多重PCR技术鉴定番茄Ty-1和Mi基因

利用同一PCR反应体系,对分别与番茄(Lycopersion esculentum)抗黄化曲叶病毒(Tomato YellowLeaf Curl virus)病的Ty-1基因和番茄抗根结线虫(root-knot nematode)的Mi基因紧密连锁的SCAR标记进行同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398bp、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。与Mi基因紧密连锁的SCAR2标记也为共显性标记,抗感材料均产生750bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了570bp和180bp以及750bp、570bp和180bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。酶切结果仍为750bp的产物。经反复验证,结果准确可靠,可以用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。

利用多重PCR反应同时筛选番茄Ty-1和cf-5基因

利用同一PCR反应体系同时扩增、筛选分别与番茄抗黄化曲叶病毒病的Ty-1基因和番茄抗叶霉病的cf-5基因紧密连锁的SCAR标记,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在TaqI酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点,酶切后仍呈现398bp的特异带。与cf-5基因紧密连锁的SCAR2标记扩增后抗感材料均产生960bp的特异片段,用限制性内切酶TaqI酶切后,含cf-5基因的材料产生一条256bp的特异带,而不含cf-5基因的材料产生一条225bp的特异带。

番茄抗病基因Ty-1的CAPS标记及检测

为了获得番茄抗病基因Ty-1的分子标记,利用特异引物对3份抗病纯合材料(基因型Ty-1/Ty-1)和3份感病纯合材料(基因型ty-1/ty-1)进行PCR扩增,抗病、感病材料均产生400bp的PCR扩增片段,感病和杂合抗病材料的酶切产物存在RsaⅠ酶切位点,酶切后分别产生了350、50bp以及400、350、50bp的片段,而抗病纯合材料的扩增产物无此酶切位点,酶切后仍为400bp的片段。该标记能够区分抗病材料、感病材料及杂合抗病材料,是与番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对33份番茄F1进行检测,有20份材料含有抗病基因Ty-1,13份材料不含抗病基因Ty-1。利用该标记对国内的24份番茄自交系进行检测,24份材料均不含抗病基因Ty-1。经反复验证,结果准确可靠,该标记可以用于对番茄抗病基因Ty-1的筛选鉴定。

番茄种质抗黄化曲叶病毒病Ty-1基因的分子标记分析与田间抗病评价

利用SNP分子标记对12份番茄种质的Ty-1基因连锁标记进行检测,同时采用田间鉴定方法,综合评价番茄种质资源的对番茄黄化曲叶病毒病的抗病性。结果表明FQSH1、FQSH4、FQSH5、FQSH10、FQSH11和FQSH25为纯合抗病资源(基因型Ty-1/Ty-1),田间表现为抗番茄黄化曲叶病毒病;FQZJ6和FQSH34为杂合抗病资源(基因型Ty-1/ty-1),田间表现为抗番茄黄化曲叶病毒病。野生2、FQZJ4、FQZJ9和野生3为感病纯合资源(基因型ty-1/ty-1),其中FQZJ4田间表现为抗病,其他为感病。分子标记分析结果与田间鉴定结果基本一致。

番茄黄化曲叶病毒病抗病基因TY-1的PCR检测

利用特异引物对3份抗病纯合材料(基因型Ty-1/Ty-1)和4份感病纯合材料(基因型ty-1/ty-1)进行PCR扩增,抗、感材料均产生398bp的PCR扩增片段,抗病和杂合抗病材料的酶切产物存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了303和98bp以及398、303和98bp的片段,而纯合感病材料的扩增产物无此酶切位点,酶切后仍为398bp的片段。该标记能够区分抗病材料、感病材料及抗病杂合材料,是与番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对13份番茄杂交种进行检测,有8份杂交种含有Ty-1抗病基因,3份材料不含Ty-1抗病基因。利用这条标记对国内的13份番茄自交系进行检测,13份材料均不含Ty-1抗病基因。

番茄黄化卷叶病毒病抗病基因Ty-1的CAPS标记建立

本研究旨在筛选获得与番茄黄化卷叶病毒抗病基因Ty-1紧密连锁的分子标记,为番茄抗病育种提供技术支撑。根据与抗病基因Ty-1紧密连锁的RFLP标记序列设计特异引物,以抗病杂合体(Ty-1/ty-1)、抗病纯合体(Ty-1/Ty-1)和感病纯合体(ty-1/ty-1)材料提取的DNA为模板,进行PCR扩增,而后经不同的核酸内切酶酶切处理,筛选获得与Ty-1基因紧密连锁的CAPS标记。结果显示从4个标记中筛选获得了2个稳定可靠的CAPS标记,即TG97和Mi23。TG97标记在抗病杂合体产生398bp、303bp和95bp3个特异片段,抗病纯合体产生303bp和95bp2个特异片段,感病纯合体产生398bp1个特异片段。Mi23标记在抗病杂合体产生402bp和354bp2个特异片段,抗病纯合体产生402bp1个特异片段,感病纯合体产生354bp1个特异片段。研究结果表明TG97和Mi23这2个CAPS标记均为共显性标记,可用于番茄抗病育种的辅助选择中。

