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UBC9介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用研究
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作者 马凌桔 迟宏扬 +9 位作者 吴昕雪 马福军 田彦成 赵彩齐 何天宇 彭红建 姜怡邓 杨力 黄晖 马胜超 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期11-17,共7页
目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μm... 目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)同型半胱氨酸对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的活力及焦亡的影响;采用Western blot检测不同组细胞中UBC9、SUMO化修饰蛋白SUMO-1、炎症因子IL-1β的表达水平;qRT-PCR检测干扰前后UBC9的mRNA表达,同时检测干扰UBC9后,UBC9、焦亡相关蛋白、IL-1β及SUMO-1相关表达。结果当采用100μmol/L的Hcy刺激后,巨噬细胞的活力影响最小且焦亡蛋白NLRP3、Caspase-1表达最明显(P<0.001);与Control组相比,Hcy组IL-1β的表达水平升高(P<0.01),SUMO-1表达升高(P<0.01);与Control组相比,Hcy组中UBC9蛋白水平及mRNA水平表达均增高(P<0.05);转染si-UBC9后,与si-NC+Hcy组相比,si-UBC9+Hcy组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、UBC9、SUMO-1表达降低(P<0.01)。结论同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡的发生,其机制与上调泛素结合酶9发生SUMO化修饰有关。 展开更多
关键词 ubc9 SUMO化 巨噬细胞 同型半胱氨酸 细胞焦亡
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家蚕微孢子虫Ubc9蛋白的基因克隆与功能研究
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作者 吕丁丁 沈瑞 +2 位作者 孙笑笑 祝慧婷 唐旭东 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期515-526,共12页
SUMO(small ubiquitin-like modifier)修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,Ubc9(ubiquitin-conjugating enzyme)是SUMO修饰靶蛋白过程中唯一的E2结合酶,在SUMO修饰过程中发挥关键作用。本研究克隆了家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)NbU... SUMO(small ubiquitin-like modifier)修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,Ubc9(ubiquitin-conjugating enzyme)是SUMO修饰靶蛋白过程中唯一的E2结合酶,在SUMO修饰过程中发挥关键作用。本研究克隆了家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)NbUbc9基因的完整开放阅读框。序列分析表明,NbUbc9与所有来源于微孢子虫属(Nosema)的Ubc9聚类在同一大分支上,与同为Nosema属的西方蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)Ubc9同源性最高,说明NbUbc9蛋白在进化上高度保守。qRT-PCR分析表明,家蚕内源性Ubc9的表达量在Nb感染后有所下降,而Nb自身NbUbc9的表达显著增加。对NbUbc9基因RNAi后,Nb基因组DNA的复制水平显著下降,说明NbUbc9在Nb的细胞增殖中起着关键作用。经Pull-down和质谱分析,初步鉴定出有46个家蚕蛋白和8个Nb蛋白可能与NbUbc9相互作用,涉及蛋白质折叠与转运、去泛素化、信号转导等。研究结果为进一步研究NbUbc9在家蚕微孢子增殖中的作用提供了参考,也为开发微粒子病防治药物提供了新的方向。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 类泛素化修饰 ubc9 表达分析 RNAI
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CRMP2与Ubc9在电针缓解慢性压迫性损伤模型大鼠神经病理性疼痛中的作用
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作者 樊远志 张峻峰 吴耀持 《针灸临床杂志》 2023年第12期71-76,共6页
