基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

SPE-UFLC-MS法测定医药废水中8种四环素类抗生素

建立了固相萃取-超高速液相色谱质谱(SPE-UFLC-MS)法测定医药废水中8种四环素类抗生素的方法。通过固相萃取条件优化,选择固相Oasis HLB萃取柱、净化剂为30%ZnSO_(4)+20%K_(2)[Fe(CN)_(4)]溶液、稳定剂为1g·L^(-1)的Na_(2)EDTA、萃取pH值为8,获得最佳目标化合物萃取回收率。8种四环素类抗生素的标准曲线线性关系良好(r>0.999),且检出限低于10ng·L^(-1),平均回收率为95.3%~106.9%,相对标准偏差RSD小于8.23%。方法精密度和准确度较好。经实样测试,医药废水的调质池中除地美环素盐酸盐和二甲胺四环素盐酸盐外,其他6种四环素类抗生素均有不同程度检出,可为医药废水抗生素类化合物检测提供借鉴。

基于UFLC-QTRAP-MS/MS技术分析三叶崖爬藤不同部位的多元活性成分

基于三叶崖爬藤不同部位中60种多元活性成分的差异,对不同部位质量进行综合评价。采用超快速高效液相色谱-三重四极线性离子阱质谱联用技术测定三叶崖爬藤块根、茎、叶中60种活性成分的含量,应用多元统计分析方法比较了不同部位间差异活性成分,并对不同部位进行了质量等级排序。含量测定结果显示,60种活性成分总含量在不同部位中的分布规律为叶>茎>块根,分别达到了14263、11583、4603μg/g;主成分分析显示不同部位样本分类明显,差异较大;偏最小二乘回归分析及方差分析显示,8种活性成分可作为区分不同部位的活性成分标志物;灰色关联度分析结果显示,不同部位等级排序为叶>茎>块根,叶的整体质量优于其他两个部位。本实验结果可为三叶崖爬藤不同部位多种活性成分的快速鉴定及质量控制提供方法参考,也为其资源合理开发利用奠定基础。

UFLC-MS/MS法测定人血浆中阿帕替尼的药物浓度

目的:建立一种灵敏度高、专属性强、便捷、高效的超快速液相色谱-质谱联用方法,用于测定人血浆中阿帕替尼药物浓度。方法:以伊马替尼作为内标物,采用乙腈沉淀血浆中的蛋白;色谱柱:Waters Bridge C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为A-乙腈和B-1 mmol·L^(-1)甲酸铵,梯度洗脱(0~2.5 min 85%A,2.5~3 min 85%A~50%A,3~4 min 50%A);流速:1 mL·min^(-1);进样量:5μL;柱温:40℃;进样检测时间:4 min;采取ESI离子源,正离子模式下MRM扫描模式,阿帕替尼的离子对为m/z 398.2→212.2,内标的离子对为m/z 494.1→394.1。结果:阿帕替尼在20~1500 ng·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,r=0.999;日内、日间精密度均<15%,方法和提取回收率>90%,进样室、冻融、4℃条件下稳定性的RSD均<10%;患者血浆中阿帕替尼的浓度介于30.90~760.75 ng·mL^(-1)。结论:本实验建立的方法准确度高且操作简单,可在临床用于人血浆中阿帕替尼药物浓度的测定。

基于UFLC-Triple TOF-MS/MS的活心丸全成分分析

目的应用超快速高效液相色谱串联三重四极杆飞行时间质谱(UFLC-Triple TOF-MS/MS)对中药活心丸的化学成分进行分析。方法以Waters HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),采用配有ESI电喷雾源的高分辨三重四极杆飞行时间质谱,分别在正、负离子模式下进样检测。结果通过准确分子量及碎片离子分析、对照品比对、相关文献查阅,共确证和指认出96个化学成分,其中三萜类化合物25个、皂苷类化合物12个、胆汁酸类化合物11个、黄酮类化合物11个、生物碱类化合物10个、蟾毒内酯类化合物12个、有机酸类化合物7个、氨基酸类化合物4个、核苷类化合物1个、甾酮类化合物1个、其他类化合物2个,并解释了代表性成分的裂解规律。结论本研究阐明了活心丸的化学物质基础,为评价其质量及后续药理机制研究提供了科学依据。