番茄抗性基因Ty-1的PCR快速检测

利用国内外已发表的10对标记引物对抗番茄黄化曲叶病毒病纯合系"JZ-108"(Ty-1/Ty-1)、感病纯合系"1712"(ty-1/ty-1)及杂交F1代的Ty-1抗性基因进行PCR扩增筛选,筛选出一对特异性引物SSR47,在抗病纯合材料中产生750 bp的扩增片段,感病材料中产生640 bp的片段,抗病杂合材料中同时产生750 bp和640 bp的扩增片段,标记结果与田间鉴定完全一致,证明该标记能够区分抗病材料、感病材料及杂合抗病材料,是与抗番茄黄化曲叶病毒病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对"JZ-108×1712"F2代的48个单株进行检测,有8株为抗病纯合基因型,19株为感病纯合基因型,21株为抗病杂合基因型,其中抗病纯合株与抗病杂合株田间表现均为抗病。经反复验证,结果准确可靠,该标记可用于对番茄抗病基因Ty-1的快速筛选鉴定。

番茄抗黄化曲叶病基因Ty-1的遗传分析与AFLP标记

研究以番茄黄化曲叶病抗病品种"10033"与感病品种"10981"为亲本配制杂交组合,利用P1、P2、F1、F2、BC1P1和BC1P26个世代进行番茄黄化曲叶病抗性基因Ty-1的遗传规律分析。用288对AFLP引物对215株F2代分离群体进行连锁分析。得到4个与番茄黄化曲叶病抗病基因Ty-1连锁的AFLP标记分别是E62M37-D、E51M 44-C、E45M61-E、E40M60-A,与抗病基因Ty-1的连锁遗传距离分别为8.9、17.5、19.6和30.8 cM。

四重PCR技术鉴定番茄Ty-1、Ty-2、Mi和Cf-5基因研究

以番茄为试材,只利用1次PCR反应体系,同时对与番茄黄化曲叶病毒病(Tomatoyellow leaf curl virus)的Ty-1、Ty-2基因、番茄根结线虫病(Root-knot nematode)的Mi基因和番茄叶霉病(Leaf mold)的Cf-5基因紧密连锁的SCAR标记进行了筛选。结果表明:扩增的特异性片段和单引物扩增的片段吻合,即对与Ty-1基因、Ty-2基因、Mi基因和Cf-5基因紧密连锁的片段特异性扩增,所获得的片段大小分别是395、900、750和960bp。经TaqI酶切后所获得的特异性片段大小与前人试验所得大小基本相同,初步证明了四重PCR检测的准确性。该体系可对Ty-1、Ty-2、Mi和Cf-5 4个抗病基因进行同时筛选,在苗期辅助选择。降低了生产成本,节约时间、人力、物力,为分子标记辅助选择育种奠定了基础。

TY-1高温堵水剂的研究及应用

TY - 1高温堵水剂是由小分子有机聚合物交联而成的凝胶堵剂 ,性能优良 ,具有耐高温 ,抗高盐 ,成胶强度大 ,热稳定性好的特点。只要合理控制现场施工的注入压力 ,就可使堵剂沿高渗透带活塞式运移 ,在地层温度下形成凝胶体 ,从而有效的封堵高渗透性出水地层。现场试验了 6口井 ,均取得了明显的增油降水效果。

番茄回交后代群体Ty-1和Ty-3的PCR鉴定

利用PCR反应体系,对番茄回交群体共862株进行番茄黄化曲叶病毒病(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)抗性基因Ty-1和Ty-3的鉴定。试验结果表明:44个BF1代分离群体中含有TYLCV抗性基因Ty-1的有43个,共387株,其中3个分离群体共49株中含有纯合Ty-1基因;含有TYLCV抗性基因Ty-3基因的分离群体有34个,共221株;同时含有TYLCV抗性基因Ty-1及Ty-3基因的材料有31个分离群体,共198株,本次试验使用的标记能够有效筛选出含有TYLCV抗性基因Ty-1和Ty-3的植株,为分子辅助育种提供参考依据。

TY-1型光电速度表的研制

介绍一种新型的机车光电速度表,它采用89C51单片机控制,对光电速度传感器的脉冲数进行运算后,再转化成模拟量送到表头进行显示,准确度高,可随时指示出机车运行速度。