目的:探讨电针对慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及相关机制。方法:选取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组与电针+激活剂组,每组10只。构建慢性压迫性损伤(CCI)大鼠模型,并按组别进行相应... 目的:探讨电针对慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及相关机制。方法:选取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组与电针+激活剂组,每组10只。构建慢性压迫性损伤(CCI)大鼠模型,并按组别进行相应干预。测定大鼠痛觉敏感性,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中IL-1β、IL-6和IL-8表达水平,RT-qPCR检测大鼠脊髓中CRMP2、Ubc9 mRNA及Western bolting检测大鼠脊髓中坍塌反应调节蛋白2(CRMP2)、泛素结合酶9(Ubc9)蛋白水平。结果:CCI大鼠模型建成后,各组大鼠PWLD均显著升高且>4 s,差异具有统计学意义(P<0.05);在给予大鼠相应干预后,与假手术组比较,模型组大鼠患健侧PWLD显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠患健侧PWLD更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05);电针+激活剂组各指标均优于电针组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针可有效缓解CCI模型大鼠神经病理性疼痛,其作用机制可能是电针刺激穴位后引起机体CRMP2、Ubc9表达水平增加,抑制炎症反应,诱导镇痛。 展开更多
关键词 坍塌反应调节蛋白2 泛素结合酶9 电针 慢性压迫性损伤 神经病理性疼痛
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大黄鱼ubc9基因的克隆和组织表达 被引量:6
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作者 周鹏 张子平 +2 位作者 王艺磊 谢芳靖 邹志华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期76-82,共7页
类泛素化(sumoylation)是一种重要的转录后修饰过程。激活的SUMO(small ubiquitin-related modifer)和E2结合酶结合稳定后共价结合到底物上,从而完成对底物的类泛素化。UBC9(ubiquitin-conjugating enzyme)作为惟一的E2结合酶,在完成类... 类泛素化(sumoylation)是一种重要的转录后修饰过程。激活的SUMO(small ubiquitin-related modifer)和E2结合酶结合稳定后共价结合到底物上,从而完成对底物的类泛素化。UBC9(ubiquitin-conjugating enzyme)作为惟一的E2结合酶,在完成类泛素化中起着重要作用。从已构建的大黄鱼性腺线性化cDNA文库中筛选出ubc9同源片段,用SMART-RACE方法克隆得到了846bp的全长cDNA序列。该序列编码一个由158个氨基酸组成的蛋白。该蛋白序列与已知的UBC9高度同源,含UBC保守结构域和UBC9激活位点区域。实时定量PCR分析ubc9基因在各组织器官的表达,结果发现,ubc9基因在大黄鱼的性腺中大量表达。推测UBC9在大黄鱼性腺发育中起重要的生物学作用。 展开更多
关键词 ubc9基因 小泛素相关修饰物 RT-PCR 大黄鱼
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类泛素家族SUMO-1和UBC9的克隆、融合表达及纯化 被引量:2
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作者 韦玮 丁丽华 +6 位作者 张浩 杨智洪 崔家骏 周岩 李勤操 毛建平 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期509-511,共3页
目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和p... 目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和pGST-UBC9,分别转化大肠杆菌DH5α,表达融合蛋白GST-SUMO-1和GST-UBC9;用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了SUMO-1和UBC9的融合表达载体;Western印迹检测表明,GST-SUMO-1和GST-UBC9融合蛋白获得表达;纯化得到了融合蛋白。结论:克隆、表达并纯化了SUMO-1和UBC9与GST的融合蛋白。 展开更多
关键词 SUMO-1 ubc9 克隆 表达 融合蛋白
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Ubc9在肺癌组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 李慧 吴宝刚 +2 位作者 牛慧彦 彭扬 何平 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第10期2343-2346,共4页
