Studies on apoptosis in bone tumor cells induced by ^(153)Sm

The apoptosis in human bone tumor cells induced by internal irradiation with 153Sm was studied. The morphological changes in bone tumor cells were observed by electronic and fluorescent microscopy, as well as DNA agarose gel eletrophoresis. DNA chain fragmentation, microautoradiographic tracing and the inhibition rate of prolif- eration in bone tumor cells exposed to 153Sm with different duration time were examined. It was demonstrated that the bone tumor cells exposed to 153Sm displayed nuclear fragmentation, pyknosis, margination of condensed chroma- tin, and formation of membrane bounded apoptotic bodies, whereas the percentage of DNA chain fragmentation of bone tumor cells increases in direct proportion to the duration of irradiation with153 Sm, as well as DNA ladder for- mation in apoptotic cells. Also a marked inhibition effect of proliferation in bone tumor cells after exposure with 153Sm was observed.

外生型肝癌细胞系(EGHC-9901)的建立

目的 介绍外生型肝癌细胞系的建立及对其生物学特性测定的结果.方法 将手术切除的肿瘤标本进行体外培养,观察肝癌细胞形态学改变,进行核型分析、增殖动力学、流式细胞计数、裸鼠成瘤情况及AFP测定.结果 外生型肝癌细胞系(EGHG-9901)无论形态学观察,还是功能学测定,均符合肝癌细胞的一般特征,并具有体外分泌AFP功能.肝癌细胞之间形成完整毛细胆管,内有明显微绒毛.结论EGHC-9901细胞系符合外生型肝癌细胞系的特征.

全反式维甲酸对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘水平的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺癌细胞株钠碘同向转运体(NIS)基因表达及摄碘水平的影响。方法以不同浓度ATRA作用于3株甲状腺癌细胞(FTC133、K1、8505C),利用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测NISmRNA表达,并测定细胞摄碘水平。结果ATRA在10-7～10-4molL范围内可剂量依赖性上调FTC133细胞NISmRNA的表达,增强FTC133细胞的摄碘能力;ATRA在10-6～10-4molL范围内可上调K1细胞NISmRNA的表达,并增加其摄碘水平;不同浓度组均未见8505C细胞NISmRNA的表达和摄碘水平增加。结论ATRA可上调FTC133、K1细胞NIS基因表达,提高其摄碘能力,这为ATRA用于分化型甲状腺癌的131I治疗提供了实验依据。

基于细胞3D打印技术的体外肿瘤模型构建研究

细胞在三维环境中的形态、功能、基因表达等生理特性与二维培养存在显著差异,因此构建与体内生长环境相似的三维细胞培养模型对肿瘤研究有极其重要的作用。利用细胞3D打印技术,将人卵巢癌细胞/明胶/海藻酸钠在体外定位装配成三维类肿瘤组织模型。首先利用MTT比色法检测了细胞3D打印过程对卵巢癌细胞存活率的影响,其次利用Alamar Blue法检测了第1、3、5、7 d卵巢癌细胞在二维平面培养和三维结构体中的增殖情况,最后利用q PCR技术比较了卵巢癌细胞在二维和三维培养下p53和bcl-2的表达差异。结果表明:细胞3D打印过程对卵巢癌细胞活性的损伤很小,细胞存活率为95%以上;相比二维平面培养,卵巢癌细胞在三维结构体中起初增殖速度较慢,但在第5 d之后增殖速度加快,而二维培养的细胞由于接触抑制增殖缓慢,出现脱落死亡;第5和第7d二维和三维培养下细胞中p53和bcl-2基因表达有显著性差异(P<0.05)。研究证明,构建具有功能性组织结构和体内更相似的三维系统,可为肿瘤研究提供新的模型。

