基于UHPLC-QTOF/MS的博落回花中生物碱类化学成分研究

目的:利用高通量、高灵敏和快速的UHPLC-QTOF/MS技术开展博落回花中的微量生物碱类成分的定性研究,阐明博落回花中生物碱类化学成分的类别和种类,为博落回植物的安全性提供科学依据。方法:采用UHPLC-QTOF/MS技术,借助数据挖掘方法发现和识别出博落回花中的微量生物碱类化学成分,对其高分辨一级和二级质谱数据进行解析,并与数据库进行比对,完成对微量生物碱类化学成分的结构推测和确认。结果:从博落回花中共鉴定了22个生物碱类化合物,主要化学成分为普洛托品类生物碱(原阿片碱、别隐品碱)和四氢原小檗碱类生物碱(N-甲基刺罂粟碱、N-甲基四氢小檗碱)。结论:该研究结果为博落回植物的更全面、客观的品质评价和安全性评价提供了充分的科学依据。

基于UHPLC-QTOF/MSE代谢组学方法研究文冠果不同部位化学成分

目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC-QTOF/MSE)技术,建立文冠果不同部位化学成分的快速识别模式,并结合代谢组学方法分析识别文冠果的木、根和叶3个部位之间化学成分的特征差异标志物,探讨文冠果的根和叶能否替代木发挥治疗作用。方法采用基于UHPLC-QTOF/MSE的代谢组学技术对文冠果的木、根和叶3个部位的化学成分进行研究。结果从文冠果不同部位中共鉴定出57个化学成分,经主成分分析和偏最小二乘法判别分析,文冠果的木、根和叶被明显分为3类,表明文冠果不同部位之间化学成分差异显著,识别出特征差异标志物15个。其中,木中具有含量较高的黄酮苷元类化合物,是其具有活血、抗炎、免疫调节和抗氧化等临床疗效的物质基础,但这类化合物在根和叶中含量均较低,根主要含有三萜皂苷类化合物,叶主要含有黄酮苷类化合物。结论文冠果的根和叶无法替代木的药用价值,本文建立的分析方法为文冠果不同部位的快速鉴定、质量控制与临床合理应用提供了基础。

基于UHPLC-QTOF-MS的兰州百合植物化学成分鉴定

为探究地理标志产品兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)的植物化学成分,以甘肃省五个主要产区(兰州市榆中县、兰州市七里河区、定西市临洮县、定西市渭源县、临夏市永靖县)的兰州百合鳞茎为研究对象,基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法的非靶向代谢组学技术鉴定其植物化学成分。结果表明,在兰州百合鳞茎中初步鉴定出62种植物化学成分,包含谷胱甘肽等22种氨基酸、多肽及其衍生物,溶血磷脂酰胆碱等9种油脂和磷脂类,鼠李糖等7种糖类,阿魏酸、咖啡酸等7种酚酸类,山奈酚等4种黄酮类,核黄素、维生素C等4种天然维生素,阿魏酰腐胺等3种酚胺类,大丁苷等2种香豆素类,葫芦巴碱等2种生物碱,萜类组分松香酸和三萜皂苷类组分刺五加苷E。本研究丰富了兰州百合植物化学成分的现有数据,为兰州百合的研究与利用提供了科学依据。

基于Random Forest和UHPLC-QTOF-MS^(E)对不同来源龟甲基原的鉴定

目的:基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS^(E))分析并经数字量化处理,结合随机森林(Random Forest,RF)算法构建数据辨识模型,以实现中华草龟、巴西龟、台湾龟、鳄鱼龟、鳖甲基原的数字化鉴定。方法:经样品预处理后,对不同来源、不同批次的龟甲进行UPLC-QTOF-MS^(E)分析,并以混合样品为基准进行峰位校正、提取并经量化处理,获取反映多肽离子信息的精确质量数-保留时间数据对(Exact Mass Retention Time,EMRT)。然后基于信息增益率的特征筛选获取重要多肽离子信息,结合随机森林(RF)算法进行数据建模,同时基于内部交叉验证中的准确率(Acc)、精确率(P)、曲线下面积(AUC)等参数进行模型评价。最后基于最优模型进行龟甲基原的鉴定验证分析。结果:基于信息增益率的特征筛选,得到71个特征多肽信息,建立的RF模型具有优秀的辨识效果,准确率、精确率以及AUC均大于0.950且外部鉴定验证的正确率为100.0%。结论:基于UHPLC-QTOF-MS^(E)分析,并结合RF算法能够高效准确地实现不同来源龟甲基原的数字化鉴定,可为龟甲的质量控制及基原考证提供参考和帮助。

