鸡miR-19a、miR-19b通过靶向抑制LIN9促进前脂肪细胞增殖

miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA,在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示,细胞周期调控子LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的潜在靶点。为验证这一预测,构建含野生型LIN9 3'-UTR荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-WT)及突变型报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-MUT),开展靶标LIN9的鉴定。复合转染结合报告基因酶活性测定结果表明,过表达miR-19a和miR-19b能显著抑制含野生型LIN9 3'-UTR的报告基因表达,而过表达miR-19a和miR-19b抑制剂显著提高野生型LIN9 3'-UTR报告基因的表达。实时定量PCR(RT-q PCR)证明,miR-19a和miR-19b抑制剂对内源性LIN9 mRNA的表达没有影响,提示miR-19a和miR-19b可能不是通过降解mRNA调控LIN9表达。转染结合CCK-8细胞增殖分析显示,在鸡前脂肪细胞过表达LIN9明显抑制细胞增殖。与此相一致的是,细胞增殖标志分子Cyclin D1、c-Myc、PCNA、Ki67的mRNA表达量明显降低。本研究证实,LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的靶标,同时证实,LIN9抑制鸡前脂肪细胞的增殖。是否miR-17-92基因簇编码的其它mi-RNA成员也以LIN9为靶标尚不得而知,我室正在研究中。

Lin28对肝癌HepG2细胞5-Fu敏感性的影响及其分子机制

目的:探讨RNA结合蛋白Lin28对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的影响及其机制。方法:应用pcDNA3.1-Lin28或si-Lin28转染HepG2细胞,采用q PCR及WB法检测转染后HepG2细胞Lin28的表达水平,CCK-8法检测5-Fu作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu对细胞作用的IC50,流式细胞术检测5-Fu处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化,qPCR法检测转染后耐药相关miRNA(let-7a和let-7b)及肿瘤干细胞标记物(Oct4、Nanog和Sox2)的mRNA表达水平。结果:与空载对照组(HepG2/Vector)相比,HepG2/Lin28组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),过表达Lin28可显著抑制HepG2细胞对5-Fu作用的敏感性(IC50明显升高,P<0.05)和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3表达明显降低(均P<0.01)。与阴性对照组(si-control)相比,si-Lin28细胞中Lin28表达水平显著下降(P<0.01);敲减Lin28可使细胞增殖活性及5-Fu的IC50显著降低(均P<0.01),凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加(P<0.01)。与HepG2/Vector组比较,HepG2/Lin28细胞中let-7a、let-7b及肿瘤干细胞标记物(Oct4、Nanog和Sox2)的表达水平明显上调(均P<0.01),而si-Lin28细胞中let-7a、let-7b及Oct4、Nanog、Sox2的表达水平较si-control组明显下调(均P<0.01)。结论:Lin28可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性,靶向调节Lin28表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。

大肠杆菌Lin43利用甘油产丙酮醇-通过敲除gloB基因改善丙酮醛耐受性

采用重组大肠杆菌Lin 43利用甘油产丙酮醇。为了改善菌株对丙酮醛的耐受性,采取敲除glo B基因而不是gloA基因以阻断丙酮醛的脱毒途径。实验结果表明,菌株Lin43ΔgloB对丙酮醛的耐受性要明显优于Lin43ΔgloA。在含20 g·L-1的甘油磷酸盐缓冲液中,通过26 h静息细胞转化,菌株Lin43·gloB pCA24N-yqhE丙酮醇产量达到2.30 g·L-1,并能耐受3.5 mmol·L-1的丙酮醛。同时Lin43·gloB pCA24N-yqhE实现重复发酵,第二轮发酵的产量可达1.53 g·L-1,丙酮醇的得率与第一轮相同。

miR-218-5p通过靶向LIN28B调控COPD时气道上皮细胞凋亡和炎症反应

目的探讨miR-218-5p通过靶向LIN28B调控慢性阻塞性肺疾病(COPD)时气道上皮细胞凋亡和炎症反应的作用及其机制。方法将人肺支气管上皮细胞BEAS-2B分为正常对照(NC)组、香烟烟雾提取物(CSE)组、miR-NC+CSE组、miR-218-5p+CSE组、si-NC+CSE组、si-LIN28B+CSE组、miR-218-5p+pcDNA-NC+CSE组和miR-218-5p+pcDNA-LIN28B+CSE组。RT-qPCR检测miR-218-5p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平;蛋白质印记(Western blot)检测LIN28B、裂解的天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase-3)的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-218-5p对LIN28B的靶向作用。结果与NC组比较,CSE组BEAS-2B细胞miR-218-5p表达降低,细胞凋亡率、LIN28B、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加(均P<0.05)。与miR-NC+CSE组比较,miR-218-5p+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低(均P<0.05)。与si-NC+CSE组比较,si-LIN28B+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低(均P<0.05)。与miR-218-5p+pcDNA-NC+CSE组比较,miR-218-5p+pcDNA-LIN28B+CSE组BEAS-2B细胞细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加(均P<0.05)。结论miR-218-5p通过靶向LIN28B可抑制CSE诱导的气道上皮细胞凋亡和炎症反应。因此,miR-218-5p可能是慢性阻塞性肺疾病的潜在治疗靶点。

