长链非编码RNA TUG1和UCA1在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探究长链非编码RNA TUG1和UCA1在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取2018年5月—2020年5月收治的80例结肠癌患者为研究对象,利用原位杂交与qRT-PCR法检测TUG1和UCA1的表达,对表达情况和患者病理特征及预后进行研究。结果UCA1和TUG1在结直肠癌组织表达过程中与性别、年龄以及病理情况关系较小(P>0.05),和患者肿瘤大小、是否存在淋巴结转移、疾病的分化情况以及分期情况高度相关(P<0.05)。UCA1和TUG1高表达患者肿瘤更大,淋巴结存在转移情况,分化程度较高且TNM分期以Ⅰ/Ⅱ为主;80例患者进行随访36个月,中位生存时间33.75个月,死亡人数16例,术后总生存率80.00%(64/80);Kaplan-Meier生存分析显示UCA1和TUG1高表达死亡12例,生存38例,生存率76.00%(38/50);UCA1和TUG1低表达死亡4例,生存26例,生存率86.66%(26/30)。结论直肠癌组织中lncRNA TUG1和UCA1高表达与低表达对患者疾病预后有一定影响。

丹蛭降糖胶囊通过LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护线粒体功能减轻血管钙化的机制

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化是血管钙化(vascular calcification,VC)细胞学基础。线粒体功能障碍在VSMCs成骨样转化中起重要作用。本研究旨在探讨丹蛭降糖胶囊(Danzhi Jiangtang capsules,DJC)通过调节LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护VSMCs线粒体功能减轻血管钙化的机制。方法使用β-甘油磷酸盐来诱导血管平滑肌细胞的钙化模型,并采用维生素D 3+高脂饲料来诱导糖尿病大鼠的血管钙化模型。Von Kossa染色检测细胞和血管组织钙化;用邻甲酚酞络合物比色法测定钙含量;采用对硝基苯磷酸盐比色法测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;采用RT-qPCR分析VSMCs成骨样转化相关基因骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein2,BMP2)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha,ɑ-SMA)及长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long noncoding RNA taurine up-regulated1,LncRNA TUG1)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Western blot分析BMP2、ɑ-SMA及β-catenin的蛋白表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体结构。结果DJC降低β-甘油磷酸盐诱导的VSMCs中LncRNA TUG1的表达,下调β-catenin的表达,降低ALP活性和钙沉积,保护线粒体功能,恢复膜电位,减少VSMCs成骨样转化。重要的是,DJC通过下调糖尿病下肢血管组织LncRNA TUG1、β-catenin的表达,上调ɑ-SMA的表达来减轻糖尿病下肢VC。结论DJC对糖尿病下肢VC有明显的改善作用,机制是通过LncRNA TUG1/β-catenin信号保护线粒体功能减少VSMCs成骨细胞转化。

沉默lncRNA TUG1上调miR-139-5p表达增强肺癌A549细胞放射敏感性分析

目的探讨沉默lncRNA TUG1通过上调miR-139-5p表达增强肺癌A549细胞放射敏感性的效果。方法设A549肺癌细胞组、放疗(IR)组、lncRNA TUG1低表达(inhibitor)组、IR+lncRNA TUG1 inhibitor组。各组细胞培养结束后,采用MTT法测定细胞活力,甲基紫染色测定单克隆形成数目,流式细胞仪测定凋亡水平,Millipore Transwell小室测定侵袭水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定各组细胞lncRNA TUG1、miR-139-5p、SMC1A mRNA和蛋白水平。结果与A549肺癌细胞组比较,IR组、lncRNA TUG1 inhibitor组、IR+lncRNA TUG1 inhibitor组OD值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、lncRNA TUG1 mRNA表达水平、SMC1A mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),凋亡率、miR-139-5p mRNA表达水平升高(P<0.05)。与IR组、lncRNA TUG1 inhibitor组比较,IR+lncRNA TUG1 inhibitor组OD值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、lncRNA TUG1 mRNA表达水平、SMC1A mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),凋亡率、miR-139-5p mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论沉默lncRNA TUG1能明显抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭,促进A549细胞凋亡,增加A549细胞放射敏感性;这一效果可能与TUG1的敲低可以促进A549肺癌细胞高表达miR-139-5p进而抑制SMC1A的表达有关。