UFLC-MS/MS法测定急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星含量及其药代动力学差异

目的建立高效液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆左氧氟沙星含量的方法,并研究急进高原前后大鼠体内左氧氟沙星的药代动力学变化情况。方法采用超快速液相色谱串联质谱(UFLC-MS/MS)法,以Gemini 3uC18柱(75mm×3mm,3μm)分离,以乙腈∶水∶甲酸(体积比55∶45∶0.1)为流动相进行洗脱,流速0.4mL/min,柱温30℃,进样10μL,电喷雾正离子电离(ESI)模式、多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式进行检测。12只大鼠被随机分为平原组与高原组(n=6),实验前禁食12h。实验时,大鼠灌胃给予左氧氟沙星(20mg/kg)。于给药前(0h)和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12和24h,由眼眶静脉丛采血0.2mL,并采用UFLC-MS/MS法测定大鼠体内左氧氟沙星浓度。结果左氧氟沙星的峰面积与其质量浓度在一定浓度范围内均呈良好的线性关系(r=0.999 5),该方法线性范围为5.00~2.00×10~5μg/L,最低检测限为5.00μg/L。比较急进高原组与平原组大鼠体内左氧氟沙星药动学参数,发现其发生了显著变化,药时曲线下面积从(5 799.27±1 867.18)(μg·h)/L增大到(33 828.41±8 196.08)(μg·h)/L,峰浓度增大、体内平均驻留时间延长、总清除率降低,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论急进高原后,左氧氟沙星在大鼠体内代谢过程发生明显变化,研究结果为平原和急进高原后临床合理应用左氧氟沙星提供参考依据。

SPE-UFLC-MS/MS法测定制药废水中四环素类抗生素

文章建立了利用固相萃取-超快速液相色谱-串联质谱（SPE-UFLC-MS/MS）测定制药废水中四环素类抗生素（土霉素、四环素和金霉素）残留的方法。水样经（30%硫酸锌＋20%亚铁氰化钾）溶液作为沉淀剂沉淀蛋白质后,上清液采用Oasis HLB固相萃取柱富集和净化,以（0.1%甲酸溶液＋乙腈）为流动相进行梯度洗脱,经Agilent ZORBAX SB C18柱分离后,在串联质谱ES（I＋）模式下进行MRM检测。该方法四环素类抗生素检出限（S/N=3时）0.02μg/L,3种目标物在0.010~1.0 mg/L范围内线性关系良好,线性相关系数在0.998 2~0.999 8之间。在0.20、0.40和0.60μg/L添加水平,各组分的回收率在80.8%~97.2%之间,相对标准偏差在5.31%~9.92%之间。该方法可满足制药废水中四环素类抗生素残留检测的要求。

UFLC-MS/MS法分析蜈蚣中3种多肽成分以及在蜈蚣鉴别中的应用

目的建立超高效液相色谱-质谱联用(UFLC-MS/MS)法分析蜈蚣中3种酶解多肽成分TD1(LEEDLERSEERL)、TD2(EEKDKALQNAEGEVAAL)、TD3(MILPTGASSF),比较不同品种蜈蚣中肽类成分的差异,寻找蜈蚣特异性多肽,用于蜈蚣的鉴别。方法3种肽类成分的UFLC-MS/MS法,色谱柱为XSelect HSS T_(3)(4.6 mm×150 mm,3.5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱。采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM)进行信号采集。样品采用正交试验方法,对蛋白提取方法进行优化,最终确定提取方法为蛋白裂解液超声处理60 min。得到的蜈蚣蛋白提取溶液经胃蛋白酶酶解并脱盐后,注入液质联用仪分析。测定了20批蜈蚣及8批其他动物药中3种肽类成分,并对结果进行比较。结果在地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎中未检出TD2和TD3,TD1与TD2在少棘巨蜈蚣与哈氏蜈蚣、墨江蜈蚣中存在较大差异,TD3在少棘巨蜈蚣与黑头蜈蚣、多棘蜈蚣中有较大差异。结论该方法可用于区分少棘巨蜈蚣与地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎,同时通过比较3种肽段的差异,区分药典品种少棘巨蜈蚣和4种常见非药典品种蜈蚣,为蜈蚣的质量评价和基础研究提供参考。