甲状腺癌组织中IL17RD、LIN52、ESM-1表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨甲状腺癌组织中白细胞介素17受体D(IL17RD)、LIN52、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取125例甲状腺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量PCR检测组织中IL17RD、LIN52、ESM-1的mRNA表达水平,免疫组织化学法检测组织中IL17RD、LIN52、ESM-1蛋白阳性表达率,分析其蛋白表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存曲线分析IL17RD、LIN52和ESM-1蛋白表达与甲状腺癌预后的关系,Cox回归分析甲状腺癌患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,甲状腺癌组织中IL17RD、LIN52和ESM-1的mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均显著升高(P<0.05)。IL17RD、LIN52和ESM-1蛋白表达与甲状腺癌患者年龄、性别、肿瘤直径以及病理类型无明显相关性(P>0.05),与TNM分期、分化程度和淋巴结转移具有明显的相关性(P<0.05),并且TNM分期越高、分化程度越低、发生淋巴结转移时IL17RD、LIN52和ESM-1蛋白表达阳性率越高。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,IL17RD、LIN52和ESM-1蛋白阳性表达患者3年生存率均显著低于阴性表达患者(P<0.05)。Cox回归分析显示,IL17RD、LIN52和ESM-1蛋白阳性表达均是影响甲状腺癌预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中IL17RD、LIN52、ESM-1的mRNA和蛋白均呈高表达,可作为甲状腺癌预后判断的生物学指标。

瑞芬太尼通过调控miR-212-3p/LIN28B表达影响子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨瑞芬太尼对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法不同浓度(0、5、50、500 ng/ml)的瑞芬太尼干预子宫内膜癌Ishikawa细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和LIN28B蛋白表达,qRT-PCR检测Ishikawa细胞中miR-212-3p和LIN28BmRNA表达。分别转染miR-NC、miR-212-3p mimics、si-NC、si-LIN28B至Ishikawa细胞,用不含瑞芬太尼的培养基干预24 h后,上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达。转染anti-miR-NC、anti-miR-212-3p至Ishikawa细胞,并用含500 ng/ml瑞芬太尼的培养基干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-212-3p与LIN28B的靶向调控关系。结果瑞芬太尼可剂量依赖性提高Ishikawa细胞增殖抑制率及细胞中p21蛋白表达(P<0.05),而降低细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达。同时,瑞芬太尼促进Ishikawa细胞中miR-212-3p的表达(P<0.05),而抑制LIN28B表达(P<0.05)。过表达miR-212-3p或抑制LIN28B表达均提高Ishikawa细胞增殖抑制率及细胞中p21蛋白表达(P<0.05),而降低细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05)。miR-212-3p在Ishikawa细胞中负向调控LIN28B表达,抑制miR-212-3p表达逆转了瑞芬太尼对Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论瑞芬太尼可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭,其可能通过调控miR-212-3p/LIN28B轴发挥作用。

miR-128-3p靶向Lin28B增加肝癌细胞对奥沙利铂的敏感性

目的研究miR-128-3p与肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞对奥沙利铂敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法采用qRT-PCR法检测人正常肝细胞HL-7702、HCC细胞BEL-7402和Hep-3B中miR-128-3p、Lin28B的表达;将对数生长期的HCC细胞BEL-7402、Hep-3B随机分成miR-128-3pmimics组(转染miR-128-3Pmimics)、miR-NC组(未转染细胞)、Lin28B-3'UTR WT组(载体psiCHECK2-Lin28B-3'UTR WT和miR-128-3p共转染)、Lin28B-3'UTRMUT组(载体psiCHECK2-Lin28B-3'UTRMUT和miR-NC共转染)和miR-128-3p+Lin28B组(miR-128-3p和Lin28B共转染)、si-Lin28B组(转染si-Lin28B)和si-NC组(转染沉默对照),均以脂质体转染.采用MTT法检测各组细胞的存活率和活力; Western Blot检测各组细胞的蛋白表达.结果与人正常肝细胞相比, HCC细胞BEL-7402和Hep-3B中miR-128-3p的表达较显著降低(P<0.01), Lin28B的表达较显著升高(P<0.01),且过表达miR-128-3p、沉默Lin28B均可抑制HCC细胞增殖,促进凋亡,增加HCC细胞对奥沙利铂的敏感性.Lin28B为mi R-128-3p的靶标,且回补Lin28B可逆转mi R-128-3p增加HCC细胞对奥沙利铂敏感性的作用.结论miR-128-3p可增加HCC细胞对奥沙利铂的敏感性,其作用机制可能与靶向Lin28B有关,提示miR-128-3p可作为抗奥沙利铂耐药性的潜在靶点.