长链非编码RNA-TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制。方法收集2018年10月—2020年9月于上海健康医学院附属嘉定区中心医院普外科行胃癌根治术的60例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织标本。选取其中3例存在淋巴结转移的患者组织样本进行lncRNA芯片检测,筛查胃癌和癌旁组织样本中的差异表达lncRNA。采用qRT-PCR技术检测TUG1基因在胃癌组织和细胞中的表达水平,分析其表达水平与临床及病理因素之间的关系。采用慢病毒Lenti-TUG1、Lenti-TUG1-shRNA转染胃癌细胞NCI-N87和MGC-803。根据慢病毒转染分为Lenti-TUG1处理组与Lenti-TUG1-shRNA处理组,设计不加慢病毒的细胞为对照组。采用细胞增殖实验和动物模型实验检测TUG1基因在体外和体内对NCI-N87和MGC-803生长的影响;采用细胞迁移和侵袭实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞迁移和侵袭的影响;采用细胞凋亡实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞凋亡的影响;采用蛋白质印迹法检测TUG1基因对凋亡及上皮间质转化(EMT)相关蛋白质表达的影响。结果lncRNA芯片检测结果显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中有11种lncRNAs表达上调,有7种lncRNAs表达下调。根据患者胃癌组织中TUG1的中位相对表达量,将胃癌患者分为高表达组(30例)和低表达组(30例)。TUG1高表达组肿瘤体积≥5 cm^(3)、有淋巴结转移、有远处转移、TNM分期为Ⅲ期的患者构成均显著高于TUG1低表达组(P值均<0.05)。细胞增殖实验结果显示,与对照组比较,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的光密度(A)值均显著增高,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的A值均显著降低(P值均<0.01)。细胞迁移和侵袭实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著增多,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著减少(P值均<0.01)。细胞凋亡实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著降低,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著增高(P值均<0.01)。小动物活体成像仪检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组的NCI-N87细胞和MGC-803细胞的相对荧光强度均显著增高(P值均<0.01),Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞相对荧光强度均显著降低(P值均<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin的蛋白质相对表达量均显著降低,RAB2A、MMP-14和Bcl-2的蛋白质相对表达量均显著增高;Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin蛋白质相对表达量均显著增高,RAB2A、MMP-14和Bcl-2蛋白质相对表达量均显著降低(P值均<0.01)。在229例胃癌组织中,TUG1与RAB2A相对表达量呈正相关(r=0.180,P=0.006);miR-186与RAB2A相对表达量呈负相关(r=-0.147,P=0.026)。结论TUG1可能通过调控凋亡、EMT相关信号通路参与胃癌的发生、发展,针对TUG1的靶向治疗设计可能为胃癌治疗提供新的思路。

非编码RNA TUG1通过调控P38 MAPK信号通路影响膀胱癌的体外转移活性

目的探究长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long non-coding RNA taurine-upregulated gene 1,lnc TUG1)对膀胱癌细胞转移活性的影响以及相关机制。方法收集保定市第二医院治疗的膀胱尿路上皮癌患者的组织样本,通过实时荧光定量PCR检测lnc TUG1和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinases,P38 MAPK)的表达水平。将人膀胱癌细胞系5637细胞分为3组:si NC组、si TUG1和si P38组。将si NC、si TUG1和si P38质粒转染至对应的实验组,并通过细胞集落形成实验、Transwell实验、流式细胞术和蛋白质印迹实验检测细胞的生长能力、侵袭能力、凋亡率以及P38 MAPK的表达水平。结果与癌旁组织比较,癌组织lnc TUG1表达水平增加,而P38 MAPK的表达水平降低。与si NC组比较,si TUG1组膀胱癌细胞的集落形成数量、侵袭数量显著降低、凋亡率显著升高;而si P38组膀胱癌细胞的集落形成数量、侵袭显著增加、凋亡率显著降低。与si NC组比较,si TUG1组膀胱癌细胞的P38 MAPK蛋白表达明显上调。结论抑制非编码RNA TUG1表达能够抑制膀胱癌细胞的集落形成能力和侵袭能力,并能促进膀胱癌细胞凋亡。此外,非编码RNA TUG1对膀胱癌细胞的这一作用与抑制P38 MAPK有关。