基于UFLC-Triple TOF-MS/MS技术的银杏叶提取物注射液化学物质基础研究

目的采用超快速高效液相色谱串联四级飞行时间质谱(UFLC-Triple TOF-MS/MS),对银杏叶提取物注射液的化学成分进行系统研究。方法采用Agilent zorbax SB C_(18)色谱柱(3 mm×150 mm,3.5μm),以含0.1%甲酸的乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 m L·min^(-1);采用高分辨三重四极杆飞行时间质谱,分别在正、负离子模式下进行检测。结果通过与对照品对照,确证了18个化合物,通过准确分子量和裂解碎片分析,指证了39个化合物,共57个化合物;其中包括21个水溶性成分、30个黄酮类成分和6个内酯类成分。结论本研究全面系统地揭示了银杏叶提取物注射液的化学物质基础,为提升银杏叶提取物注射液质量评价体系、阐明其药效物质提供了依据。

基于UFLC/Q-TOF-MS分析麸炒北苍术的成分变化

目的利用超快速液相-四级杆-飞行时间串联质谱技术UFLC/Q-TOF-MS分析北苍术麸炒前后化学成分及量的整体变化,方法采用UPLC T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,ESI源,正模式下采集质谱数据,应用Markerview等软件进行主成分分析(PCA),比较北苍术炮制前后成分变化。结果正离子模式时PCA分析能很好区分麦麸对分析的影响并发现麸炒后苍术苷A、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、以及一未知成分量显著升高,与此同时α-姜黄烯、苍术醇、白术内酯Ⅲ、苍术素量显著下降。结论麸炒使白术内酯Ⅲ脱水、脱氢转化而使白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ量增加,可能是麸炒北苍术药材健脾作用的物质基础。

UFLC-QTRAP-MS/MS法同时测定绞股蓝中11种氨基酸

目的建立UFLC-QTRAP-MS/MS法同时测定绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino中苯丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、脯氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、谷氨酸的含有量。方法绞股蓝水提液的分析采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm);以水-乙腈为流动相(含0.2%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.6 m L/min。结果 11种氨基酸在各自范围内线性关系良好(r>0.998 9),平均加样回收率90.74%~103.05%,RSD 0.61%~5.00%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于绞股蓝的质量控制。

UFLC-MS/MS法检测羊肉汤中罂粟成分

目的采用UFLC-MS/MS分析方法对羊肉汤中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀等罂粟成分进行定性检验。方法羊肉汤中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀等罂粟成分采用复合有机溶剂提取,低温除去油脂,应用超快速液相色谱法分离,采用多离子监测(MRM)分析,并测试方法的专用性、回收率和检出限。结果罂粟中各成分分离良好,该方法回收率为80%~110%,检出限浓度为0.05~1.0ng/m L。结论本方法简单、快速、灵敏、准确,适于羊肉汤中是否添加罂粟壳的检验。

UFLC-MS/MS检测胡桃楸不同部位有效成分的含量

目的建立超快速高效液相色谱串连三重四级杆质谱法(UFLC-MS/MS)测定胡桃楸不同部位中6种化学成分(原儿茶酸、绿原酸、丁香酸、阿魏酸、鞣花酸、胡桃醌)的方法。方法采用UFLC-MS/MS法及负离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:Aglient C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱;流动相0.2%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱;流速0.6 mL·min^-1,进样量10μL,柱温为25℃。结果胡桃楸中6种化合物在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.9995);回收率和RSD分别在97.72%~98.65%和1.05%~1.93%内。结论建立的UFLC-MS/MS法对胡桃楸不同部位进行定量分析,方法简便、快捷、准确。

