮来源I型胶原蛋白α1链酶解肽段,然后通过实验对样品前处理条件进行系统摸索,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)进行验证。结果:筛选出12个驴皮的特异性肽段,鉴定出1个与预测结果一致的驴皮特异性肽段,其质荷比(m/z)为766.4,分子量为1 530.802 2,对应的多肽序列为GEAGPAGPAGPIGPVGAR,利用特征肽段对10组阿胶样品进行鉴定。结论:生物信息技术结合UPLC/Q-TOF-MS检测出的驴皮特征肽可有效、特异、准确地对阿胶药材进行专属性鉴定。 展开更多
关键词 阿胶鉴定 胰酶 特异肽段 生物信息学 超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱
下载PDF
长时间甲醛固定的大鼠视网膜组织胰蛋白酶消化方法探讨 被引量:4
17
作者 李琳 李彦林 +7 位作者 周云丰 王丽丽 李志强 葛争艳 郭宇洁 金龙 任烨 许扬 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1704-1708,共5页
目的探讨长期甲醛固定的大鼠视网膜胰蛋白酶消化的最佳消化时间和最佳胰蛋白酶浓度。方法健康♂ SD大鼠,颈椎脱臼处死,摘取眼球,放入4%甲醛固定液,固定时间为2 d、2周、4周、3月、5月、7月。分离固定不同时间的视网膜,放入3%、6... 目的探讨长期甲醛固定的大鼠视网膜胰蛋白酶消化的最佳消化时间和最佳胰蛋白酶浓度。方法健康♂ SD大鼠,颈椎脱臼处死,摘取眼球,放入4%甲醛固定液,固定时间为2 d、2周、4周、3月、5月、7月。分离固定不同时间的视网膜,放入3%、6%、9%胰蛋白酶消化,37℃恒温箱孵育。分别记录固定不同时间的视网膜在3%、6%、9%胰蛋白酶中消化完全所需时间。铺片操作,行 PAS 染色。显微镜下记录视网膜消化情况。结果新鲜眼球常规固定48 h,3%胰蛋白酶37℃消化3.5 h,视网膜消化完全。对于甲醛固定2周及1月的大鼠眼球,采用常规胰蛋白酶浓度(3%),仅延长胰蛋白酶的消化时间至9 h 及14 h,可以达到常规固定组织的消化效果。对于固定3月的大鼠眼球,采用常规浓度的胰蛋白酶仅延长消化时间至22 h,同样可以得到完整的视网膜血管铺片,且提高胰蛋白酶浓度对于缩短视网膜消化时间的影响不大。而对于固定5~7月的大鼠眼球,6%和9%浓度的胰蛋白酶可以在一定程度上缩短视网膜消化的时间至22 h 和28 h,有利于得到相对完整的视网膜血管。结论固定时间短于3月的眼球组织,采用3%胰蛋白酶消化,延长消化时间可达到最佳消化效果。对于固定5~7月的视网膜组织,不仅需要延长消化时间,还需要通过提高胰蛋白酶浓度至6%,才可以获得最佳消化效果的视网膜血管。 展开更多
关键词 视网膜消化 视网膜血管 固定时间 胰蛋白酶 浓度 消化时间
下载PDF
完整视网膜毛细血管网消化铺片技术及细胞计数方法的改进 被引量:2
18
作者 赵红姝 王宁利 +1 位作者 史翔宇 魏文斌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期331-333,共3页
背景 以往视网膜血管消化铺片法仅能够获得部分视网膜血管,无法客观评价全视网膜血管的病理改变,因此进一步获得完整的视网膜血管网是相关疾病实验研究和临床研究的基础. 目的 在国外对全视网膜血管消化铺片技术的基础上进行改良,建立... 背景 以往视网膜血管消化铺片法仅能够获得部分视网膜血管,无法客观评价全视网膜血管的病理改变,因此进一步获得完整的视网膜血管网是相关疾病实验研究和临床研究的基础. 目的 在国外对全视网膜血管消化铺片技术的基础上进行改良,建立全视网膜血管的铺片方法. 方法 30只健康Wistar 大鼠随机数字表法分为模型组和对照组,模型组20只大鼠用溶于0.05 mmol/L柠檬酸缓冲液的质量分数1.25%链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射法制作糖尿病模型,对照组10只大鼠以同样的方法注射等容量柠檬酸缓冲液.注射后8个月经左心室注射PBS 100 ml,剪开右心房使血液及PBS流出后注射质量分数4%多聚甲醛100 ml,摘除眼球,将完整剥离的大鼠视网膜先进行胰蛋白酶消化,然后剥离玻璃体及内界膜,去除视网膜神经组织,得到完整的视网膜毛细血管网,平铺于载玻片上,将视网膜毛细血管网以视盘为中心划为内、中、外3个区域,采用盲法在光学显微镜下判定和计数中间区域影周细胞及无细胞血管. 