瑞芬太尼在子宫内膜癌细胞增殖及迁移中的调节机制及对miR-212-3p/LIN28B通路的影响

目的:探讨子宫内膜癌细胞采用瑞芬太尼的干预效果及对增殖、迁移与miR-212-3p/LIN28B通路的影响。方法:①子宫内膜癌Ishikawa细胞放置在4个试管中,给予瑞芬太尼5、50、500 ng/ml 24 h培养,以瑞芬太尼0 ng/ml为对照组;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,实时荧光PCR法检测miR-212-3p、LIN28B mRNA表达水平,Western blot法检测细胞周期蛋白(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及LIN28B蛋白表达水平,采用Transwell法测定四组细胞迁移及侵袭率。②子宫内膜癌Ishikawa细胞中转染miR-NC、miR-212-3p mimics、si-NC及si-LIN28B,并采用500 ng/ml瑞芬太尼处理,采用上述方法评估细胞的增殖和迁移。结果:四组24 h细胞增殖率比较无统计学差异(均P>0.05);且细胞增殖抑制率呈瑞芬太尼药物剂量依赖性;实时荧光PCR法测定结果表明:四组不同浓度瑞芬太尼处理后miR-212-3p mRNA呈上升趋势(均P<0.05),而LIN28B mRNA水平呈下降趋势(P<0.05),并呈剂量依赖性;Western blot结果表明:四组Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及LIN28B蛋白表达比较差异具有统计学意义(均P<0.05),随着瑞芬太尼药物剂量增加,其表达水平呈下降趋势;随着瑞芬太尼浓度增加,迁移细胞数与侵袭细胞数下降明显,并表现出剂量依赖性;miR-NC组细胞增殖抑制率低于miR-212-3p mimics组(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数高于miR-212-3p mimics组(均P<0.05);抑制LIN28B蛋白后si-LIN28B细胞增殖抑制率高于si-NC组(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数及LIN28蛋白均低于si-NC(均P<0.05);瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-212-3p组miR-212-3p、细胞增殖抑制率低于瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-NC组(均P<0.05),LIN28B蛋白、迁移细胞数及侵袭细胞数高于瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-NC组(均P<0.05)。结论:瑞芬太尼能抑制子宫内膜癌细胞生物学活性,可能与药物调控miR-212-3p/LIN28B通路有关。

miR-125a对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及机制

目的探讨微小RNA-125a(miR-125a)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响及机制。方法常规培养人EC细胞(JEC、HEC-1B、Ishikawa细胞)和子宫内膜上皮细胞(ECS细胞)。用RT-PCR法检测细胞中miR-125a表达,筛选miR-125a表达最低的细胞为实验细胞。取对数生长期miR-125a表达最低的EC细胞,并将其随机分为miR-NC组、miR-125a mimics组,分别转染miRNA阴性对照miR-NC、miR-125a模拟物miR-125a mimics。用RT-PCR法检测miR-125a表达,用CCK-8实验检测细胞增殖活性(OD值),用平板克隆实验检测细胞集落形成能力,用流式细胞术检测细胞凋亡能力(凋亡率),用Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测细胞内LIN28同系物B(LIN28B)蛋白表达。结果与ECS细胞比较,JEC、HEC-1B、Ishikawa细胞中miR-125a相对表达量均低(P均<0.05),且Ishikawa细胞miR-125a的相对表达量最低,将其作为实验细胞。与miR-NC组比较,miR-125a mimics组miR-125a表达高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-125a mimics组培养24、48、72 h后OD值低,集落形成数少,凋亡率高,迁移细胞数、侵袭细胞数少,LIN28B蛋白相对表达量低,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论上调miR-125a表达可抑制EC细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,该作用可能与其靶向调控LIN28B表达有关。

苯酚、正丁醇、β-环糊精、1-溴代萘四元包络物室温燐光光谱及分析应用

研究了在含有正丁醇（n－Bu）的猓泛ㄢ－CD）溶液中，加入有机小分子苯酚(phenol)后诱导1－溴代萘（1－BrN）发射强的室温光（RTP）的光谱性质。实验表明所研究体系中形成了1－BrN/猓瑿D/n－Bu/phenol四元包络物。考察了利用该体系测定痕量1－BrN的定量方法的可行性，结果发现1－BrN的线性范围为：1.0×10―5―1.0×10－4mol/L,其检出限为6.02×10－9mol/L。