北京天然药物研究院JTY-1型反相制备色谱填料简介

JTY-1型反相制备色谱填料是一种性能与ODS-18键合型硅胶相当，且使用寿命更长、化学稳定性更好、样品负载量更大的一种新型反相制备色谱担体。该填料价格低廉，仅为国外同类产品价格的十分之一，甚至更低。该产品特别适合大规模工业化生产及应用，目前已成功地应用在紫杉醇、番茄红素、茶多酚、茄尼醇、辣椒碱、人参皂苷、西洋参皂苷等植物提取物的分离提纯项目中，并已实现紫杉醇、番茄红素、茄尼醇等多种植物提取物的工业化生产。

番茄中Ty-1抗性机制研究中siRNA含量的测定

Ty-1抗性基因是一种被广泛应用于预防番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的基因。该基因已被克隆,并被证明代表了一类新型的R基因,其编码一种为RNA依赖的RNA聚合酶(RDR),这种酶与已知在RNAi信号扩增中起作用的RDR1、RDR2和RDR6有所不同。近期研究表明,Ty-1通过增强转录基因沉默(TGS)来获得抗性,并且还能防御与之相关的双组分番茄严重皱缩双生病毒(ToSRV)。在带有Ty-1基因的番茄植株中,利用病毒诱导的基因沉默(TRV2-180和TRV2-190)技术,证明Ty-1抗性基因还能够保护植物免受单组分、叶蝉传播的甜菜曲顶病毒(BCTV)的感染。虽然已知的siRNA是DNA甲基化(RdDM)和诱导TGS所必需的因素,但是在本次实验中未能成功证明Ty-1番茄植物中24-nt大小siRNA的相对富集情况。

番茄Ty-1、Ty-3和Mi基因的多重PCR体系建立及应用

本研究利用10份番茄材料,筛选出能够鉴定番茄抗黄化曲叶病基因Ty-1的双SNP标记,Ty-3基因的SCAR1标记和抗根结线虫病Mi基因的SCAR2标记。应用以上分子标记构建出同时检测番茄Ty-1、Ty-3和Mi基因的多重PCR体系。结果表明,多重PCR扩增结果与单引物PCR扩增结果一致,使用该体系只需1次PCR反应及琼脂糖凝胶电泳便可快速、准确地对番茄3种基因的基因型进行检测。对96份番茄材料的分子检测结果与田间鉴定结果吻合度达到94%以上。使用该体系无需PCR产物酶切反应,可大大缩短分子检测的时间,节省检测成本,检测结果能够有效地辅助番茄抗病育种工作。

番茄抗黄化曲叶病毒基因Ty-1的双重SNP标记的开发

本试验旨在开发一种新的设计共显性SNP标记的方法,以提高SNP标记检验的效率,并将其成功应用于番茄抗黄化曲叶病毒基因Ty-1的SNP标记开发中,提高了种质资源鉴定和育种分离世代材料筛选的效率。通过对抗病基因Ty-1和等位感病基因ty-1的cDNA序列进行比对,挑选了两个稳定扩增的多元非同义突变位点,分别用来设计Ty-1和ty-1的SNP标记NL3和NL2,将两个标记进行混合得到双重SNP标记NL2-3。通过用NL2-3检验已知的抗病和感病番茄材料,验证了其多态性和稳定性。并用NL2-3对抗感病材料的F3代杂交分离群体和普通自交系进行了Ty-1的筛选,并经过田间观察进一步验证了该标记的可靠性。此方法开发得到的双重SNP标记只需要进行一次PCR反应和一次凝胶电泳就可以区分纯合抗、杂合抗、纯合感3种基因型,提高了育种选择的效率。

优质早熟糯玉米新品种“庆糯1号”的选育

【目的】满足市场和生产者对早熟优质糯玉米品种的需要,选育新的糯玉米品种。【方法】2009年秋季开始利用自交系 QN331作母本,自交系 QN412作父本杂交选育糯玉米单交种,并参加2012年广西春、秋两季糯玉米区域试验。【结果】育成的糯玉米新品种“庆糯1号”具有优质、早熟、高产稳产,糯性高、皮薄、食味佳等特点。“庆糯1号”生育期短,从出苗至采收期,桂南地区春季为74 d,秋季为70 d,区试品质评价总评分86.25分,比对照高1.25分,居参试糯玉米第1位；两季平均鲜果穗产量11145.00 kg/hm2,比对照增产8.7%；高抗大斑病,中抗茎腐病,抗逆性高于对照,制种产量高。【结论】“庆糯1号”糯玉米2013年6月通过广西农作物品种审定委员会品种审定,适合于广西各地推广种植。