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。

生长抑素受体亚型介导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽诱导人肝癌细胞株细胞凋亡的作用,观察不同的人肝癌细胞株生长抑素受体(SSTR)亚型的表达情况。探讨SSTR亚型与肝癌细胞凋亡之间的关系。方法分别培养人肝癌细胞株(SMMC-7721,HHC-98,HepG2),荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测细胞SSTR亚型mRNA的表达。结果0.25-4.0μg/mL的奥曲肽作用48h后,三种肝癌细胞部分呈现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率呈浓度依赖性升高。3种肝癌细胞株均表达SSTR2、3、4,SSTR5则在两种肝癌细胞株SMMC-7721和HHC-98中表达,所有细胞株均未检测到SSTR1的表达。结论奥曲肽可以诱导肝癌细胞凋亡,其作用与肝癌细胞中广泛表达的SSTR亚型相关。

胃癌组织基质金属蛋白酶-7基因表达与门静脉血和腹腔转移的关系

目的研究胃癌组织基质金属蛋白酶-7(MMP-7)基因表达与胃癌门静脉血转移和腹腔转移及胃癌病理特征之间的关系,探讨其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测30例胃癌患者癌组织和正常黏膜MMP-7 mRNA,采用RT-PCR方法检测30例胃癌患者和10例腹腔良性疾病患者门静脉血和腹水中细胞角蛋白20的mRNA(CK20 mRNA)。结果胃癌组织MMP-7 mRNA阳性率60%(18/30),明显高于远端正常组织的11%(4/30),(P<0.001);胃癌组有MMP-7基因表达的门静脉血CK20 mRNA检出率达83.3%(15/18),显著高于无MMP-7基因表达的8.3%(1/12),(P<0.001);胃癌组有MMP-7基因表达的腹水CK20 mRNA的检出率为66.7(12/18),虽高于无MMP-7基因表达的41.7%(5/12),但(P>0.05);MMP-7基因表达与组织分化、TNM分期和肿瘤浸润深度相关(P<0.05);对照组门静脉血和腹腔冲洗液中CK20 mRN均为阴性。结论MMP-7基因表达与胃癌血行转移有关,参与了胃癌的浸润、转移过程,有助于判断预后,MMP-7基因表达阳性的胃癌患者应尽早行全身化疗。

介入治疗原发性肝细胞癌合并门静脉癌栓66例的临床分析

目的探讨介入治疗原发性肝癌(hepatic cell carcinoma,HCC)合并门静脉癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)的临床疗效与安全性。方法收集第三军医大学大坪医院收治的66例HCC患者,按照随机数字表法分为联合治疗组和经导管动脉化疗检塞术(TACE)治疗组。联合治疗组采用TACE联合门静脉化疗(PVC)治疗,TACE治疗组采用单独TACE治疗,比较两组患者的临床疗效。结果治疗半年后联合治疗组治疗的有效率和PVTT缩小率分别为72.73%和78.79%,显著高于TACE治疗组的63.64%和51.52%(P<0.05)。联合治疗组患者的中位生存时间及半年、1年、2年生存率均较TACE治疗组高(P<0.05)。1个月后联合治疗组的毒副反应发生率为36.36%,显著低于TACE治疗组的81.82%(P<0.05)。治疗半年后联合治疗组和TACE治疗组的AFP分别为(425.36±113.32)IU/ml和(725.32±113.32)IU/ml(P<0.05)。结论 TACE联合PVC治疗HCC合并PVTT可提高中、晚期HCC患者治疗的有效率,改善患者的生存质量,还可降低抗癌药所产生的毒副反应和AFP水平。

甲型与乙型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的比较

目的观察并比较不同流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异。方法A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染HeLa细胞,于不同时间取HeLa细胞分别在电镜下观察细胞的形态,AnnexinV-FITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率。结果A1亚型及B型流感病毒作用于HeLa细胞后24h,电镜下可见细胞凋亡的特征性改变,且凋亡百分率随时间延长而增高,于12～24h达高峰,其中B型流感病毒的凋亡诱导率最高达38.65%,A1亚型最高为23.94%。紫外线照射后的B型流感病毒(UV-B)最高达到18.20%,UV-A1最高达到10.05%,A1亚型与B型相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论B型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的能力比A型流感病毒强,而且经紫外线照射后的流感病毒可能仍然具有一定的诱导细胞凋亡能力;在肿瘤治疗方面,B型流感病毒比A型流感病毒具有更大的研究和应用价值。