基于lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路探讨肾炎止血丸治疗IgA肾病的作用机制

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对lncRNA TUG1介导miR-320-5p调控PTEN/Cosmc通路的影响。方法:采用“牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖”联用法构建IgAN大鼠模型,32只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸组[3.6 g/(kg·d)],每组8只,均连续给药6周。留取血液、肠黏膜及肾组织标本,分别应用ELISA法检测血清磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、核心1β1,3半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosmc)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)水平;采用Real-time PCR、Western blot检测肠黏膜组织、肾脏组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA及蛋白表达。结果:①血清PTEN、Cosmc、Gd-IgA1:与模型组比较,各给药组PTEN、Cosmc升高明显(均P<0.01)、Gd-IgA1减少明显(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN、Cosmc升高及Gd-IgA1减少明显(均P<0.01)。②RT-PCR法检测肠黏膜组织、肾组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA表达:与模型组比较,氯沙坦钾片组肠黏膜组织及肾组织TUG1升高明显(均P<0.01),miR-320减少明显(P<0.01);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肠黏膜组织及肾组织TUG1、PTEN升高明显,肠黏膜组织Cosmc升高明显(均P<0.01),肾组织miR-320减少明显(P<0.01)。③Western blot检测肠黏膜组织、肾组织PTEN、Cosmc蛋白表达:与模型组比较,各给药组肠黏膜组织PTEN蛋白表达升高(P<0.05),肾炎止血丸组Cosmc表达升高明显(P<0.05);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高无显著差异(P>0.05)。各给药组肾组织Cosmc表达升高有极显著差异(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肾组织PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高有极显著性差异(P<0.01)。结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠肾损伤;其作用机制可能与参与lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路有关。

lncRNA TUG1在IgA肾病患者血清中的表达分析及生物信息学预测

目的:明确lncRNA TUG1在IgAN中差异表达,并预测lncRNA TUG1下游参与IgAN的调控网络。方法:选取2021年9月—2021年12月黑龙江省中医药科学院门诊及住院IgAN患者10例作为试验组,同期健康体检者10例为对照组,清晨抽取受试者空腹静脉血,qRT-PCR法对外周血清lncRNA TUG1进行检测。通过GEO数据库获得IgAN符合要求的miRNA表达数据库GSE25590和mRNA表达数据库GSE73953。利用GEO2R在线分析工具寻找差异表达基因,利用NPlnter V4.0、StarBase V2.0数据库收集TUG1可能结合的下游的miRNA、mRNA靶点。将GSE25590数据集获取的差异表达miRNA与TUG1结合的下游的miRNA靶点进行合并处理,找到共同差异表达miRNAs(DEmiRs),进一步利用miRDB数据进行可能结合的下游的mRNA的预测。再将GSE73953数据集获取的差异表达mRNA、TUG1可能结合的下游的mRNA及GSE25590数据集与TUG1下游共表达miRNA获得mRNA等3组数据集进行合并取交集。最终获得共同差异表达基因(DEGs)。应用DAVID数据库对筛选DEGs进行GO和KEGG分析,最终选取排名前20的GO分析与KEGG通路,OmicShare平台绘制气泡图,Cytoscape 3.6.0软件构建TUG1-DEmiRs-DEGs-KEGG通路多维网络图。结果:(1)与健康对照组相比,IgAN患者外周血样本中lncRNA TUG1极显著低表达(P<0.01);(2)获得TUG1下游结合的221个DEmiRs,GSE25590数据集获取182个DEmiRs,交叉合并获得15个DEmiRs;(3)获取TUG1下游结合的294个DEGs,GSE73953数据集获取14657个DEGs,对TUG1下游结合的15个DEmiRs进行预测,获得6947个DEGs,对以上三组数据进行交叉合并获得90个DEGs;(4)对共同DEGs进行GO和KEGG富集分析,包括细胞对热应激的反应、衰减阶段、Notch信号通路、剪接体等。结论:lncRNA TUG1在IgAN中低表达,TUG1可能通过miR-107、ATXN1L调控的Notch信号通路参与IgAN中发生、发展。

