白色念珠菌耐药相关UPC2基因的研究进展

本文综述了白色念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药机制、UPC2基因结构特征、UPC2基因编码产物的功能,指出白色念珠菌UPC2基因编码产物能对ERG基因以及某些药物外排泵蛋白基因表达发挥调节作用,从而诱导白色念珠菌对唑类药物产生耐药性。

氟康唑耐药白色念珠菌upc2基因转录对mdr1转录的影响

目的探讨氟康唑耐药白色念珠菌upc2基因转录对mdr1转录的影响。方法采用常规真菌分离鉴定法分离鉴定46株白色念珠菌,纸片扩散法测定其对5种唑类药物的敏感性,微量稀释法测定氟康唑的最低抑菌浓度(MIC),依据氟康唑MIC值将白色念珠菌分为三组(氟康唑敏感株、剂量依赖敏感株、耐药株)。应用实时荧光定量PCR检测各组白色念珠菌mdr1基因转录水平和ups2基因转录水平。采用Pearson相关分析mdr1基因转录水平和ups2基因转录水平之间的关系。结果耐药组白色念珠菌的upc2以及mdr1基因转录的相对倍数分别为(5.46±2.34)和(4.51±2.53),均高于敏感组白色念珠菌的(1.07±0.10)和(1.00±0.00),也高于剂量依赖敏感组白色念珠菌的(1.57±0.41)和(1.06±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05);耐药组白色念珠菌的mdr1基因转录水平与upc2基因转录水平之间呈正相关(r=0.76,P<0.01)。结论白色念珠菌通过上调upc2基因转录水平而促进mdr1基因转录,进而导致白色念珠菌对氟康唑耐药。

Waters ACQUITY UPC^2仪器结构和性能特点

Waters超高效合相色谱(Ultra Performance Convergence Chromatography,UPC2)技术集合SFC和UPLCTM的技术优点。泵系统的传输性能精准(精度0.001mL/min);样品室温控4~40℃,应用nano阀技术的进样器可在0.1~50μL内调控,进样线性>0.999、进样交叉污染<0.005%;色谱柱管理器可容纳并自动切换6根色谱柱,色谱柱具有eCordTM、主动预加热器功能(温控精度±0.1℃);可连接PDA、ELSD以及质谱等检测器。结合亚2μm颗粒填料技术,UPC2系统在以下应用方面分析结果优异:手性化合物、脂质、异构体、天然产物提取物等复杂体系,正相HPLC取代技术,GC、反相HPLC的正交、互补技术。

利用ACQUITY UPC^2系统分离氯菊酯(permethrin)非对映体异构体

公众对杀虫剂使用的关注日益增长，目前使用的杀虫剂中25％为手性化合物．在这些杀虫剂中，手性在药效、毒性、代谢特性和环境方面起着重要的作用．因此，对立体选择性分离技术和分析测定杀虫剂对映体纯度的需要正在不断增长．

Determination of Enantiomers in ET-26-HCl by Ultra Performance Convergence Chromatography

[Objectives]To establish an ultra performance convergence chromatography(UPC2)method to determine the content of enantiomers in(R)-2-methoxyethyl1-(1-phenylethyl)-1H-imidazole-5-carboxylate hydrochloride(ET-26 HCl).[Methods]ChiralpakAD-3 chromatographic column(4.6 mm×100 mm,3μm)was used,with 0.1%diethylamine methanol solution-supercritical carbon dioxide(1∶9)as mobile phase;flow rate 2.0 mL/min;back pressure 2000 psi,detection wavelength 240 nm,and column temperature 35℃.[Results]ET-26-HCl was completely separated from the enantiomers,and the linear relationship was good;the detection limit was 1.5μg/mL.[Conclusions]This method is suitable for the determination of the content of enantiomers in ET-26-HCl.