UFLC-IT-TOF-MS分析婴幼儿配方乳粉中的12种雌孕激素

建立了婴幼儿配方乳粉中12种雌孕激素的超快速液相色谱-离子阱-飞行时间串联质谱(UFLCIT-TOF-MS)测定方法。乳粉样品在37℃水溶解、酶解后,经乙腈提取,HLB柱净化,Shim-pack XRODSⅡ和HSS T3色谱柱梯度分离,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式对雌激素进行分析,正离子模式对孕激素进行分析。12种雌孕激素在1.0~200μg/L范围内线性关系均良好(r^2>0.998),平均回收率为79.9%~110.4%,相对标准偏差为2.8%~8.0%,检出限和定量下限分别为0.3~0.6μg/kg及0.9~1.8μg/kg。实验考察了12种雌孕激素精确质量数的测定能力并验证了雌酮的三级裂解。

健康献血者血浆可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性及阴性中表达差异的分析研究

目的分析健康献血者血浆中可溶性糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)表达量与抗-M及抗-“Mia”抗体的相关性。方法收集2022年2月9日~2023年2月15日的健康献血者血浆:不规则抗体阴性的NN型(Ⅰ组,n=118)与MM型(Ⅱ组,n=51),抗-M抗体阳性的NN型(Ⅲ组,n=145)与抗-“Mia”抗体阳性的随机型(Ⅳ组,n=87),分别检测4组人不同个体血浆中GPA的含量,t检验分析GPA表达量的差异。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GPA平均含量分别为:9.941±0.252,10.97±0.256,5.139±0.129和4.28±0.139ng/ml。Ⅰ组与Ⅱ组的GPA平均含量较高,Ⅲ组与Ⅳ组的GPA平均含量较低,显示GPA平均含量在不规则抗体阴性(Ⅰ组与Ⅱ组)的血浆中较高,在抗-M与抗-“Mia”抗体阳性(Ⅲ与Ⅳ组)的血浆中较低,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论含有抗-M与抗-“Mia”抗体的健康献血者血浆中GPA含量明显低于抗体阴性的群体。该研究结果为深入探讨血浆中GPA是否有中和抗-M与抗-“Mia”抗体的能力,提高疾病诊断与安全输血打下基础。

抗-M致胎儿新生儿溶血病实验室检测及预防策略分析

目的分析血清学检测结果在抗-M致胎儿新生儿溶血病(HDFN)诊断和治疗中的应用,探讨HDFN预防策略。方法对2017年1月—2023年12月本实验室确诊的12例抗-M引起的HDFN血清学检测结果进行回顾性分析,包括母亲和患儿的血型鉴定,血清总胆红素、血红蛋白、抗体效价检测,新生儿溶血3项实验。收集患儿和母亲的临床资料,包括妊娠史、输血史、产前抗体检测、宫内输血史、分娩孕周,并随访患儿预后。结果12例抗-M引起的HDFN中,患儿母亲均为RhD+NN表型,患儿均为RhD+MN表型,母子MN血型均不相容。在ABO血型系统中,母子ABO血型不相容占41.7%(5/12)。患儿母亲皆无输血史,在4℃检测效价中位数32,37℃效价中位数4。3例患儿母亲有多次宫内输血史,发生率为25%(3/12)。1例为首胎妊娠异常,占比8.3%(1/12),7例为异常妊娠流产,不良孕产史发生率58.3%(7/12)。6例患儿母亲早产,占比50%(6/12)。3例患儿母亲定期产检,并鉴定抗体特异性,占比25%(3/12)。12例患儿游离抗体在4℃检测效价中位数6,37℃效价中位数2。2例患儿抗-M在37℃检测无反应,阴性率16.7%(2/12)。患儿直抗阳性率8.3%(1/12),放散阳性率16.7%(2/12)。血红蛋白最低值中位数75 g/L,12例患儿均接受了输血治疗。总胆红素峰值中位数157.5μmol/L,均未达到换血阈值。患儿迟发性贫血率16.7%(2/12),患儿出生后死亡率8.3%(1/12),11例患儿预后无生长和神经发育迟缓情况。结论抗-M能引起严重的HDFN,也可发生于第1胎,抗体效价强度与疾病的严重程度不相关,容易引起迟发性贫血,应根据抗-M血清学特征和临床症状定期监测,及时干预治疗。