基于UHPLC-QTOF-MS的薜荔水提物的化学成分分析及Beas-2b细胞抗衰老活性

采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间-质谱(UHPLC-QTOF-MS)技术对薜荔果、茎、叶中化学成分进行分析,并对其缓解由香烟烟雾提取物诱导的肺部细胞衰老能力进行研究。以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2μL·min^(-1);采用电喷雾电离原(ESI),正负离子扫描模式进行数据采集,通过Msdial进行数据库比对和参考已报道文献对薜荔果、茎和叶3种部位的水提物进行化学成分表征。建立香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞Beas-2b衰老模型,测定薜荔果、茎、叶3种水提物对细胞活性及细胞衰老的影响。结果成功鉴定出薜荔果、茎、叶水提物中的33种化学成分,发现薜荔3种水提物在适宜质量浓度范围内对Beas-2b细胞无明显毒性,50μg·mL^(-1)的薜荔茎和叶水提物对细胞衰老有一定缓解作用。结果表明UHPLC-QTOF-MS法灵敏度高,分析快速,结果可靠,能够全面快速分析和鉴定薜荔不同部位水提物中的化学成分,薜荔具有潜在的抗细胞衰老能力。

温阳化浊退黄方治疗慢加急性肝衰竭的作用机制:基于UHPLC-QTOF-MS和网络药理学方法

目的运用UHPLC-QTOF-MS和网络药理学探讨温阳化浊退黄方治疗慢加急性肝衰竭(Acute-on-chronic liver failure,ACLF)的作用机制,并通过实验验证筛选出的靶点。方法利用UHPLCQTOF-MS分析温阳化浊退黄方的活性成分,利用网络药理学方法筛选温阳化浊退黄方活性成分对应的靶点和ACLF靶点,构建蛋白互作网络(PPI)筛选核心靶点,对靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,利用Cytoscape构建活性成分-靶点-通路网络图,通过动物模型实验验证温阳化浊退黄方治疗ACLF的作用机制。结果UHPLC-QTOF-MS共鉴定出123个化合物,经TCMSP筛选得到12种活性成分,TCMSP和Swiss target Prediction数据库取交集共获得181个温阳化浊退黄方预测靶点;得到ACLF靶点2019个;温阳化浊退黄方和ACLF共有靶点99个。KEGG通路分析筛选了147条相关信号通路,显示PI3K/Akt信号通路、VEGF信号通路、乙型肝炎、细胞凋亡、MAPK信号通路等可能在温阳化浊退黄方治疗ACLF的过程中起关键作用。动物实验结果显示,温阳化浊退黄方能够缓解ACLF大鼠肝损伤,下调AKT1、MTOR和RAF1关键靶蛋白在ACLF大鼠肝脏中的表达,验证了网络药理学的预测结果。结论温阳化浊退黄方通过多成分、多靶点、多通路协同作用治疗ACLF,为后续研究提供参考依据。

UHPLC-QTOF-MS高效检测CL-20合成过程的杂质

为了快速准确检测和分析六硝基六氮杂异伍兹烷(CL-20)合成过程中产生的中间体和杂质,控制CL-20纯度或品质,保证其感度及爆轰性能,采用核磁共振(NMR)和超高高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS)技术快速、高效分析检测了CL-20典型合成工艺过程中组分及杂质。结果表明,六苄基六氮杂异伍兹烷(HBIW)中的杂质为1,3-二苄基咪唑,四乙酰基二苄基六氮杂异伍兹烷(TADB)中的杂质为低酰基化的三乙酰基三苄基六氮杂异伍兹烷(TATB),四乙酰基六氮杂异伍兹烷(TAIW)中的杂质为未完全反应的TADB,CL-20中的杂质为未完全硝化的一乙酰基五硝基六氮杂异伍兹烷(MPIW)和二乙酰基四硝基六氮杂异伍兹烷(DATN)。

基于UHPLC-QTOFMS的黄芩汤化学成分和大鼠入血成分分析

建立了一种超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF MS)联用鉴定黄芩汤化学成分及大鼠灌胃给药后入血成分的方法。采用ACQUITY UPLC XBridge BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.5µm),以0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱;使用电喷雾离子源正负离子模式采集碎片信息。依据质谱裂解规律,结合对照品、文库比对分析,初步鉴定了黄芩汤中68种化学成分和35种入血成分,并讨论了黄芩素、黄芩苷、芍药苷、甘草苷等的治疗潜力。该方法高效、稳定、灵敏,可为黄芩汤的药效物质基础研究提供参考,也可用于其他复方的成分分析,有助于提升传统中药中小分子药物发现的效率。