目的:探讨Ubc9在人肺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测143例肺癌组织及同源非癌变组织中Ubc9的表达情况,并对临床病理资料进行分析。结果:与癌旁组织相... 目的:探讨Ubc9在人肺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测143例肺癌组织及同源非癌变组织中Ubc9的表达情况,并对临床病理资料进行分析。结果:与癌旁组织相比,Ubc9在肺癌组织中呈高表达(P<0.05),Ubc9的表达与年龄、淋巴结转移、TNM分期及预后密切相关,有统计学意义(P<0.05);而与性别、病理学类型、组织分化程度无关。结论:小细胞肺癌、肺鳞癌和肺腺癌中均有Ubc9阳性表达,均高于正常的肺组织,并且与肺癌淋巴结转移程度相关,提示Ubc9可能与肺癌细胞的转移特性有关。 展开更多
关键词 ubc9 肺癌 转移
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真核表达载体pEGFP-N1-Ubc9的构建及表达
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作者 李慧 彭扬 +1 位作者 牛慧彦 何平 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第5期863-866,共4页
目的:克隆人类Ubc9基因cDNA全长,构建Ubc9的真核表达载体并表达。方法:采用RT-PCR技术从人小细胞肺癌NCI-H446细胞总RNA中扩增Ubc9 cDNA基因片段,经过酶切鉴定后,克隆至pUCM-T载体,测序证实碱基序列无误后,再克隆至真核绿色荧光蛋白表... 目的:克隆人类Ubc9基因cDNA全长,构建Ubc9的真核表达载体并表达。方法:采用RT-PCR技术从人小细胞肺癌NCI-H446细胞总RNA中扩增Ubc9 cDNA基因片段,经过酶切鉴定后,克隆至pUCM-T载体,测序证实碱基序列无误后,再克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1)上,并转染到真核细胞,观察其在真核细胞中的表达。结果:测序证实克隆的Ubc9全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实Ubc9正确插入pEGFP-N1载体中,该重组载体能够在真核细胞中表达。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ubc9。 展开更多
关键词 ubc9 真核表达 基因克隆 载体构建
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同源异型盒基因HOXA5抑制肝癌的侵袭和迁移通过调控UBC9的表达
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作者 陈婧 张天洪 +3 位作者 万雪梅 蒋菁蓉 高爽 钟森 《成都中医药大学学报》 2017年第2期41-45,共5页
目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点。方法:通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blo... 目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点。方法:通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术检测肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达。构建稳定高表达HOXA5的肝癌细胞MHCC97H,利用划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化。应用CHIP-Seq筛选出HOXA5潜在的靶基因,在稳定高表达HOXA5基因细胞中应用qRT-PCR、Western blot验证HOXA5与靶基因的关系。结果:新鲜的肝癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,肝癌组织中HOXA5的表达低于癌旁;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,肝癌组织中HOXA5的表达水平显著下调。过表达了HOXA5基因的MHCC97H细胞的侵袭能力下降。CHIP-Seq的结果发现,HOXA5结合在UBC9的上游启动子区域。在稳定高表达HOXA5的MHCC97H细胞中,UBC9的mRNA和蛋白表达均下调。当在稳定高表达HOXA5的同时过表达UBC9时,肝癌细胞的侵袭和迁移能力部分回复。结论:在肝癌组织中HOXA5的表达下调;UBC9介导了HOXA5抑制肝癌细胞侵袭迁移的作用,这为进一步阐明肝癌发生侵袭转移过程中的分子机制提供一个新的思路,为精准治疗肝癌提供一个可能的靶点。 展开更多
关键词 HOXA5 肝癌 MHCC97H细胞 ubc9 侵袭
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Ubc9 expression predicts chemoresistance in breast cancer 被引量:6