多基因启动子甲基化参与的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性探究

目的探讨多基因启动子甲基化参与的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性的关系。方法用MTT法对比乳腺癌MCF-7细胞株与耐药株生长增殖差异;流式细胞检测亲本与耐药株细胞凋亡之间的差异;RT-PCR及Real-Time PCR对比两细胞株相关基因mRNA表达差异;甲基化特异性PCR(MSP)检测4个候选基因(DAPK、MGMT、P53、RASSF1A)在亲本及耐药株中的甲基化状态。结果 Real-Time PCR可见MCF-7/TAM细胞中抑癌基因DAPK、RASSF1A水平低于亲本株(P<0.05);而MGMT、P53、DNMT1、DNM3B的mRNA表达水平却较亲本细胞株升高(P<0.05);基因DNMT3A的mRNA表达水平较低,在亲本及耐药株中均未检出。MSP显示,在MCF-7细胞中,DAPK、P53呈非甲基化状态,而对他莫昔芬细胞株这2个基因为甲基化状态。结合Real-Time PCR检测结果,基因甲基化状态与甲基转移酶(DNMT1、DNMT3B)表达呈正相关性;除P53基因外,基因mRNA表达水平与甲基化状态呈负相关性。结论相关基因表达差异及启动子的甲基化状态可能与乳腺癌细胞株对他莫昔芬敏感性相关,为下一步进行临床评估和机制探讨提供了依据。

单核细胞及中性粒细胞与内皮细胞粘附的区别

为探讨单核细胞及中性粒细胞与肿瘤坏死因子－ ２ 诱导的内皮细胞粘附的区别，采用髓过氧化酶法测定白细胞与内皮细胞的粘附和抗粘附分子单克隆抗体对其粘附的影响，用酶联免疫法测定内皮细胞粘附分子的表达。结果表明，肿瘤坏死因子－ α呈浓度依赖性地增加内皮细胞与中性粒细胞或单核细胞的粘附，并可诱导内皮细胞上粘附分子的表达增加。肿瘤坏死因子－ α激活内皮细胞后６ 小时，与中性粒细胞的粘附率最高，而激活后２４ 小时，与单核细胞的粘附率最高。抗细胞间粘附分子－ １ 及抗 Ｅ－ 选择素单克隆抗体可显著抑制中性粒细胞与肿瘤坏死因子－ α激活的内皮细胞的粘附，而抗细胞间粘附分子－ １ 及抗血管细胞粘附分子－ １ 单克隆抗体则可抑制单核细胞与肿瘤坏死因子－ α激活的内皮细胞的粘附。结果提示，两种类型的白细胞与肿瘤坏死因子－ α诱导的内皮细胞的粘附具有不同的特点。

重组蛋白sCAR-TMTP1增强腺病毒对骨肉瘤细胞基因转染效率的研究

目的提高腺病毒(adenovirus,ADV)在缺乏柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的骨肉瘤细胞中的转染效率。方法通过昆虫(Bac-to-Bac)杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段(s CAR)及TMTP1肽的重组蛋白(s CAR-TMTP1),并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293(HEK293)的CAR表达水平,ADV对其的感染效率及FITC-TMTP1的结合能力。重组蛋白s CAR-TMTP1与ADV共同孵育形成复合物,流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞(MG-63)中的转染效率。结果表达及纯化的s CAR-TMTP1蛋白在相对分子质量约31 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠s CAR单克隆抗体发生特异性反应。MG-63可与FITCTMTP1特异结合,其CAR表达水平低,ADV转染效率低。经s CAR-TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG-63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV(ADV/GFP)。结论重组蛋白s CAR-TMTP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。