腹泻型肠易激综合征湿热质与非湿热质患者外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1表达及意义

目的比较腹泻型肠易激综合征湿热质与非湿热质患者外周血长链非编码RNA X染色体失活特异转录因子(lncRNA XIST)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)表达的差异并分析其临床意义。方法选择2021年1月至2023年12月期间江苏省如皋市中医院收治的120例腹泻型肠易激综合征患者作为观察组,根据中医体质分为湿热质亚组和非湿热质亚组;选择同期体检的100名健康者作为对照组。检测外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1表达水平及血清C反应蛋白(CRP)水平并比较差异,分析腹泻型肠易激综合征湿热质的影响因素及诊断指标。结果观察组患者外周血lncRNA XIST的表达水平高于对照组,lncRNA TUG1的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(t=8.136、9.324,P<0.05);观察组中湿热质亚组患者外周血lncRNA XIST的表达水平及血清CRP的水平高于非湿热质亚组,lncRNA TUG1的表达水平低于非湿热质亚组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA XIST是腹泻型肠易激综合征湿热质的危险因素,lncRNA TUG1是腹泻型肠易激综合征湿热质的保护因素(P<0.05);外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1诊断腹泻型肠易激综合征湿热质的ROC曲线下面积分别为0.754和0.810。结论lncRNA XIST表达增加、lncRNA TUG1表达降低与湿热质腹泻型肠易激综合征相关,外周血中两项指标的表达水平对湿热质腹泻型肠易激综合征具有诊断价值。

血清Notch1、TUG1、Periostin对支气管哮喘患儿气道炎症程度的诊断价值

目的 分析血清Notch1、牛磺酸上调基因1(TUG1)、骨膜蛋白(Periostin)对支气管哮喘患儿气道炎症程度的诊断价值。方法 选取2020年5月~2023年1月我院收治的115例支气管哮喘患儿为研究组,并选取同期50例健康儿童作为对照组;对比研究组与对照组血清Notch1、TUG1、Periostin水平,对比不同气道炎症程度患儿血清Notch1、TUG1、Periostin水平及血清炎性因子[白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和气道重塑因子[骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)],分析三项血清水平与血清炎性因子、气道重塑因子的相关性,并分析血清Notch1、TUG1、Periostin水平对重度气道炎症的诊断价值。结果 研究组血清Notch1(1.88±0.57)、TUG1(1.87±0.68)、Periostin(164.54±52.33)ng/ml水平均高于对照组[Notch1:(1.04±0.35),TUG1:(1.03±0.12),Periostin:(117.28±27.19)ng/ml],差异具有统计学意义(P<0.05);轻度气道炎症患者血清Notch1(1.46±0.48)、TUG1(1.48±0.59)和Periostin(136.28±34.62)ng/ml均低于中度患者[Notch1:(2.03±0.51),TUG1:(1.92±0.63),Periostin:(195.63±45.72)ng/ml]低于重度患者[Notch1:(3.32±0.55),TUG1:(2.54±0.57),Periostin:(231.10±50.24)ng/ml],差异具有统计学意义(P<0.05);血清Notch1、TUG1、Periostin与血清IL-17、TNF-α、OPN、TGF-β1均呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05);血清Notch1、TUG1、Periostin检测对诊断支气管哮喘患儿重度气道炎症AUC分别为0.781、0.733、0.725,三者联合检测对诊断支气管哮喘患儿重度气道炎症AUC为0.939。结论 血清Notch1、TUG1、Periostin对诊断支气管哮喘患儿气道炎症程度具有较高的临床应用价值。