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作者 Shi-Feng Chen Chang Gong +3 位作者 Ming Luo He-Rui Yao Yun-Jie Zeng Feng-Xi Su 《Chinese Journal of Cancer》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第9期638-644,共7页
Ubiquitin-conjugating enzyme 9(Ubc9),the sole conjugating enzyme for sumoylation,regulates protein function and plays an important role in tumorigenesis.Whether Ubc9 is involved in the chemoresistance of breast cancer... Ubiquitin-conjugating enzyme 9(Ubc9),the sole conjugating enzyme for sumoylation,regulates protein function and plays an important role in tumorigenesis.Whether Ubc9 is involved in the chemoresistance of breast cancer remains unknown.In this study,we aimed to evaluate the contribution of Ubc9 in the chemoresistance of breast cancer.Immunohistochemistry(IHC) was used to examine the expression level of Ubc9.Chi-square test,Wilcoxon test,and one-way ANOVA were applied to analyze the relationship between Ubc9 expression,clinicopathologic features,and clinical response to neoadjuvant chemotherapy.The significance of variables for survival was analyzed by the Cox proportional hazards model in a multivariate analysis.Kaplan-Meier survival curves were plotted and log-rank test was performed.The proportion of Ubc9-positive cells was higher in invasive ductal carcinoma than in normal breast tissues [(48.48 ± 17.94)% vs.(5.82 ± 2.80)%,P < 0.001].High Ubc9 expression was associated with poor differentiation(χ2 = 6.538,P = 0.038),larger tumor size(χ2 = 4.701,P = 0.030),advanced clinical stage(χ2 = 4.651,P = 0.031),lymph node metastasis(χ2 = 9.913,P = 0.010),basal-like phenotype(χ2 = 8.660,P = 0.034),and poor clinical response to neoadjuvant chemotherapy(χ2 = 11.09,P = 0.001).The expected 6-year cumulative disease-free survival rate was 87.32% in patients with low Ubc9 expression compared to 68.78% in those with high Ubc9 expression(χ2 = 4.289,P = 0.038).These data indicate that high Ubc9 expression correlates with poor response to chemotherapy and poor clinical prognosis. 展开更多
关键词 ubc9 乳腺癌 耐药 单因素方差分析 临床反应 预测 免疫组织化学 卡方检验
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Ubc9对鸡胚神经嵴细胞发育的影响
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作者 李明洋 刘乙蒙 +2 位作者 刘超 李淑玲 栾治东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第8期1079-1082,共4页