骨巨细胞瘤的免疫组织化学特征及其与组织发生以及病理分级的关系

目的 探讨骨巨细胞瘤的组织发生以及对免疫组化特征与病理分级的关系。方法 应用免疫组织化学技术,对 32例骨巨细胞瘤(GCT)进行了 8种抗体标记检测。结果 32例骨巨细胞瘤中,多核巨细胞和单核基质细胞 CD68均为阳性反应,α-1抗胰糜蛋白酶和溶菌酶两种抗体的阳性反应均较弱;所有病例第Ⅷ因子相关抗原、上皮膜抗原和细胞角蛋白标记在瘤细胞中无阳性表达;全部病例单核基质细胞波形成蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)均为阳性反应,而多核巨细胞几乎都为阴性反应;PCNA增殖指数在骨巨细胞瘤虽随Jaffe 病理分级增高而呈递增趋势,Ⅰ级骨巨细胞瘤的PCNA增殖指数与Ⅱ级和Ⅲ级之间的PCNA增殖指数有显著性差异(P<0.01),但Ⅱ级与Ⅲ级之间无显著性差异(P>0.05),各级相互之间有交叉重叠现象。结论 本文结果提示,骨巨细胞瘤可能起源于骨髓干细胞,并向成纤维细胞和单核-巨噬细胞分化;Jaffe 病理分级与免疫组化的表达不完全一致,但PCNA增殖指数对判断骨巨细胞瘤细胞增殖活性和肿瘤的预后有重要的参考意义。

人结肠癌CCL187细胞肿瘤球细胞干细胞特性研究

目的:研究体外培养条件下人结肠癌CCL187细胞系肿瘤球细胞的干细胞特性。方法:用无血清培养液和低吸附6孔培养板培养CCL187细胞,显微镜观察肿瘤球形成,荧光染料Hoechst33342染色观察干样细胞,用24孔培养板接种绘制CCL187细胞和肿瘤球细胞的生长曲线,顺铂和依托泊苷处理检测两种细胞抵抗化疗的能力。结果:CCL187细胞在无血清培养条件下可形成肿瘤球,肿瘤球细胞中存在浅染的干样细胞。两种细胞的生长曲线显示肿瘤球细胞的自我繁殖能力大于CCL187细胞。化疗药物处理显示肿瘤球细胞比一般肿瘤细胞具有更强的化疗抵抗性。结论:CCL187细胞的肿瘤球细胞具有肿瘤干细胞特性。

阿特拉津增强苯并[a]芘对Hep G2细胞的遗传毒性

目的探讨除草剂阿特拉津预处理HepG2细胞后对苯并[a]芘(B[a]p)所诱发的遗传毒性的影响。方法运用体外HepG2细胞微核试验检测不同浓度阿特拉津(62.5、125、250和500μmol/L)预处理HepG2细胞24h后对50μmol/LB[a]p诱导的微核率的影响。结果B[a]P诱发的微核率随着预处理阿特拉津的浓度增大而显著地升高,62.5、125、250和500μmol/L的阿特拉津预处理HepG2细胞后B[a]P所诱导的微核率比未预处理组分别增加了45.5%、51.6%、115.2%和145.5%。当阿特拉津预处理浓度为250和500μmol/L时,B[a]P所诱导的微核率与未预处理组的微核率相比有统计学意义的升高(P<0.01)。结论阿特拉津可显著地增强B[a]P在HepG2细胞中诱导的遗传毒性,这种遗传毒性的增强可能与阿特拉津对细胞色素P450(CYP)1A1的诱导有关。

肾球旁细胞瘤1例及文献复习

目的:分析肾球旁细胞瘤的临床病理特征、鉴别诊断、生物学行为及预后因素。方法:报道1例肾球旁细胞瘤,通过光镜和免疫组织化学观察其组织病理学特点及免疫学表型特征,并结合临床资料复习相关文献。结果:本例肾球旁细胞瘤患者为女性,55岁,临床无高血压病史,无血钾降低。经肾肿瘤根治术,肉眼检查见肿瘤位于肾上极,大小3.8cm×3.7cm×3.5cm,与周围组织界限清楚。光镜下肿瘤组织呈弥漫性排列,部分区域呈不规则小梁状结构,似血管球瘤样,部分区域似血管外皮瘤样结构,间质内富含薄壁小血管,可见小血管壁玻璃样变性并呈簇状分布,另见大量淋巴细胞浸润。免疫组化示肿瘤细胞表达Vimentin、CD34。结论:肾球旁细胞瘤是一种罕见的良性肿瘤,临床表现缺乏特异性,诊断依靠病理学检查。该肿瘤少部分病例为恶性潜能未定,间质内大量淋巴细胞浸润与愈后关系尚不完全确定。