LncRNA TUG1调控miR-142-5p/PD-L1轴促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学行为的影响及分子机制。方法采用qRT-PCR、Western blot分别检测组织(NSCLC癌组织、癌旁组织)和细胞(人正常气管上皮细胞HBE及NSCLC细胞A549、H2009、H1975)中TUG1、miR-142-5p及PD-L1的表达。将pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-142-5p mimics、si-TUG1+anti-miR-142-5p分别转染于A549,qRT-PCR、Western blot分别检测细胞中TUG1、miR-142-5p及PD-L1表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶基因实验分别检测TUG1和miR-142-5p、miR-142-5p和PD-L1的关系;RNA免疫共沉淀检测miR-142-5p与TUG1的相互作用。结果NSCLC组织中TUG1(2.28±0.23 vs 1.00±0)、PD-L1(0.93±0.11 vs 0.25±0.01)表达高于癌旁组织,miR-142-5p(0.31±0.02 vs 1.00±0)表达低于癌旁组织(P<0.05);与人正常气管上皮细胞HBE比较,NSCLC细胞A549中TUG1(3.21±0.27 vs 1.00±0)、PD-L1(1.12±0.12 vs 0.24±0.01)表达水平最高,miR-142-5p(0.23±0.02 vs 1.00±0)表达水平最低(P<0.05);过表达TUG1促进A549细胞增殖、迁移、侵袭;下调TUG1或上调miR-142-5p表达均对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力发挥抑制作用;TUG1负调控miR-142-5p,miR-142-5p负调控PD-L1;下调miR-142-5p减弱了沉默TUG1对A549细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论TUG1在NSCLC组织和细胞中高表达,沉默TUG1通过miR-142-5p/PD-L1轴抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭。

绞股蓝皂苷调控长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡对ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

为探讨绞股蓝皂苷通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积防治AS机制,本实验将10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,20只健康ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、绞股蓝皂苷组(高脂饲料喂养12周),灌胃给药4周。HE染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况,全自动生化分析仪检测血脂水平,实时荧光定量Q-PCR检测长链非编码TUG1、miRNA-26a表达,实时荧光定量Q-PCR及Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测Bcl2、Bax、Cytc、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP基因及蛋白表达。结果显示模型组ApoE^(-/-)小鼠血脂水平发生紊乱,肝细胞体积变大,脂肪空泡明显,小鼠肝脏Lnc-TUG1表达显著升高,miRNA-26a显著下降(P<0.01);Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved PARP mRNA及蛋白表达显著升高,Bcl2 mRNA及蛋白显著下降(P<0.01或P<0.05);cleaved caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05),cleaved caspase-9 mRNA仅有上升趋势;绞股蓝皂苷干预后血脂紊乱得以改善,肝细胞脂肪变性程度减轻,脂肪空泡明显减少,小鼠肝脏Lnc TUG1表达有所下降,miRNA-26a表达有所上调(P<0.05),小鼠肝脏Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 mRNA及蛋白表达显著下调,Bcl2 mRNA及蛋白显著上调(P<0.01或P<0.05),cleaved PARP蛋白表达显著下调(P<0.05),cleaved PARP mRNA仅有下调趋势;研究结果提示绞股蓝皂苷可能通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积,进而防治动脉粥样硬化。

干扰长链非编码RNA TUG1上调miR-26a缓解LPS诱导的脓毒症大鼠线粒体损伤和免疫紊乱

目的脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身炎症反应综合征。本文主要研究干扰长链非编码RNA TUG1对LPS诱导的脓毒症大鼠线粒体损伤和免疫紊乱影响。方法体内实验选取SD大鼠分为Control组、LPS组、LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组,LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组大鼠每周分别尾静脉注射shRNA腺病毒和特异靶向TUG1的shRNA腺病毒1次,连续2周,Control组、LPS组注射等量生理盐水,2周后,LPS组、LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS;体外实验选取10 ng/ml LPS诱导的THP-1细胞分为Control组、sh-TUG1组、miR-26a inhibitor组和sh-TUG1+inhibitor组,分别用sh-TUG1和miR-26a inhibitor单独或联合转染;RT-PCR检测TUG1和miR-26a mRNA表达水平,HE染色观察肺组织纤维化情况,Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3和caspase-9蛋白表达,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-4和IL-10的含量。结果LPS诱导脓毒症大鼠TUG1表达显著上调,miR-26a表达显著下调;sh-TUG1转染后,LPS诱导脓毒症大鼠肺组织纤维化明显减轻,Bax表达显著下调、Bcl-2表达显著上调,TNF-α和IL-6含量显著减少、IL-4和IL-10含量显著增加;LPS诱导的THP-1细胞,sh-TUG1+inhibitor组miR-26a表达比sh-TUG1组显著下调、比miR-26a inhibitor组显著上调,Bax表达比shTUG1组显著上调、比miR-26a inhibitor组显著下调,Bcl-2表达比sh-TUG1组显著下调、比miR-26a inhibitor组显著上调,Caspase-3和Caspase-9表达比sh-TUG1组显著上调、比miR-26a inhibitor组显著下调,TNF-α和IL-6含量比sh-TUG1组显著升高、比miR26a inhibitor组显著降低,IL-4和IL-10的含量比sh-TUG1组显著降低、比miR-26a inhibitor组显著升高。结论干扰长链非编码RNA TUG1可通过上调miR-26a缓解LPS诱导的线粒体损伤、细胞凋亡和炎症反应。