超高效合相色谱法快速测定婴幼儿辅食果泥中甲氰菊酯对映体的残留量

在5 g婴幼儿辅食果泥样品中加入乙酸乙酯20 mL和氯化钠3.0 g,涡旋2 min,离心5 min,用20 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并两次上清液,于40℃减压浓缩至近干,加入5 mL甲醇溶解残渣。所得溶液过活化好的C18固相萃取柱,收集全部流出液,于40℃氮吹至近干,加入1 mL正庚烷,涡旋1 min溶解残渣,过0.22μm有机相滤膜,滤液用超高效合相色谱法(UPC2)分析。以Acquity Trefoil AMY1色谱柱为固定相,以不同体积比的含0.5%(体积分数)氨水的甲醇溶液和超临界二氧化碳的混合溶液为流动相进行梯度洗脱,在230 nm波长下检测(-)-甲氰菊酯和(+)-甲氰菊酯,外标法定量。结果显示,甲氰菊酯对映体的质量浓度在1.0~20.0 mg·L^(-1)内和对应的峰面积呈线性关系,测定下限(10S/N)均为0.2 mg·kg^(-1)。对阴性果泥样品进行3个浓度水平的加标回收试验,两种目标物的回收率为81.4%~106%,测定值的相对标准偏差(n=6)为4.1%~7.2%。方法用于20份果泥样品的分析,仅在1份梨泥样品中检出(-)-甲氰菊酯(0.25 mg·kg^(-1))和(+)-甲氰菊酯(0.22 mg·kg^(-1))。

免疫亲和固相萃取-超高效合相色谱-串联质谱法同时测定牛奶中6种玉米赤霉醇类化合物残留

建立了免疫亲和固相萃取(IAC-SPE)-超高效合相色谱-串联质谱(UPC2-MS/MS)同时测定牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮和玉米赤霉酮残留的分析方法。样品用去离子水稀释,经IAC-SPE富集净化后,采用Waters ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱(50 mm×3.0 mm,1.7μm)分离,以超临界CO_2和0.1%(v/v)甲酸甲醇溶液为流动相,经梯度洗脱后在ESI-模式下检测。经过稀释离心的牛奶样品采用免疫亲和柱净化后没有明显的基质效应,6种目标化合物在1～200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^2)≥0.995 7;6种目标化合物在3个加标水平下的平均回收率为75.9%～106.5%,日内和日间精密度均≤11.4%。该法专属性好,操作简便,有机溶剂使用量小,与已有的样品测定方法比较更绿色环保,可用于牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮的残留检测。

超高效合相色谱-质谱法快速分离测定4种单脂肪酸甘油酯

采用超高效合相色谱-质谱(UPC^2-MS)技术,建立了一种快速分离植物油单脂肪酸甘油酯中单软脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯和单亚油酸甘油酯4种单甘酯的测定方法。以葵花籽油为原料,通过脂肪酶催化甘油解反应制备单甘酯。样品用正己烷/异丙醇(体积比7∶3)溶解,采用超临界CO2-甲醇/乙腈(体积比1∶1)梯度洗脱,经ACQUITY UPC2BEH^2-EP(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,通过质谱检测器在正离子电喷雾模式下对目标化合物进行分析,外标法定量。结果表明,4种单甘酯化合物在线性范围内线性关系良好,线性相关系数(R^2)均大于0.9983;目标物的检出限(S/N≥3)为0.036~0.093 mg/L;3个加标水平下的回收率在88.50%~110.00%之间,相对标准偏差为1.01%~4.04%。本方法具有检出限低、分析速度快、分离效果好、分析成本低等优点,为脂肪酸酯类物质的分离测定提供了新的色谱技术平台。

白念珠菌唑类药物耐药相关转录因子研究进展

近年来白念珠菌的感染率呈逐年上升趋势,随着唑类药物的广泛应用,耐药菌株不断增多,已成为临床治疗的一大难题。白念珠菌的耐药机制主要与ERG11基因的突变和过表达、药物外排泵相关基因表达增多及生物膜的形成等有关,由于转录因子是耐药基因表达的关键调节因子,关于锌簇转录因子与耐药关系的研究越来越多,如TAC1、MRR1、MRR 2、UPC 2、NDT 80等,其点突变可引起某些耐药基因的过表达而介导耐药,该领域研究已成为热点,该文就此研究进展做一概述。