UHPLC-QTOF/MS^E与代谢组学技术对北五味子炮制前后化学成分迁移研究

利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-QTOF/MS^E)技术,快速搜寻并鉴定北五味子生品与其炮制品之间的差异成分,从化学成分的角度为传统中药炮制理论的现代化研究提供物质基础。利用时间依赖型的质谱数据扫描模式(MS^E)采集超高精度的样品数据,结合代谢组学技术分析采集到的数据,快速筛选并鉴定潜在的化学标志物,研究炮制前后该类成分的迁移。在北五味子生品、酒制品和醋制品中共鉴出12个化学标志物。其中,6-O-苯甲酰戈米辛O、五味子酯乙、五味子酯丙、五味子酯丁和新南五味子酸在生品中的含量最高;五味子甲素、乙素、丙素、戈米辛D及戈米辛T在酒制品中的含量最高;五味子酯甲和五味子醇甲在醋制品中含量最高。炮制(酒制、醋制)过程会使五味子的化学成分发生显著变化,为不同炮制品的功效与临床应用提供依据。

基于UHPLC-QTOF/MS代谢组学技术比较分析半枫荷不同组织化学成分

本文以半枫荷(Semiliquidambar cathayensis)不同组织为研究对象,采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF/MS)代谢组学手段检测其化学成分种类,通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法找出各组织间的差异代谢物,依据精确分子质量测定和相关文献信息对差异代谢物进行鉴定。结果显示:半枫荷叶片、茎和根中共检测到169个代谢物,结合PCA法综合判别出38个显著差异代谢物。差异代谢物在不同组织中表达模式不同:叶片中表达上调的差异代谢物较多,其次是根,再次是茎。不同组织中主要共有差异代谢物有5个,分别为柠檬酸、山奈酚3-O-桑布双糖苷、3-β-羟基齐墩果酸丁二酸单酯、1-O-乙酰基-α-麦芽糖、胞苷;叶片与根、茎相比主要差异代谢物有17个,主要为黄酮类、萜类和多糖类化合物;茎与叶片、根相比主要差异代谢物有4个,包括毛蕊花糖苷和β-熊果苷;根与叶片、茎相比主要差异代谢物有4个,包括香草酸、山茶苷B和三癸酸甘油酯。半枫荷不同组织中差异萜类化合物主要为三萜化合物,齐墩果酸等三萜化合物是区分半枫荷不同组织的重要差异性物质;不同种类的黄酮类化合物在半枫荷不同组织分布情况也不相同,大部分差异黄酮类化合物在叶片中富集明显。

UHPLC-QTOF-MS联合网络药理学及分子对接探讨青阳参总苷治疗社会挫败的物质基础及作用机制

目的运用UHPLC-QTOF-MS和网络药理学-分子对接技术,探讨青阳参总苷治疗社会挫败的物质基础和潜在的作用机制。方法首先,采用UHPLC-QTOF-MS鉴定青阳参总苷化学成分。其次,运用Pubchem下载青阳参总苷化学成分2D结构后,利用Swiss Target Prediction数据库预测其靶点;从TTD、GeneCards、CTD数据库获取社会挫败相关治疗靶点;通过Venny平台获取两者的交集靶点;采用Cytoscape构建“药物-活性成分-靶点-疾病”网络;运用String数据库构建蛋白互作(PPI)网络后,结合Cytoscape分析得交集靶点排名;使用DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用AutoDock vina软件进行分子对接验证。最后,构建社会挫败小鼠模型,采用ELISA法检测小鼠血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)含量,HE染色观察小鼠海马组织神经细胞病理变化。结果从青阳参总苷共鉴定152个化学成分。预测及筛选得到丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、单胺氧化酶A(MAOA)、多巴胺受体D3(DRD3)等26个青阳参总苷治疗社会挫败潜在作用靶点,对应85个青阳参总苷活性成分;富集分析得到45个GO注释条目(P<0.01)、11条KEGG信号通路。分子对接发现青阳参苷元、白桦脂酸、绿原酸等20个活性成分与AKT1、DRD4、DRD2、DRD3等10个核心靶蛋白均可自发结合。动物实验表明,与正常对照组相比,模型对照组小鼠血清中5-HT、DA含量均明显降低(P<0.05);小鼠海马组织神经细胞排列疏松,有明显的细胞丢失。与模型对照组相比,青阳参总苷各剂量组小鼠血清中5-HT、DA含量均显著升高(P<0.05,P<0.01);青阳参总苷中、高剂量组小鼠海马组织神经细胞间隙减小,且排列较为整齐。结论青阳参总苷对社会挫败具有治疗作用。主要药效物质为青阳参苷元、白桦脂酸、绿原酸等,可通过多靶点、多通路发挥抗社会挫败作用。