抑制lncRNA TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞生物学行为影响

目的:探究抑制干扰长链非编码RNA(lncRNA)TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞的生长、侵袭和EMT的影响。方法:sh-TUG1分别与miR-26a inhibitor和通路抑制剂SB203580单独或联合转染SW620细胞,以未经处理的SW480细胞为对照组。RT-PCR检测各组细胞TUG1及miR-26a表达,荧光素酶报告基因检测TUG1及miR-26a的靶向关系,BrdU法检测细胞增殖,Tanswell检测细胞侵袭,Western blot检测蛋白表达。将SW480细胞及转染sh-TUG1的SW480细胞分别皮下注射入裸鼠体内,分别设为对照组及sh-TUG1组,正常喂养30 d后取瘤、量体积,RT-PCR检测肿瘤组织TUG1及miR-26a表达,免疫组化检测肿瘤组织中Ki67、VEGF和Vimentin表达。结果:miR-26a是TUG1的靶向基因。相较于对照组,sh-TUG1组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05);miR-26a inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显升高,而E-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05)。相较于miR-26a inhibitor组,sh-TUG1+inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。SB203580+LV-TUG1组细胞增殖及侵袭数、VEGF、P-P38/P38、P-Hsp27/Hsp27相对表达量高于SB203580组(P<0.05)。sh-TUG1组肿瘤体积,肿瘤组织中TUG1、Ki67、VEGF和Vimentin表达低于对照组,miR-26a表达高于对照组(P<0.05)。结论:抑制TUG1表达可靶向上调miR-26a水平,能通过抑制VEGF/P38MAPK/Hsp27通路抑制结肠癌SW480细胞的生长、运动和裸鼠成瘤。

LncRNA TUG1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清中的表达及意义

目的探讨检测长链非编码RNA TUG1(long non coding RNA TUG1,Lnc RNA TUG1,TUG1)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time polymemse chain reaction,QRT-PCR)检测眉山市人民医院收治的106例冠心病阳性患者和98例冠心病阴性对照组的血清TUG1浓度。采用酶联免疫吸附法检测外周血清中胰岛素样生长因子2B(insulin-like growth factor 2B,IGF2B)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)的浓度。分析血清TUG1浓度与血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度的相关性。结果与冠心病阴性组比较,冠心病阳性组血清TUG1浓度维持在相对较低的水平;而血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度在冠心病阳性组明显高于冠心病阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析结果显示,血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及TNF-α浓度呈负相关关系(IGF2B:r=-0.767,P<0.001;IL-6:r=-0.671,P<0.001;TNF-α:r=-0.872,P<0.001)。结论冠心病患者血清TUG1浓度显著降低,可能是潜在的诊断和预测冠心病预后的血清标志物。

长链非编码RNA TUG1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long chain non coding RNA,LncRNAs)近年来成为研究的热点。牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene 1,TUG1)是牛磺酸作用小鼠视网膜细胞后表达上调基因1,与肿瘤的发生、发展密切相关。TUG1在多种肿瘤中表达上调,其主要通过ceRNA模式与转录因子竞争性结合miRNA、调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子及影响肿瘤血管生成等途径参与肿瘤的发生、发展。进一步研究发现,TUG1还可作为肿瘤的预后标志物,在肿瘤的早期诊断、疗效判断及预后评估等方面具有重要的应用前景。