超高效合相色谱法测定火龙果果酒中游离氨基酸的含量

建立超高效合相色谱测定食品中游离氨基酸的方法。选取Acquity UPC2Torus Diol(3.0 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相由A(超临界二氧化碳)和B(V(甲醇)∶V(乙腈)=1∶1)组成,2.5 mmol/L乙酸铵作为改性剂,流速2.0 m L/min,紫外检测器波长280 nm,补偿范围330~430 nm,背压1 800 psi。结果表明,该方法具有良好的线性(R2=0.999 0~0.999 8),分离度高于1.22,检出限和定量限范围分别为23~57 ng/L和70~178ng/L,线性范围为20~400μg/m L,加标回收率在85.6%~101.2%之间。该方法被成功用于火龙果酒样品中游离氨基酸含量的测定,也为分析其他食品基质中游离氨基酸分布情况提供了新的方法。

超高效合相色谱-串联质谱法测定口含烟中对羟基苯甲酸酯

建立了QuEChERS-超高效合相色谱-串联质谱法(UPC2-MS/MS)测定口含烟中对羟基苯甲酸酯类防腐剂。采用乙腈提取,基质分散固相萃取净化,UPC2 TM HSS C18SB色谱柱(3.0mm×100mm×1.8μm)分离,内标法定量。优化后的对羟基苯甲酸酯的合相色谱分离条件为:主要流动相为CO2,改性剂为甲醇-异丙醇混合溶液(V/V,1∶1),系统流速1.5mL/min,离子化辅助溶剂(补偿溶剂)为0.1%甲酸-甲醇溶液,动态备压1.03×10~7 Pa,柱温55℃,可在3min内完成单个样品分析。4种成分的线性范围均为0.5~5.0mg/kg;在低、中、高加标水平下,方法的平均回收率为94.6%~105.6%,相对标准偏差小于5%。实际样品测定结果表明,单个成分的含量和多种成分的总含量均小于10 mg/kg,低于GB 2760—2014对于此类防腐剂在食品中添加限量的要求。该方法环境友好、高效、准确,适用于口含烟中对羟基苯甲酸酯类物质的测定。

超高效合相色谱法快速测定纺织品中11种致敏分散染料

建立了同时测定纺织品中分散黄1、分散橙37、分散橙1、分散黄49、分散黄9、分散橙3、分散红1、分散黄3、分散蓝106、分散红17和分散棕1等11种致敏分散染料的超高效合相色谱法(UPC2)。样品经甲醇提取、浓缩和定容后,直接由优化的超高效合相色谱仪进行定性定量分析。以超临界CO2和甲醇为流动相,梯度洗脱,采用ACQUITY UPC2HSS C18 SB(3.0×100 mm,1.8μm)色谱柱进行分离。11种致敏染料在2.0~50.0 mg/kg之间线性良好(r≥0.999 2),定量限(LOQs)在1.44~1.98 mg/kg之间;不同添加水平下,11种致敏染料的平均回收率在90.3%~97.9%之间,相对标准偏差(RSDs)在2.9%~5.3%之间。该方法分析时间短、精确度高、较为环保,可用于快速检测纺织品中11种致敏染料。

超高效合相色谱法测定紫杉醇原料药的含量

目的：建立快速、准确、灵敏的测定紫杉醇原料药的方法。方法：采用沃特世ACQUITY超高效合相色谱系统（UPC2）。采用ACQUITY UPC2 BEH 2-EP柱（3.0mm×100mm,1.7mm）;以二氧化碳（A）-甲醇（B）二元梯度洗脱,0-0.2min（92：8,V：V）,0.2-2.5min（92：8-82：18,V：V）,2.5-4.0min（82：18,V：V）;流速2.2m L/min;柱温50℃;备压2200 psi;进样体积2.0m L。结果：此条件下紫杉醇分离良好,在0.6-196mg/m L浓度范围内线性关系良好,回归方程为：Y=94.74X＋404.67（r=0.9999）,平均回收率（n=9）为99.57%,相对标准偏差为0.71%。结论：UPC2法检测快速、准确、灵敏度高、重复性好,为紫杉醇原料药的质量控制提供了一种快速准确的方法。