染料木素对乳腺癌细胞睾丸特异性蛋白酶50表达的影响

目的:阐明低浓度染料木素(Gen)促进乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231癌睾丸抗原特异性蛋白酶50(TSP50)表达的机制。方法:取对数生长期乳腺癌细胞,免疫组化、Western blot法观察乳腺癌细胞中TSP50表达情况,MTT还原法、流式细胞术和双染法检测Gen对乳腺癌细胞周期、凋亡情况及TSP50表达的影响。结果:对照组、5μmol/L Gen和25μmol/L Gen组干细胞亚群阳性率分别为(7.37±0.43)%、(11.57±1.13)%和(12.05±0.96)%;高浓度Gen作用后,干细胞亚群百分率下降(6.04±0.22)%;与对照组相比,5μmol/L Gen和25μmol/L Gen处理后,P70S6K1磷酸化水平略有增加,Erk1/2的磷酸化水平显著增加,MCF-7细胞中MMP-2与TSP50蛋白在5μmol/L浓度下表达增加。结论:低浓度Gen刺激乳腺癌细胞生长,TSP50可因非基因组效应相关的信号而表达增加,使ER+乳腺癌干细胞表型特异性分子增加,促进ER+乳腺癌细胞增殖。

胰腺外瘘诊治的进一步体会

就７例因胰岛细胞瘤手术及胰腺损伤后形成胰瘘的资料提出防治意见．并介绍了对２例长期不愈的胰瘘患者经直接Ｒｏａｘ－ｅｎＹ式瘘管空肠吻合手术获得满意疗效的经验，认为病灶残腔不能紧密缝合时，局部使用鱼肝油酸钠及凝血酶，更好地使用引流、必要地应用尿激酶及术后使用５—Ｆｕ对预防胰瘘的发生起着一定的作用．

肿瘤抑制基因P^(53)和增殖细胞核抗原在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤抑制基因P53和增殖细胞核抗原（PCNA）与子宫内胰腺癌生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学（ABC）法，检测28例子宫内膜腺癌和36使子宫内膜增殖症组织中的P”和PCNA的表达状况。结果①肿瘤抑制基因P53蛋白在子宫内膜腺癌中的阳性表达率为50％（14／28）。每高倍视野（40×）内P53免疫阳性细胞数为224±35。而在子宫内股增殖症中未见P53蛋白表达，差异非常显著（P＜0．01）。②PCNA在子宫内胰腺癌和子宫内膜增殖症中均有表达，但每高倍视野内PCNA免疫阳性细胞数前者（274±70）明显高于后者（121±44），有显著性差异。③子宫内膜腺癌组织中P53免疫阳性细胞数与PCNA呈明显正相关（r=0．798，P＜0．01）结论肿瘤抑制基因P53蛋白表达可能与细胞增殖状况及于子宫内膜腺癌的恶性生物学行为有关。

托瑞米芬协同顺铂对人肺癌细胞株A549的影响

目的 研究托瑞米芬 (TOR)对人肺腺癌细胞系A5 4 9的毒性作用及其与顺铂 (DDP)联用的协同效应 ,探讨肺癌综合治疗的方向。方法 用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对A5 4 9细胞的毒性作用 ,测定其吸光度 (A)值。用流式细胞仪检测细胞DNA含量 ,Westernblot法检测p2 1蛋白表达。结果 TOR能直接抑制A5 4 9细胞的生长 ,≥ 5 μmol L的TOR可明显增强DDP的细胞毒性作用。TOR可加强DDP对S期、G2 期及M期细胞的作用 ,且DDP +TOR后p2 1蛋白表达增加。结论≥ 5 μmol L的TOR与DDP联用对A5 4 9细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。