基于UHPLC-QTOF/MS和MetaboLynx分析的蜜炙对叶百部血清药物化学研究

研究蜜炙对叶百部体内作用的物质基础,并建立蜜炙对叶百部体内外成分的UHPLC-QTOF/MS方法,借助Metabo Lynx数据处理技术提取口服蜜炙对叶百部后大鼠血浆中血中移行成分微量信息,鉴定主要血中移行成分及其代谢产物。鉴定与表征了大鼠血中移行成分40个,包括12个原形成分和28个代谢产物,入血成分及代谢产物可能为蜜炙对叶百部体内直接作用的药效成分,蜜炙对叶百部血清药物化学的表征为阐明其蜜炙炮制的药理作用及其机制提供了依据。

基于UHPLC-QTOF/MS的植物代谢组学技术鉴别林下山参的不同部位

为了对林下山参的不同部位进行鉴别,本研究采用基于UHPLC-QTOF/MS的植物代谢组学技术,并结合PCA和OPLS-DA分析方法对林下山参叶、主根、侧根、芦头等4个部位的代谢物进行研究。PCA得分图显示林下山参叶、主根、侧根和芦头被明显分为4类,表明林下山参不同部位之间化学成分差异显著。从林下山参4个不同部位中共检测到81个主要代谢物,其中包括林下山参叶与根茎(主根、侧根、芦头)之间的差异标志物9个,林下山参主根与侧根、主根与芦头之间的差异标志物各7个,通过将这些代谢物的保留时间、精确分子量及碎片离子与对照品和相关人参属文献报道的化合物进行匹配,最终鉴定或初步推断出70个代谢物。本研究建立了一种快速、准确、可靠的林下山参不同部位的鉴别方法,同时也为其他中药材质量评价提供了一种新的思路。

基于UHPLC-QTOF/MS技术的生、醋五味子醇提物在大鼠血浆、胆汁、尿液、粪便中药物原形成分及其代谢产物的分析鉴定

采用UHPLC-QTOF/MS技术研究五味子生品及炮制品(醋制)的醇提取物在大鼠体内药物原形成分及其代谢产物的差异性,利用质量亏损滤过(MDF)策略以及动态背景消除(DBS)、加强峰提取(EPL)等数据处理技术进行分析,鉴定大鼠灌胃给予生、醋五味子提取物后血浆、尿液、胆汁及粪便中原形成分及其代谢产物。为了更好地与五味子保肝效应联系起来,本实验建立了大鼠急性酒精性肝损伤模型,首次进行病理状态下动物体内五味子木脂素的代谢研究。五味子醇提物中主要成分是木脂素,包括五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酚、戈米辛G、戈米辛J等。木脂素在大鼠体内主要发生去甲基化、羟基化、氧化等代谢转化,最终在生、醋五味子组中共鉴定出6种木脂素原形成分及它们的20种代谢产物。

基于UHPLC-QTOF/MS的细胞代谢组学对丹参和知母防治阿尔茨海默病的药效比较研究

采用细胞代谢组学策略比较丹参和知母提取液对AD细胞模型的保护作用并探讨其保护机制。通过冈田酸诱导SH-SY5Y细胞建立Tau蛋白异常磷酸化的AD细胞模型,通过细胞增殖-毒性实验评价丹参和知母提取液对模型的保护作用,运用代谢组学策略探寻与AD相关的潜在生物标志物,比较研究丹参和知母对潜在生物标志物的影响。结果丹参提取液对该AD细胞模型具有一定的保护作用(P<0.05),而知母提取液则无明显保护作用(P>0.05);基于UHPLC-QTOF/MS的细胞代谢组学筛选出45个与AD细胞模型显著相关的差异代谢物,主要涉及12条代谢通路。给予丹参提取液后30个差异代谢物出现回调,而知母提取液干预后7个代谢物出现回调,丹参回调代谢物的范围更广且能覆盖所有知母回调的代谢产物。表明丹参和知母提取液对Tau蛋白异常磷酸化AD细胞模型均具有一定的保护作用,但是丹参干预后能显著提高细胞活力,保护作用更佳,作用机制可能与调节冈田酸诱导的AD细胞模型紊乱的代谢通路有关。