热带念珠菌的分布特征及其耐药性与ERG11和UPC2表达的关系

目的分析2016年至2018年成都医学院第一附属医院临床分离热带念珠菌的分布特征和耐药性,以及ERG11和UPC2基因表达与唑类药物耐药的关系。方法用沙保罗培养基、科玛嘉念珠菌显色培养基及法国ATB微生物鉴定和药敏分析仪对该院临床分离的热带念珠菌进行培养、鉴定及药敏试验,再提取收集菌株的总RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应对热带念珠菌ERG11和UPC2基因mRNA进行相对定量检测。结果2016年至2018年临床分离的念珠菌共2276株,其中热带念珠菌238株,科室主要分布于呼吸内科和重症监护室,样本类型以气道分泌物为主。热带念珠菌对氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑的耐药率逐年增加。耐药组的ERG11和UPC2 mRNA相对表达水平分别为1.58±0.90和1.40±0.92,均显著高于敏感组的0.48±0.26和0.45±0.27,差异均有统计学意义(均P<0.001),且耐药组两基因表达呈线性正相关(r=0.571,P<0.05)。结论热带念珠菌ERG11和UPC2基因的过度表达能够增加抗真菌药物的耐药性。针对临床的高危患者,若能够常规检测ERG11和UPC2基因,可及时为临床合理应用抗真菌药物提供理论依据。

超高效合相色谱法快速检测塑料食品接触材料中13种紫外吸收剂

建立了一种同时检测塑料食品接触材料中13种紫外吸收剂的超高效合相色谱法。以甲醇为溶剂对塑料食品接触材料样品进行超声提取,经C18固相萃取柱净化,过0.22 μ m有机滤膜,采用超高效合相色谱仪分析。选择ACQUTY UPC 2 HSS C18 SB色谱柱(150 mm×3.0 mm, 1.8 μ m),以超临界二氧化碳为流动相,异丙醇为改性剂进行梯度洗脱,在最优色谱条件下,13种紫外吸收剂能够在4 min内实现有效分离。结果表明,在各自线性范围内,13种紫外吸收剂的线性关系良好,标准曲线相关系数不低于 0.998 5 ,检出限( S/N =3)为0.05~0.15 mg/kg ,加标回收率为86.8%~115.7%,相对标准偏差为0.73%~5.61%。该方法快速简便,准确可靠,同时大大减少了有机溶剂的消耗,可用于塑料食品接触材料中13种紫外吸收剂的快速检测。

超高效合相色谱对植物油中角鲨烯的快速测定及方法比较

建立超高效合相色谱(ultra performance convergence chromatography,UPC^2)分离和测定植物油中角鲨烯的方法。样品经正己烷溶解过滤后直接进样分析;流动相以CO2为主体,乙腈为助溶剂;色谱柱Acquity UPC^2 HSS C_(18) SB(3.0 mm×100 mm,1.7 μm),流速1.5 mL/min,检测波长215 nm,动态背压12.4 MPa,柱温50℃,进样量1.0 μL。角鲨烯在2.5 min内实现完全分离,并在0.53～105.00 mg/L的范围内具有良好的线性(r>0.999 1);回收率为86.97%～102.41%;相对标准偏差为1.3%～4.1%(n=8);方法检出限(RSN=3)为0.53 mg/L。通过UPC2与超高效液相色谱对实际样品的分析及不同前处理方法的比较,结果表明,UPC_2方法具高效快速、操作简单、实验成本低等优点,可以满足植物油中角鲨烯的快速、高通量检测。