目的探索Ubc9和SUMO通路对鸡胚神经嵴细胞发育的影响。方法 1)采集鸡胚,通过免疫荧光实验和原位杂交实验来检测SUMO结合酶Ubc9及神经嵴细胞标志基因的表达情况。2)设置对照组(非特异性吗啉代处理)和Ubc9-吗啉代组来处理各组8期鸡胚,随... 目的探索Ubc9和SUMO通路对鸡胚神经嵴细胞发育的影响。方法 1)采集鸡胚,通过免疫荧光实验和原位杂交实验来检测SUMO结合酶Ubc9及神经嵴细胞标志基因的表达情况。2)设置对照组(非特异性吗啉代处理)和Ubc9-吗啉代组来处理各组8期鸡胚,随后通过原位杂交实验检测Snail2,Sox9和Fox D3等神经嵴细胞晚期标志基因的表达情况。结果 1)Ubc9与标志基因Pax7共表达于4、6和8期鸡胚神经嵴细胞前体。2)与对照组相比,Ubc9-吗啉代组鸡胚单侧上Snail2(P<0.05),Sox9(P<0.01)和Fox D3(P<0.05)的mRNA水平均有下降。结论Ubc9表达于4、6和8期鸡胚的神经脊细胞前体,鸡胚神经嵴细胞的形成需要SUMO通路参与。 展开更多
关键词 鸡胚 神经嵴细胞 ubc9 SUMO通路
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过表达Ubc9酶对乳大鼠心肌细胞低氧损伤的保护作用
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作者 陈秀会 宜全 肖青 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期772-781,共10页
目的探讨类泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰中的泛素缀合酶类E2I(Ubc9)对体外乳大鼠心肌细胞(NRCM)急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法采用分离纯化细胞法培养NRCM,对NRCM分别转染5,10,20,50和100感染指数(moi)的纯化的大鼠Ubc9基因腺病... 目的探讨类泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰中的泛素缀合酶类E2I(Ubc9)对体外乳大鼠心肌细胞(NRCM)急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法采用分离纯化细胞法培养NRCM,对NRCM分别转染5,10,20,50和100感染指数(moi)的纯化的大鼠Ubc9基因腺病毒(Adv-Ubc9),转染48 h后在荧光显微镜下分别观察其绿色荧光蛋白(GFP)的荧光强度,并用Western印迹法检测转染效率。NRCM行氧葡萄糖剥夺(OGD)分别处理0,2,4,6,12和24 h后,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、自噬相关蛋白P62/SQSTM1(P62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达。NRCM转染Adv-Ubc9 50 moi 48 h,使得Ubc9过表达,随后OGD处理6 h,建立心肌细胞急性低氧模型,利用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡,Western印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、P62、LC3和类泛素化修饰蛋白1(SUMO-1)的表达水平,蛋白免疫共沉淀法检测Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平。NRCM转染Ubc9的小干扰RNA(Ubc9-siRNA)48 h,使Ubc9沉默,随后行OGD处理6 h,Western印迹法检测活化的胱天蛋白酶3的表达水平。NRCM给予巴伐洛霉素A1(BFA1)50 nmol·L^(-1)作用2 h,Western印迹法检测LC3表达水平。结果Adv-Ubc9在50与100 moi时转染成功且效率一致,与单纯OGD组相比,过表达Ubc9能明显降低OGD引起的心肌细胞凋亡(P<0.01)、降低活化的胱天蛋白酶3的表达(P<0.01),而沉默Ubc9使心肌细胞OGD处理后的活化的胱天蛋白酶3表达上调(P<0.05),说明过表达Ubc9能抵抗OGD引起的心肌细胞凋亡。与正常对照组相比,OGD处理后,自噬底物P62发生堆积(P<0.01),自噬蛋白LC3Ⅱ明显下调(P<0.05),自噬流出现障碍;当过表达Ubc9后能明显逆转OGD引起的自噬底物P62堆积(P<0.05),改善自噬流障碍,但对自噬蛋白LC3Ⅱ影响不明显。在此基础上给予BFA1阻断自噬体与溶酶体融合过程后,与OGD+BFA1组相比,Adv-Ubc9+OGD+BFA1组的LC3Ⅱ表达明显上调(P<0.01),提示Ubc9改善自噬流障碍的作用可能与同时促进自噬激活和自噬降解过程有关;蛋白免疫共沉淀结果显示,与正常对照组相比,OGD处理后SUMO-1蛋白表达水平基本无变化,而过表达Ubc9后,SUMO-1蛋白表达明显上调(P<0.01),OGD处理后,Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平下调(P<0.01),而过表达Ubc9后,Vps34和Beclin1的SUMO化修饰明显上调(P<0.01),说明过表达Ubc9可能通过提高与自噬激活和自噬降解过程均相关的Vps34和Beclin1的SUMO化修饰,从而同时促进自噬激活和自噬降解过程改善OGD后的自噬流障碍,进而抵抗OGD引起的心肌细胞凋亡。结论高表达Ubc9酶能显著抑制OGD导致的心肌细胞凋亡,该保护作用可能是增强了Vps34和Beclin1的SUMO化修饰水平,从而同时促进自噬激活(形成自噬体)和自噬降解(自噬体与溶酶体融合)过程,进而改善OGD后自噬流障碍。 展开更多
关键词 氧葡萄糖剥夺 泛素缀合酶类 ubc9 自噬 细胞凋亡
