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番木瓜β-Gal基因RNAi双T-DNA植物表达载体的构建及其遗传转化的初步研究 被引量:2
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作者 何玮毅 陈晓静 +2 位作者 申艳红 卢秉国 潘东明 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期556-561,共6页
克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p130... 克隆了番木瓜(Carica papaya L.)果肉的细胞壁水解关键酶β-半乳糖苷酶(β-GAL)基因保守区,将其反向重复插入载体pKANNIBAL,构建RNAi中间表达载体pKAN/RG,将其上的发夹结构取代经改造的载体pCAMBIA1300上hptⅡ基因,构建中间表达载体p1300-/MFRG,分离单T-DNA区段,与载体pCAMBIA2301构建RNAi双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG。酶切分析和PCR检测表明,p2301/TTRG已被成功导入农杆菌EHA105。通过遗传转化,初步获得了GUS染色呈阳性且具Kan抗性的番木瓜胚性愈伤组织。 展开更多
关键词 番木瓜 Β-半乳糖苷酶 RNA干扰 双T—DNA植物表达载体 遗传转化
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双T-DNA共转化获得转基因番木瓜 被引量:1
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作者 何玮毅 陈晓静 +2 位作者 叶一江 申艳红 卢秉国 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期397-403,共7页
番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那霉素筛... 番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那霉素筛选质量浓度确定为150mg·L-1。在该质量浓度下,2种方法均获得了转基因再生植株,但转化效率仍较低。正交试验结果表明,浸泡转化法中各处理因素的作用大小为:AS质量浓度>共培养时间=菌液光密度值=侵染时间,最佳共转化组合为:100μmol·L-1AS+菌液光密度值0.2+侵染20min+共培养3d。经PCR和Southern杂交检测,所获得的5株再生植株中有2株为共转化的结果,诱导了其中1株生根并移栽。为进一步选育无选择标记基因的抗软化转基因番木瓜奠定了基础。 展开更多
关键词 番爪瓜 果实软化 双T—DNA 共转化植株
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番木瓜β-Gal基因的克隆分析与植物表达载体构建 被引量:1
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作者 何玮毅 陈晓静 +1 位作者 申艳红 卢秉国 《热带作物学报》 CSCD 2010年第2期217-223,共7页
番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,... 番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,该番木瓜β-GAL属于糖苷水解酶超级家族42中家族35的成员,在进化过程中与拟南芥的亲缘关系较近,与鳄梨和北美云杉则较远。同时,它还具有一段定位于胞外的信号肽,再次表明其可能参与了果肉细胞壁的降解和果实软化。进一步分离了β-Gal基因启动子,初步验证了其果实表达特异性。将该启动子替换载体p2301/TTRG上的CaMV 35S启动子,构建出RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体。酶切分析和PCR检测结果表明,载体p2301/BPTTRG已被成功导入农杆菌,可用于后续的遗传转化研究。 展开更多
关键词 番木瓜 Β-半乳糖苷酶 果实特异性启动子 双T-DNA植物表达载体
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基于phy基因的双边界植物表达载体构建
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作者 赵鄢鹏 李杰 +4 位作者 刘琦 夏善勇 吴立成 王秀君 李希臣 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期394-397,共4页
采用同源克隆方法从泡盛曲霉中克隆了1515bp的植酸酶基因,与黑曲霉(A.niger963)phyA2的核苷酸同源性为95%。以植物表达载体pTTBUG8为基础,构建了由35S启动子调控、具有磷高效利用功能基因(phy)的双边界植物表达载体pBSP。解决了bar基因... 采用同源克隆方法从泡盛曲霉中克隆了1515bp的植酸酶基因,与黑曲霉(A.niger963)phyA2的核苷酸同源性为95%。以植物表达载体pTTBUG8为基础,构建了由35S启动子调控、具有磷高效利用功能基因(phy)的双边界植物表达载体pBSP。解决了bar基因及其产物PAT蛋白的安全性及产权等问题,并为植物养分高效利用基因工程研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 phy基因 BAR基因 双边界植物表达载体 安全性
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Fragile X mental retardation protein interacts with TDG
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作者 Bardoni B MandelJ.-L 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第6期516-520,共5页
Fragiie X syndrome is the most common form of inherited mental retardation disease, resulting from absent of expression of its disease gene FMR1. To study the function of the fragiie X mental retardation protein (FMRP... Fragiie X syndrome is the most common form of inherited mental retardation disease, resulting from absent of expression of its disease gene FMR1. To study the function of the fragiie X mental retardation protein (FMRP) through protein/protein interaction, a mouse embryo cDNA library was screened by the yeast two-hybrid system. A clone was found to interact specifically with FMRP. The cDNA of this clone ( Genbank accession number af102875 ) encoded a protein highly homologous to human G/T mismatch-specific DNA thymine glycosylase ( hTDG ). Interactions between various alternatively spliced FMRP isoforms and a series of mTDG deletion proteins were further studied in the yeast two-hybrid system and their interaction amino acid regions were determined. interaction between FMRP and TDG existed inside exon 13 of FMRP ( amino acid residue 397-425 ) and around amino acid residue 122-346 of TDG. These results will be helpful to the study of the biological role of FMRP. 展开更多
关键词 fragile X mental RETARDATION protein G/T mismatch-specific DNA THYMINE GLYCOSYLASE yeast TWO-HYBRID protein/protein interaction.
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