人源性肿瘤细胞核单克隆抗体3介导截短组织因子治疗小鼠肝癌移植瘤的实验研究

目的观察全人源性肿瘤细胞核单克隆抗体3（huTNT-3）介导截短组织因子（tTF）对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的实验性治疗效果，并初步探讨其作用机制。方法在体外，采用凝血实验和凝血因子X（FX）活化实验检测huTNT-3／tTF融合蛋白的凝血活性。将肝癌H22细胞皮下接种昆明小白鼠，建立小鼠肝癌模型。以异硫氰酸罗丹明B（RBITC）标记huTNT-3／tTF融合蛋白和tTF蛋白，分别经尾静脉注射肝癌模型小鼠，运用共聚焦显微镜观察蛋白在小鼠体内的分布。经尾静脉分别向肝癌模型小鼠注射磷酸盐缓冲液（PBS）、tTF和huTNT-3／tTF蛋白，观察肿瘤的体积变化，并记录小鼠的生存时问。结果在有ca2’存在时，1．5、3和6μmol／LhuTNT-3／tTF蛋白的凝血时间分别为（12．90±0．60）rain、（10．39±0．40）min和（8．15±0．24）min，1．5、3和6μmoL／LtTF蛋白的凝血时间分别为（14．23±0．46）min、（12．10±0．49）min和（9．83±0．52）rain，两者差异无统计学意义（P=0．705）。huTNT-3／tTF与tTF蛋白活化FX的能力相近（P〉0．05）。共聚焦显微镜观察显示，RBITC标记的huTNT-3／tTF融合蛋白富集在小鼠的肿瘤组织。抑瘤实验结果显示，huTNT-3／tTF融合蛋白能诱导肿瘤血管形成血栓，huTNT-3／tTF组的肿瘤体积显著小于tTF组和PBS组（均P〈0．001）。PBS组、tTF组和huTNT-3／tTF组小鼠的生存时间分别为（17．3±1．9）d、（18．64-1．9）d和（25．5±2．5）d，huTNT-3／tTF组小鼠的生存时间均长于PBS组和tTF组（均P〈0．05）。结论huTNT-3／tTF融合蛋白保留了组织因子的凝血活性，并靶向定位于肿瘤血管，能诱导肿瘤血管形成血栓，从而抑制肿瘤生长。