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NF-κB和Ubc9在HGF和β-NGF诱导骨髓基质干细胞分化为肝细胞中的作用 被引量:3
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作者 曹留霞 张静 +2 位作者 刘晓萍 卞晶晶 陈琛 《青岛大学医学院学报》 CAS 2016年第4期392-395,共4页
目的探讨核因子κB(NF-κB)和泛蛋白连接酶(Ubc9)在肝细胞生长因子(HGF)和β-神经生长因子(β-NGF)诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)向肝样细胞分化中的作用。方法取小鼠股骨骨髓,直接贴壁法分离纯化BMSCs,传代,取第3代BMSCs,分为HGF组(胎肝... 目的探讨核因子κB(NF-κB)和泛蛋白连接酶(Ubc9)在肝细胞生长因子(HGF)和β-神经生长因子(β-NGF)诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)向肝样细胞分化中的作用。方法取小鼠股骨骨髓,直接贴壁法分离纯化BMSCs,传代,取第3代BMSCs,分为HGF组(胎肝细胞加入30μg/L的HGF诱导14d)、β-NGF组(胎肝细胞加入50μg/L的β-NGF诱导14d)、阳性对照组(胎肝细胞培养12d)和阴性对照组(不加诱导剂的BMSCs)。显微镜下观察诱导不同时间各组细胞形态变化,应用免疫荧光法鉴定肝细胞特异表达蛋白α1-抗胰蛋白酶(AAT)表达,免疫荧光及Realtime-PCR方法检测诱导14d后细胞NF-κB、Ubc9蛋白和mRNA的表达。结果显微镜下观察显示,经过HGF与β-NGF诱导14d后部分细胞呈圆形或卵圆形,与阳性对照组细胞形态一致;免疫荧光结果显示,经HGF与β-NGF诱导14d后细胞胞质AAT均呈阳性表达,部分细胞胞质与胞核同时呈阳性表达。与阴性对照组比较,经HGF与β-NGF诱导后NF-κB和Ubc9主要在细胞胞质中呈阳性表达,荧光强度随细胞形态向肝细胞分化呈现逐渐增强趋势。Realtime-PCR结果显示,HGF组、β-NGF组NF-κB、Ubc9mRNA的表达均较阳性对照组增高,差异有显著性(F=2 272.6、866.4,P<0.01)。结论 HGF和β-NGF诱导BMSCs向肝细胞分化过程中NF-κB和Ubc9均呈阳性表达,在BMSCs向肝细胞诱导分化过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 肝细胞生长因子 神经生长因子 泛蛋白连接酶 Α1抗胰蛋白酶
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结核分枝杆菌ClpX与人UBC9蛋白的相互作用抑制宿主细胞增殖 被引量:1
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作者 王亚倩 石超 霍克克 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期587-595,共9页
ClpX是原核生物中高度保守的基因,其编码丝氨酸蛋白酶ClpXP的ATP结合亚基,具有底物识别及ATP水解活性.ClpX参与调控细胞周期与应激反应,且为多种病原微生物致病所必需,但目前相关研究仍非常有限.为了探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tub... ClpX是原核生物中高度保守的基因,其编码丝氨酸蛋白酶ClpXP的ATP结合亚基,具有底物识别及ATP水解活性.ClpX参与调控细胞周期与应激反应,且为多种病原微生物致病所必需,但目前相关研究仍非常有限.为了探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)ClpX在感染宿主细胞过程中的作用机制,本文首先通过酵母双杂交技术在人类淋巴细胞cDNA文库中筛选得到了一个新的与结核ClpX相互作用的蛋白UBC9,并利用GST pull-down和Co-IP技术证实了这两个蛋白在体外和体内相互作用的特异性.将ClpX转染HEK293T细胞过表达,RNA干扰与回复实验进一步证实了ClpX蛋白能够通过与UBC9的相互作用抑制宿主细胞的增殖. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ClpX ubc9 蛋白质相互作用 细胞增殖
原文传递
Pmscv-Ubc9逆转录病毒表达载体的构建及产毒细胞系的建立(英文)
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作者 李薇 刘晓萍 +4 位作者 徐祥 谭艳 于业军 王苗苗 任书亭 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第14期2628-2631,共4页
目的:构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-U... 目的:构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67;G418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒感染NIH3T3细胞。结果:限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。G418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染NIH3T3细胞。结论:携带Ubc9基因的重组逆转录病毒表达载体pMSCV-Ubc9构建成功,转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Ubc9的产毒细胞系PT67-Ubc9。 展开更多