LncRNA TUG1和miR-138-5p在慢性心力衰竭患者中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA TUG1(LncRNA TUG1)及微小RNA 138-5p(miR-138-5p)在慢性心力衰竭患者血浆中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测148例冠心病合并慢性心力衰竭患者(CHF组)及40例健康体检者(对照组)血浆LncRNA TUG1及miR-138-5p的表达,分析TUG1及miR-138-5p的表达与患者临床参数之间的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线分析TUG1及miR-138-5p对CHF早期诊断的潜能。Kaplan Meier生存分析TUG1及miR-138-5p对CHF 2年生存率的影响。结果与对照组比较,CHF组血浆TUG1及脑钠肽(BNP)的表达明显升高(P<0.001);而miR-138-5p表达明显降低(P<0.05)。TUG1的表达与CHF患者血清BNP的表达呈正相关(r=0.682,P<0.001);而与miR-138-5p的表达及左心室射血分数(LVEF)呈负相关系(P<0.05)。LncRNA TUG1作为诊断慢性心力衰竭患者生物标志物的曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI 0.590~0.960,P<0.001)。miR-138-5p作为诊断慢性心力衰竭患者生物标志物的曲线下面积(AUC)为0.607(95%CI0.620~0.940,P<0.001)。Kaplan-Meier法分析发现,高表达LncRNA TUG1患者2年中位生存时间短于低表达者(χ^2=19.77,P<0.001)。高表达miR-138-5p患者2年中位生存时间长于低表达者(χ^2=11.97,P<0.001)。结论慢性心力衰竭患者血浆LncRNA TUG1高表达,与miR-138-5p的表达呈负相关,可作为CHF患者早期诊断及预后评估的生物标志物。

LncRNA TUG1靶向调节miR-21/PTEN轴抑制糖尿病肾病大鼠肾纤维化的作用机制研究

目的:探索LncRNA TUG1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化中的作用及其潜在分子机制。方法:应用链脲佐菌素构建DN大鼠模型,LncRNA表达谱芯片筛选DN大鼠肾脏组织中LncRNA的差异表达。应用慢病毒试验过表达LncRNA TUG1,苏木精-伊红(HE)染色检测过表达LncRNA TUG1对DN大鼠肾脏组织形态学的改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测过表达LncRNA TUG1对miR-21及纤维连接蛋白(FN)、人Ⅳ型胶原(Col-4)和转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达水平的影响;Western blot检测FN、Col-4、TGFβ1、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂肌醇3激酶(p-PI3K)及磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达水平。应用生物信息软件预测miR-21与LncRNA TUG1的作用关系,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与LncRNA TUG1的相互作用关系。构建高糖诱导的肾小球系膜HBZY-1细胞模型,应用慢病毒试验方法过表达LncRNA TUG1或应用miR-21 mimic处理细胞,采用CCK-8试验检测他们对细胞增殖的影响,使用RT-qPCR实验检测其对HBZY-1细胞FN、Col-4、TGFβ1 mRNA表达水平的影响。结果:DN大鼠肾脏组织中LncRNA TUG1的表达水平显著降低。过表达LncRNA TUG1抑制DN大鼠FN、Col-4、TGFβ1 mRNA以及蛋白表达水平,肾组织病理形态学明显改善。双荧光素酶报告基因实验结果显示,LncRNA TUG1通过直接靶向方式与miR-21结合。过表达LncRNA TUG1能够抑制miR-21表达,上调PTEN并可能抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路。过表达LncRNA TUG1抑制HBZY-1细胞增殖,抑制FN、Col-4、TGFβ1 mRNA在细胞中的表达水平;应用miR-21 mimic处理能够逆转LncRNA TUG1过表达产生的增殖抑制和纤维化抑制效应。结论:LncRNA TUG1靶向调节miR-21/PTEN轴抑制DN大鼠肾纤维化。