基于UHPLC-QTOF/MS^(E)法研究苓桂术甘汤的主要化学成分

建立了UHPLC-QTOF/MS^(E)法在正、负离子2种模式下检测苓桂术甘汤中的主要化学成分,并结合自建数据库和在线数据库,通过准确相对分子质量、碎片离子信息、裂解规律和对照品比对等方式鉴定苓桂术甘汤中化学成分。同时,应用UNIFI^(TM)的二元比较功能实现了各化合物的归属。结果显示,共从苓桂术甘汤中鉴定出100个化合物,包括6个氨基酸类、4个糖类、11个小分子有机酸类、27个黄酮类、40个皂苷类和12个其他类成分,较为全面地反映了苓桂术甘汤中具有药理活性的化学物质和各个药材的特征性成分,为苓桂术甘汤中化学物质的快速鉴定、质量控制与临床合理应用提供了数据参考。

甘草抗炎活性质量标志物筛选

目的筛选甘草抗炎活性质量标志物。方法脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,测定不同等级药材NO抑制率。建立UHPLC-QTOF-MS指纹图谱,鉴定化学成分,绘制热图,进行正交偏最小二乘判别分析。结果一等、二等药材NO抑制率高于统货(P<0.05,P<0.01)。47批药材指纹图谱中有211个共有峰,共鉴定出56个化合物,包括17个皂苷类、6个黄酮类、8个黄烷酮类、4个查尔酮类、12个异黄酮类、9个其他类。一等、二等药材中异黄酮类、香豆素类、山柰酚、甘草黄酮醇相对含量高于统货,野生品中黄烷酮类、查尔酮类、皂苷类相对含量高于栽培品。新甘草苷、异甘草苷、山柰酚、hedysarimcoumestan E、甘草皂苷C2、甘草芳香豆素、甘草新木脂素、甘草瑞酮为质量标志物。结论该方法稳定可靠,对甘草质量控制具有参考价值。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS技术分析玳玳花的化痰活性成分

目的:利用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术快速分析玳玳花的化痰的活性成分。方法:以酚红排出量筛选玳玳花不同提取部位祛痰的作用,岛津ARC-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.7μm),联合质谱分析有效部分的化学成分。结果:玳玳花乙醇提取物具有显著的化痰作用,提取物中初步鉴定了32个化合物,主要为黄酮类和有机酸类。结论:建立了一种基于化痰活性结合UHPLC-QTOF-MS/MS分析鉴定玳玳花的化学成分的快速方法。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS的岭南山竹子果皮化学成分研究

目的:通过超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)对岭南山竹子(Garcinia oblongifolia)果皮的化学成分进行研究。方法:将新鲜的岭南山竹子果皮用70%乙醇回流提取,减压回收溶剂,冷冻干燥得到提取物后,重新溶解到50%甲醇水溶液,经0.22μm微孔滤器过滤进入UHPLC-QTOF-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,并在全扫描模式进行飞行时间质谱鉴定。结果:通过对高分辨一级和二级质谱数据进行解析,结合参考文献数据并与数据库进行比对,共鉴定了13个化合物,主要为苯甲酮类化合物。结论:该研究结果为科学研发岭南山竹子提供了一定的科学依据。

基于UHPLC-QTOF MS的PLA吸管中未知物的筛查识别

该文采集了不同的PLA吸管样品,通过迁移实验模拟PLA吸管的不同使用场景,再采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC-QTOFMS)技术分析PLA吸管向食品模拟液中迁移的化学物质,通过靶向筛查与非靶向筛查相结合的方式共识别出30个迁移物,不同吸管样品之间以及不同食品模拟液之间的迁移物有所差异。识别的迁移物可分为低聚物和添加剂两类,其中低聚物可视为非有意添加物,主要为聚丁二酸丁二醇酯(PBS)和丁二醇-己二酸-对苯二甲酸共聚物(PBAT),以环状结构为主;添加剂包括抗氧剂、润滑剂和增塑剂,以及与之相关的非有意添加物(原料、杂质、副反应产物等)。所有迁移物中,仅5种在GB9685-2016的肯定列表中,其余物质采用毒理学关注阈值(TTC)方法结合Cramer决策树进行危害评估,大部分被判定为CramerⅢ类(高毒)物质,需予以更多关注以确保PLA吸管使用安全。