关键词 ubc9基因 逆转录病毒载体pMSCVneo PT67细胞
原文传递
慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平 被引量:3
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作者 李玮妮 陈立涵 +6 位作者 程龙 徐小洁 付洁 关鑫 刘婕 张浩 叶棋浓 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期187-190,共4页
目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293... 目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素(puromycin)筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 慢病毒属 ubc9 ERΒ 类泛素化修饰 RNA干扰
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UBC9与癌症的研究进展 被引量:3
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作者 邱君瑶 郭武华 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第3期301-306,共6页
泛素样小分子修饰因子SUMO家族蛋白主要参与蛋白质翻译后功能的调节,在转录、DNA修复、核质物质转运及染色体分离等方面发挥重要的作用。SUMO修饰包括活化、结合、连接和解离,涉及多个酶多个步骤的催化过程。研究发现,UBC9是目前发现的S... 泛素样小分子修饰因子SUMO家族蛋白主要参与蛋白质翻译后功能的调节,在转录、DNA修复、核质物质转运及染色体分离等方面发挥重要的作用。SUMO修饰包括活化、结合、连接和解离,涉及多个酶多个步骤的催化过程。研究发现,UBC9是目前发现的SUMO修饰靶蛋白过程中唯一的E2结合酶,在SUMO修饰过程中发挥关键作用,是SUMO修饰过程中的关键节点。越来越多的研究表明,UBC9和肿瘤的发生、发展关系密切,UBC9在许多恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌中都呈高表达状态,改变癌细胞中UBC9基因的表达可导致细胞增殖及细胞周期的变化,UBC9和癌症的关系成为现在主要的研究热点之一。 展开更多
关键词 ubc9 SUMO 癌症
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调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响 被引量:1
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作者 东梅 徐扬 张颐 《解剖科学进展》 2016年第1期16-19,共4页
目的探讨调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其作用机制。方法应用体外Transwell细胞侵袭实验检测调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞侵袭能力影响,以稳定转染Ubc9的HO8910-Ubc9细胞为Ubc9组,对照组为未转染的HO8910细胞(n... 目的探讨调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其作用机制。方法应用体外Transwell细胞侵袭实验检测调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞侵袭能力影响,以稳定转染Ubc9的HO8910-Ubc9细胞为Ubc9组,对照组为未转染的HO8910细胞(normal)及转染空质粒的HO8910细胞(vector);另以转染Ubc9特异性siRNA的HO8910-Ubc9细胞为siRNA1、siRNA2组,对照组为未被Ubc9特异性siRNA转染HO8910-Ubc9细胞(normal)及转染无关序列RNA的HO8910-Ubc9细胞(negative control)。应用划痕实验观察调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞迁移能力的影响。结果 HO8910-Ubc9组穿过Matrigel胶的细胞数量明显高于空白对照组和空质粒组(P<0.05),Ubc9-siRNAs转染48h后,HO8910-Ubc9细胞穿过人工基底膜的细胞数目明显低于对照组(P<0.05)。HO8910-Ubc9细胞在6、12、24h愈合率明显高于HO8910组(P<0.05),转染Ubc9-siRNA的HO8910-Ubc9细胞于划痕后在24h,细胞愈合率明显低于对照组(P<0.05)。结论 Ubc9促进HO8910细胞侵袭、迁移,可能成为临床治疗的新靶点。 展开更多
关键词 卵巢癌 ubc9 侵袭 迁移