单核细胞单层试验在预测IgG抗-M相关胎儿新生儿溶血病中的应用

目的探讨单核细胞单层实验(monocyte monolayer assay,MMA)是否能够用于IgG抗-M相关胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of fetus and newborn,HDFN)的预测。方法选取8例含有IgG抗-M的孕妇并采集血浆标本,其中有胎儿水肿等严重临床症状及无明显临床症状的各4例;8份血浆用二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)灭活,与M抗原阳性红细胞孵育致敏后,将致敏红细胞与单核细胞混合进行吞噬试验,同时设立阳性及阴性对照,并计算吞噬率;采用t检验对2组吞噬率进行比较。结果4例发生严重抗-M相关HDFN的孕妇的MMA吞噬率分别为15.37%、13.05%、9.17%和24.50%,均值为15.52%;检出IgG抗-M但未发生HDFN的孕妇,其MMA吞噬率分别为8.74%、11.07%、5.12%和6.23%,均值为7.79%,2组吞噬率无差异(P>0.05)。2组吞噬率分别与阴性对照比较均无差异(P>0.05),但均明显低于阳性对照(P<0.05)。结论IgG抗-M介导单核细胞吞噬的能力较低,提示抗-M导致胎儿水肿的机制可能并非红细胞被吞噬破坏而发生的溶血,因此体外单核细胞单层实验可能不适用于IgG抗-M相关HDFN的预测。对于检出IgG抗-M的孕妇,现仍需通过定期监测胎儿大脑中动脉血流,来判断胎儿宫内贫血情况。

基于UFLC-Triple TOF-MS/MS的壮药战骨化学成分分析

目的应用超快速高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱(UFLC-Triple TOF-MS/MS)对壮药战骨的化学成分进行分析。方法以Phenomenex Kinetex 2.6 C_(18) 100A(3.0 mm×150 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),采用配有ESI电喷雾源的高分辨三重四级杆飞行时间质谱,分别在正、负模式下进行检测。结果根据正负模式下获得的一级和二级质谱数据,通过对照品、准确分子量、裂解碎片对照及参考相关文献,确证了8个化合物(红景天苷、儿茶素、维采宁-2、夏佛塔苷、维采宁-3、木犀草苷、柚皮素、芹菜素),指认了25个化合物(包括4个苯丙素类和21个黄酮类)。结论系统研究了壮药战骨的化学成分,阐明了战骨的化学物质基础。

UFLC-MS/MS法测定胎盘灌流液中艾司西酞普兰浓度

目的:建立超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)法测定人胎盘灌流液中艾司西酞普兰浓度。方法:以格列苯脲为内标,色谱柱为SynergiTM Hydro-RP 80?分析柱(50 mm×2.0 mm,4.0μm),样品前处理采用甲醇沉淀蛋白法,流动相A为0.1%甲酸-水,流动相B为0.1%甲酸-乙腈,流速为0.5 ml·min^(-1),梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式,多离子反应监测(MRM),艾司西酞普兰和格列苯脲的定量离子对分别为m/z 325.119/262.100和494.200/369.100。结果:胎盘灌流液中艾司西酞普兰浓度在2.25~250 ng·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9974),平均回收率97.81%~107.56%,基质效应81.15%~87.10%,批内及批间精密度RSD均小于15%,稳定性考察结果良好。结论:所建方法快速、灵敏且特异性强,适用于胎盘灌流液中艾司西酞普兰浓度的测定。

UFLC-MS/MS法同时测定肺宁颗粒中6种化学成分

目的建立UFLC-MS/MS法测定肺宁颗粒中6种化学成分(绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸、金丝桃苷及异槲皮苷)的方法。方法采用UFLC-MS/MS法及负离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:Aglient C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.2%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱;进样量:10μl,流速:0.6ml·min-1,柱温:25℃。结果肺宁颗粒中6种化合物在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.9995);回收率和RSD分别在96.61%~103.5%和1.05%~1.93%范围内。结论本研究建立的UFLC-MS/MS法对肺宁颗粒进行定量分析,方法简便、快捷、准确。