TurboFect介导骨形态发生蛋白2转染CHO细胞的研究

目的:构建真核表达载体p IRES-EGFP-BMP-2,通过Turbo Fect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系。方法:利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因c DNA,克隆入p MD18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入p IRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒。以壳聚糖和Turbo Fect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞。结果:成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了p IRES-EGFP-BMP-2质粒。与壳聚糖组相比,Turbo Fect用量为1:1时,细胞阳性率为(31.92±1.31)%,高于壳聚糖的细胞阳性率(6.33±1.53)%。目的基因与Turbo Fect比例为1:2时转染效率为(42.90±1.10)%高于1:1的(28.59±2.38)%和1:3的(37.52±2.14)%。细胞密度调节到5×103 cells/cm2阳性细胞率可达到(44.43±3.23)%。荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代。Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达。结论:Turbo Fect成功的介导了p IRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株。