结果 视网膜铺片显示,大鼠的视网膜血管为全血管型,可见放射状的视网膜中央动脉与视网膜中央静脉主干及逐级分支结构、小动脉与小静脉之间表浅层和深层的毛细血管网.周细胞略突出于血管管壁,在其形成影周细胞时,原有的细胞核缺失.无细胞血管的管径为邻近毛细血管管径的20%以上,并且在整个血管上无细胞核和影周细胞.结论 全视网膜消化铺片技术能够提供实验所需的完整视网膜毛细血管网,配合细胞计数方法,能够较好地评价视网膜的形态改变,并为视网膜血管和管壁细胞的定量分析提供有利条件. 展开更多
关键词 视网膜 胰蛋白酶消化法 视网膜血管 细胞学
下载PDF
新生血管性青光眼的临床和病理观察 被引量:7
19
作者 张惠蓉 王 薇 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2002年第4期319-322,共4页
目的 观察视网膜静脉阻塞所致新生血管性青光眼(NVG)的危险因素、视力预后和病理改变。方法(1)观察视网膜静脉阻塞429例445眼,其中总干阻塞369例385眼;半侧阻塞60例60眼。分析新生血管性青光眼的发病率、危险因素和视力预后。(2)... 目的 观察视网膜静脉阻塞所致新生血管性青光眼(NVG)的危险因素、视力预后和病理改变。方法(1)观察视网膜静脉阻塞429例445眼,其中总干阻塞369例385眼;半侧阻塞60例60眼。分析新生血管性青光眼的发病率、危险因素和视力预后。(2)视网膜消化铺片和病理切片光镜观察。结果445眼中36眼产生了 NVG,占8.09%;总于阻塞为9.09%,半侧阻塞为1.7%。产生NVG者均为缺血型。发生 NVG的危险因素有:(1)初诊视力低于0.1,眼底出血多。(2)高血压、冠心病、心动过缓者;血液流变性异常者;其中两项以上异常者22例占68.8%。(3)有原发性青光眼者,视网膜动脉硬化、视网膜动脉很细者。4例双眼发病者均有3项以上指标异常。追踪视力为无光感至数指者24眼,占66.7%;0.02~0.05者9眼,占25.0%,0.1~0.4者3眼,占8.3%。致盲率91.7%。消化铺片发现视网膜毛细血管内皮细胞增生形成实心细胞团及多量新生血管芽和形成管腔的新生血管。病理切片发现视盘有青光眼凹陷,静脉血栓形成,视网膜下蛋白液等。结论 初诊视力低下、缺血型视网膜静脉阻塞、原发性青光眼、高血压、动脉硬化、血黏度增高是视网膜静脉阻塞产生NVG的危险因素。NVG视力预后差,致盲率高。 展开更多
关键词 新生血管性青光眼 视网膜静脉阻塞 危险因素 预后 消化铺片 NVG
下载PDF
翻转消化法和灌注消化法分离培养兔耳缘静脉内皮细胞的比较 被引量:2
20
作者 陈娟 王廷华 +4 位作者 黄桂琴 易伟斌 徐岩泽 罗哲文 胡竹林 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期501-503,521,共4页
目的比较翻转消化法和灌注消化法对培养血管内皮细胞生长的影响,以探讨培养血管内皮细胞的最佳方法。方法采用胰蛋白酶用翻转消化和灌注消化分别获取和培养兔耳缘静脉内皮细胞,并记录各组细胞生长情况,取第3代细胞用第Ⅷ因子相关抗原抗... 目的比较翻转消化法和灌注消化法对培养血管内皮细胞生长的影响,以探讨培养血管内皮细胞的最佳方法。方法采用胰蛋白酶用翻转消化和灌注消化分别获取和培养兔耳缘静脉内皮细胞,并记录各组细胞生长情况,取第3代细胞用第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定所获得的细胞。结果两种消化方法首次获得的血管内皮细胞数量差别不大,但培养5d、10d后,灌注法组的细胞生长情况要明显优于翻转法组的细胞(P<0.01)。免疫组织化学检测细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原呈阳性。结论采用胰蛋白酶灌注法获取的内皮细胞生长情况要比翻转法获取的细胞好。 展开更多
关键词 耳缘静脉 血管内皮细胞 台盼蓝 翻转消化法 灌注消化法
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部