长链非编码RNATUG1在膀胱尿路上皮癌中的表达及对细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)中的表达,及其对BUC细胞增殖和凋亡的调控作用。方法:实时定量PCR法检测TUG1基因在62例BUC组织和T24、J82细胞系中的表达。统计分析TUG1基因在BUC组织的表达与BUC临床病理因素的相关性。TUG1抑制剂smart silencer-TUG1(ss-TUG1)沉默T24和J82细胞中TUG1的表达。CCK8法检测T24和J82细胞的增殖活力。流式细胞术检测T24和J82细胞的凋亡率。结果:与癌旁组织及人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1相比,TUG1基因在BUC组织及T24、J82细胞系中的表达显著上调。随着BUC病理分级和分期的增加,BUC组织中TUG1基因表达明显增加。转染ss-TUG1能够显著抑制T24和J82细胞中TUG1的表达,TUG1沉默能够显著抑制T24和J82细胞的增殖活力,并促进其细胞凋亡。结论:长链非编码RNA TUG1在BUC组织及细胞系中高表达,其表达沉默能够抑制BUC细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA TUG1靶向miR-29a-3p调控高糖诱导的人足细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因(TUG1)对高糖诱导的人足细胞损伤的影响及其机制。方法用终浓度为30 mmol/L的高糖溶液刺激HPCs作为高糖(HG)组,同时以终浓度为5 mmol/L的糖溶液处理HPCs作为对照组(Control);将pCDH-NC、pCDH-TUG1、si-NC、si-TUG1分别转染至正常HPCs中,记为pCDH-NC组、pCDH-TUG1组、si-NC组、si-TUG1组。将pCDH-NC、pCDH-TUG1、anti-NC、anti-miR-29a-3p转染至高糖处理的HPCs中,记为HG+pCDH-NC组、HG+pCDH-TUG1组、HG+anti-NC组和HG+anti-miR-29a-3p组。将pCDH-TUG1与miR-NC、miR-29a-3p分别共同转染至高糖处理的HPCs中,记为HG+pCDH-TUG1+miR-NC组、HG+pCDH-TUG1+miR-29a-3p组。qRT-PCR检测miR-29a-3p和TUG1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果高糖处理的HPCs中podocin、nephrin、Bcl-2、TUG1表达水平降低;Bax、miR-29a-3p表达水平升高,细胞凋亡率升高。过表达TUG1和抑制miR-29a-3p表达可降低细胞凋亡率,保护高糖诱导的足细胞损伤。TUG1靶向调控miR-29a-3p,过表达miR-29a-3p能逆转TUG1过表达对高糖诱导足细胞损伤的保护作用。结论TUG1对高糖诱导的人足细胞损伤有保护作用,其机制可能与miR-29a-3p表达相关。

干扰长链非编码RNA TUG1缓解卵清蛋白诱导的哮喘小鼠肺功能损伤和纤维化以及免疫紊乱

目的探讨干扰长链非编码RNA TUG1对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠肺功能损伤、纤维化以及免疫紊乱的影响。方法将小鼠随机分为正常对照组(Control)、模型组(OVA)、阴性对照组(OVA+shRNA-NC)、干扰组(OVA+sh-TUG1),检测肺功能指标;HE染色观察肺组织;Masson染色观察肺纤维化;WB检测肺纤维化指标蛋白表达水平;试剂盒检测HYP含量;统计肺组织炎症评分;检测BALF液中炎症细胞计数情况;ELISA检测BALF液中炎症因子含量,RT-PCR检测炎症因子mRNA表达水平;WB检测肺组织中AKT/NF-κB通路的相关蛋白表达。结果与OVA组相比,OVA+sh-TUG1组肺功能指标、抗炎因子水平显著升高;肺纤维化相关蛋白表达、HYP含量、肺组织炎症评分、炎症细胞计数、促炎因子水平,均显著降低;小鼠肺组织病理状态得到缓解,炎性细胞浸润区域较少,肺组织结构完整,胶原蛋白异常增殖状态减少。结论干扰lncRNA TUG1能缓解OVA小鼠肺功能损伤、肺纤维化程度及免疫紊乱,具有靶向治疗哮喘的潜力,其机制可能与调控AKT/NF-κB通路的相关蛋白有关。