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UBC9在人肺癌组织中高表达及其临床意义(英文)
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作者 曹留霞 张静 +3 位作者 刘晓萍 卞晶晶 陈琛 张代军 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第15期2947-2951,共5页
目的:由于Ubc9在肿瘤的发生于恶化中发挥巨大作用,本研究目的是对泛素结合酶(Ubc9)mRNA和Ubc9蛋白在非小细胞肺癌组织中表达进行检测,评估Ubc9在肺癌预后中的指导意义。方法:通过荧光定量PCR、免疫组织化学法、Western-blot检测100例非... 目的:由于Ubc9在肿瘤的发生于恶化中发挥巨大作用,本研究目的是对泛素结合酶(Ubc9)mRNA和Ubc9蛋白在非小细胞肺癌组织中表达进行检测,评估Ubc9在肺癌预后中的指导意义。方法:通过荧光定量PCR、免疫组织化学法、Western-blot检测100例非小细胞肺癌病人中Ubc9 mRNA、蛋白水平的表达进一步研究Ubc9的表达与肺癌临床特征的关系。结果:实验结果显示在肺癌细胞中Ubc9阳性表达显示为黄棕色颗粒,与癌旁组织比较,Ubc9 mRNA、蛋白在肺癌组织中高表达,并且与肺癌的临床分型(分期、淋巴结转移、吸烟、分化)有关。Ubc9 mRNA、蛋白在肺癌中的表达癌组织高于癌旁、有淋巴结转移的高于无转移、吸烟高于不吸烟者、低分化组织高于高分化组织。结论:由此可见Ubc9 mRNA、蛋白水平的高表达可能对肺癌临床特征的评估,以及预测术后生存率都有重要指导意义。 展开更多
关键词 肺癌 ubc9 临床特征
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基因家庭Pax7与Ubc9基因编码蛋白相互作用研究
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作者 刘乙蒙 栾治东 +2 位作者 刘超 李明洋 肖建英 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1173-1175,共3页
目的了解Pax7的重要生物学功能,筛选并验证与其相互作用的Ubc9基因编码蛋白,并明确Pax7与小泛素相关修饰蛋白(SUMO)的关系,为进一步研究Pax7的作用机制奠定基础。方法酵母双杂交系统筛选出与Pax7相互作用的基因Ubc9;GST-pull down方法验... 目的了解Pax7的重要生物学功能,筛选并验证与其相互作用的Ubc9基因编码蛋白,并明确Pax7与小泛素相关修饰蛋白(SUMO)的关系,为进一步研究Pax7的作用机制奠定基础。方法酵母双杂交系统筛选出与Pax7相互作用的基因Ubc9;GST-pull down方法验证Pax7与Ubc9在体外相互作用;Western blot方法检测Pax7的SUMO化状态;免疫共沉淀方法验证Pax7与SUMO的关系。结果 Pax7和Ubc9在酵母中存在相互作用;Pax7和Ubc9在体外可特异性结合;在Ubc9存在的条件下,Pax7呈现SUMO化状态,且可与SUMO相互作用;Pax7在鸡胚胎中也呈现SUMO化状态。结论 Pax7可以与Ubc9相互作用,且这种作用与SUMO有关。 展开更多
关键词 Pax7 ubc9 小泛素相关修饰蛋白(SUMO)
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白念珠菌SUMO结合酶UBC9基因缺失株的构建及其在形态调控中的作用研究 被引量:1
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作者 单爱狄 冯金荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第7期800-804,共5页
目的构建白念珠菌UBC9基因缺失株,探索UBC9基因缺失对细胞形态转换和生物被膜形成的影响。方法采用瞬时CRISPR/Cas9基因敲除系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及修复DNA,通过醋酸锂法转化白念珠菌野生型菌株SN148,于SD-His选择培养... 目的构建白念珠菌UBC9基因缺失株,探索UBC9基因缺失对细胞形态转换和生物被膜形成的影响。方法采用瞬时CRISPR/Cas9基因敲除系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及修复DNA,通过醋酸锂法转化白念珠菌野生型菌株SN148,于SD-His选择培养基筛选转化子,通过菌落PCR验证基因型,构建UBC9双等位基因缺失株。分别检测UBC9缺失株在液体培养基中的细胞形态、固体YPD平板上的菌落形态和浸入生长情况以及生物被膜形成能力。结果PCR检测发现UBC9双等位基因缺失株中能扩出约2.8 kb的单一条带,UBC9基因缺失导致液体培养基中细胞伸长主要以菌丝态形式存在,固体培养基上菌落表面粗糙且深入到培养基内呈典型的浸入生长,并且生物被膜形成能力显著增高(A值为10.31,约为野生型的10.3倍)。结论利用CRISPR/Cas9系统快速构建了白念珠菌UBC9纯合子缺失株,且证明UBC9参与细胞的形态调控和生物被膜形成。 展开更多
关键词 白念珠菌 CRISPR/Cas9 生物被膜 ubc9基因
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