女性生殖道白色念珠菌唑类药物耐药转录因子编码基因UPC2的多态性研究

目的研究调控白色念珠菌耐唑类药的锌簇转录因子编码基因UPC2的单核苷酸多态性,为防治其耐药提供依据。方法采用酵母菌药敏条测定分离自女性生殖道的白色念珠菌的药物敏感性,收集唑类耐药株,提取基因组DNA,PCR法检测白色念珠菌UPC2,扩增产物测序后,通过Vector NTI进行单核苷酸多态性分析。结果从1 426株白色念珠菌中共分离到54株唑类药物耐药的菌株,在这54株耐药株中,有29株发生UPC2基因的突变,而其余的25株没有发生突变。在这些UPC2突变株中,得到了3种单个氨基酸取代的不同突变:G377S、W493L、G648S。结论在白色念珠菌耐药株中检测到UPC2的单核苷酸多态性,而在敏感株中则否,提示UPC2核苷酸序列点突变机制可能参与白色念珠菌耐唑类药物的调控。

超高效合相色谱法对6种三唑类农药对映体的拆分及其在黄瓜中的残留分析

采用超高效合相色谱法(UPC^2)拆分三唑酮、三唑醇、己唑醇、戊唑醇、联苯三唑醇、腈菌唑等6种三唑类农药对映体,并测定了黄瓜中6种三唑类农药对映体的残留量。样品经乙腈均质提取,石墨化炭黑(GCB)、自制弗罗里硅土柱和QuEChERS试剂依次净化后,Acquity Trefoil AMY1手性色谱柱分离,以超临界二氧化碳-甲醇等助溶剂为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。方法定量限(S/N>10)均为0.1 mg/kg,在黄瓜中分别添加0.1、0.2、0.5 mg/kg 3个水平的三唑类农药对映体,其回收率为65.1%~116%,相对标准偏差(n=6)为1.0%~9.6%。该方法实现了对6种三唑类农药16种对映体的拆分及其在黄瓜基质中的残留测定,可为手性农药开发、使用及相关法规的制定提供科学支撑。

超高效合相色谱法对克伦特罗对映体的拆分及其在猪尿中的残留分析

该文建立了一种超高效合相色谱法(UPC2)拆分克伦特罗对映体及测定猪尿中克伦特罗对映体含量的分析方法。试样经乙酸乙酯提取,阳离子交换固相萃取柱净化后,采用CHIRALPAK IA-3(4.6 mm×100 mm,3μm)分离,以超临界CO2与10 mol/L醋酸铵-甲醇溶液(0.5∶99.5,体积比)为流动相,流速为2.0 mL/min,梯度洗脱,检测波长为241 nm时,克伦特罗对映体的分离效果最佳,且在50~10000μg/L范围内呈良好线性,相关系数大于0.9998,方法的定量下限(S/N=10)均为1.0μg/L。猪尿中克伦特罗对映体在1.0、5.0、20.0μg/L加标水平的回收率为76.4%~94.5%,相对标准偏差(RSD)为3.6%~6.6%。方法用于克伦特罗外消旋体标准品及20份猪尿实际样品的测定,结果显示,克伦特罗外消旋体中(+)-克伦特罗和(-)-克伦特罗含量分别为5.6 mg/L和5.5 mg/L,该计算结果与文献报道基本相符。猪尿样品中均未检出两种克伦特罗对映体。该方法具有分析速度快、分离效果好、重现性好、有机溶剂消耗少等特点,可用于猪尿样品中克伦特罗对映体含量的测定,为手性药物开发、使用及相关法规的制定提供了技术支撑。

生姜精油的超高效合相色谱特征图谱研究

应用超高效合相色谱(UPC2)技术研究了生姜精油的特征图谱。生姜精油经正庚烷稀释,以超临界CO2为流动相,乙腈为助溶剂,采用超高效合相色谱梯度洗脱分离,流速为0.8mL/min,二极管阵列(PDA)检测器测定,建立了特征峰PDA光谱谱图库及安徽产生姜精油的标准对照特征图谱。通过特征峰PDA光谱图检索识别及色谱图相似度评价,10份安徽产生姜精油的样品谱图与标准对照特征图谱的相似度均大于0.9。各共有指纹峰相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3.0%,方法精密度、重现性、稳定性良好,符合特征图谱评价要求。通过超高效合相色谱特征图谱采集,结合聚类分析、主成分分析,对20批不同来源的生姜精油样品成功进行了区分。该研究为生姜精油的质量控制及产地溯源提供了一种简便、快速的新方法。