RNA干扰Fascin1表达抑制胶质瘤细胞U87MG的侵袭、转移能力

目的:本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性抑制肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白Fascin1的表达,并探讨其对胶质瘤细胞U87 MG的侵袭和转移能力的影响及相关分子机制。方法:将针对Fascin1的小干扰RNA(Fascin1-si RNA)和阴性对照si RNA(Negative-si RNA)转染至人胶质瘤细胞株U87 MG中。实验分为3组:空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染neg-si RNA的细胞)、实验组(转染Fascin1-si RNA的细胞)。用transwell小室法检测Fascin1对U87MG细胞的侵袭和转移能力的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测U87 MG细胞中Fascin1、p AKT及p STAT3等蛋白的表达。通过添加针对PI3K通路的抑制剂LY294002和针对STAT3通路的抑制剂JSI-124,证实了这两条信号通路在胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移方面的作用。结果:相比空白对照组和阴性对照组,实验组细胞的转移能力降低了约(49±5.8)%及(46±5.4)%(P<0.05),侵袭能力降低了约(42±4.9)%和(43±4.8)%(P<0.05);且相关的PI3K/AKT及STAT3等信号通路的磷酸化减少;添加相应的信号通路抑制剂后,细胞的侵袭、转移能力显著降低(P<0.05)。结论:RNAi抑制Fascin1表达能够降低胶质瘤细胞U87 MG的侵袭及转移能力,并可抑制PI3K/AKT和STAT3信号激活,在一定程度上可逆转胶质瘤细胞的转移和侵袭等肿瘤特性。

神经调节因子Neuregulin-1(Nrg1)调节U87-MG细胞的黏附分子L1表达及促迁移作用

目的研究神经调节因子Neuregulin-1(Nrg1)对人胶质母细胞瘤U87-MG细胞中细胞黏附分子L1表达及细胞迁移的影响。方法给予U87-MG细胞重组Nrg1α(rNrg1α,2.5 nmol/L)24和48 h,RT-PCR观察L1 mRNA表达;给予细胞rNrg1α或rNrg1β(2.5 nmol/L)48 h,Western blot检测L1蛋白水平。用Nrg1 siRNA处理细胞,Western blot观察L1蛋白水平,用细胞划伤实验观察细胞迁移。结果 Nrg1α可促进L1 mRNA表达;与0 nmol/L组相比,Nrg1α及Nrg1β(2.5 nmol/L)均可显著增加L1蛋白水平(P<0.01,P<0.05)。与对照siRNA相比,Nrg1 siRNA明显降低Nrg1表达,并伴有L1表达下降。Nrg1 siRNA处理细胞划伤16 h,划伤边缘细胞Nrg1α、Nrg1β及L1荧光信号降低,细胞迁移减弱。结论 Nrg1可调节U87-MG细胞L1表达,其参与细胞迁移可能与提高L1表达有关。