非除氧条件下6-溴萘硫酸钾超分子组合室温燐光

极少量环己烷存在下 ,由于超分子化合物 β CD BNS 环己烷的形成 ,不经除氧可观察到强的室温光(RTP)发射。同时 ,对影响超分子化合物发光性质的各种因素如形成三元包合物、空间匹配效应。

4-溴联苯的无保护性介质流体室温燐光和延迟荧光性质研究

发现４－溴联苯在无保护性介质存在且不需除氧的条件下即有一定强度的流体室温燐光和延迟荧光发射。借助于少量有机溶剂的增溶作用和除氧操作，可以获得完全清澈透明的延迟荧光测量体系，溴联苯的检出限为１．５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ。

1,4-二乙氧基苯的相转移催化合成

采用大孔型交联聚苯乙烯为载体研究制得新型季钅米舛 盐型相转移催化剂 Y98B,并将其应用于 1 ,4 -二乙氧基苯的催化合成反应 ,进行了产品的红外光谱分析和熔点测定 ,探讨了催化剂用量、对苯二酚与溴乙烷物的质量比、反应温度和反应时间等动力学条件对产品收率的影响。确定了在反应温度为 70℃ ,mol对苯二酚 ∶mol溴乙烷=1∶ 3.5 ,反应时间 4 h,催化剂用量 3.0 g的条件下产品收率可达 84 .3%

1-萘胺二乙酸的无保护性介质流体室温燐光特性及金属离子的影响

含 1 萘胺二乙酸 (NADA)的水溶液仅以Na2 SO3作除氧剂 ,以TlNO3作重原子微扰剂 ,即能产生强而稳定的室温光 (RTP)信号 ,其最大激发和发射波长λex/λem 为 3 2 1/5 71nm ,浓度分别在 1.0× 10 - 6 ～ 1.0× 10 - 5mol/L和 2 .0× 10 - 7～ 1.0× 10 - 6 mol/L范围内与RTP强度呈良好线性关系 ,检测限为 1.2× 10 - 8mol/L。NADA作为一种n→π 跃迁型的发光性氨羧络合剂 ,当其与金属离子配位时 ,因其氮原子上的n电子参于配位 ,显著降低氮原子上的电荷密度 ,提高了分子内电荷转移 (ICT)态的能量 ,发光量子产率降低 ,从而荧 ( )光强度下降 。

1,4-二乙氧基苯的相转移催化合成

采用大孔型交联聚苯乙烯为载体研制出新型季 钅盐型相转移催化剂Y98B ,并将其应用于 1 ,4-二乙氧基苯的催化合成反应 ,产品进行了红外光谱分析和熔点测定 ,探讨了催化剂用量、对苯二酚与溴乙烷物质的量比、反应温度和反应时间等动力学条件对产品收率的影响。确定了在反应温度为 70℃、对苯二酚∶溴乙烷 (摩尔比 )为 1∶3.5、反应时间为 4h、催化剂用量为 3.0g的条件下产品收率可达 84.3%

LIN总线控制器的FPGA设计

LIN(Local Interconnect Network)总线是一种新型低成本汽车车身网络低端通讯总线。本文针对LIN总线协议的特点,设计了基于ALTERA芯片EP1K50TC144-3的LIN总线控制器。该总线控制器能够实现LIN总线发送与接收,并具有LIN总线自动唤醒与自同步功能。

持久性有机污染物γ-六六六生物降解研究进展

γ-六六六(γ-Hexachlorocyclohexane,γ-HCH)是一种有机氯杀虫剂,由于它具有持久性和很高的毒性,成为顽固性的世界性污染物。目前从世界上不同的受HCH污染的地区中已经分离出许多能够降解HCH的微生物,其中一些微生物对γ-HCH的降解途径得到了阐明,降解基因/酶也得到了鉴定。综述了γ-HCH降解菌的多样性、降解途径、降解基因和酶,为γ-HCH的生物修复提供了参考。

室温燐光分析法中所用国产β-环糊精的提纯

β-环糊精(β-CD)是由七个葡葡糖分子构成的具有内疏水、外亲水的笼状分子。其特定的刚性筒状结构能容纳体积适宜、极性较小的分子形成包接配合物。1984年 Cline Love的研究集体首次提出环糊精诱导室温燐光法(CD-RTP)。它是在以环糊精包接发光体的同时再包容一个非极性的有机化合物。如以1,2-二溴乙烷作重原子微扰剂,增大 S_1→T_1的系间窜越能力。

季鏻盐相转移催化卡宾法合成α-氨基酸

利用三苯基十六烷基氯化为相转移催化剂，以三种环酮为原料，合成了三种α-氨基酸，产率较高。

IEC 62228-2:2016中对静电放电试验的要求

介绍了IEC 62228-2:2016《集成电路收发器的EMC评估-LIN收发器》(以下简称IEC 62228-2:2016)中静电放电试验的试验配置和方法要求,详细讨论了直接放电和间接放电在试验中的实际应用。