基于UPLC-QTOF-MS/MS分析的芪葵颗粒化学成分系统筛选与识别

目的系统定性表征芪葵颗粒(黄芪、制首乌、黄蜀葵花)中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用分析方法对芪葵颗粒水提液进行分离检测,获取正、负离子模式下的原始分析数据;借助AB Sciex PeakView软件,综合采用靶向和非靶向的筛选方法,对获得的原始分析数据进行处理,系统筛选鉴定芪葵颗粒中的化学成分;以不少于2个准分子离子的同时出现,排除碎片离子的干扰,锁定筛选所得目标化合物;依据准分子离子及特征二级子离子质谱信息,结合标准品比对,并参考数据库搜索匹配和文献数据比对,对锁定的化合物进行鉴定或合理归属。结果从芪葵颗粒中共筛选出89个化合物,鉴定出71个化合物,包括黄酮类45个,皂苷类14个,蒽醌类4个,二苯乙烯苷类3个,多糖类2个,有机酸类3个。鉴定结果表明羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、乙酰化、甲基化、丙二酰化等多种转化反应参与了芪葵颗粒多样化学成分的形成。结论基于UPLC-QTOF-MS/MS靶向和非靶向相结合的筛选鉴定方法可快速全面表征芪葵颗粒中的主要化学成分及其涉及的转化反应,为深入探讨芪葵颗粒的质量控制、组方优化和药效物质等奠定了基础。

UPLC-qTOF-MS/MS法测定透骨草中有效成分

建立了超高效液相色谱(UPLC)与电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-qTOF-MS)相结合的方法用于快速分离和鉴定透骨草中的成分。样品在ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)上以0.1%甲酸(溶剂A)和乙腈(溶剂B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min。通过UPLC-qTOF-MS/MS对透骨草进行色谱分析,确定了47个化合物的特征,其中15个化合物通过与参考标准的比较得到了明确的鉴定。为了进行定量分析,使用UPLC-DAD在210,260和326 nm的波长下同时检测了来自12个批次透骨草样品的15种主要化合物。该方法在精密度、重复性、稳定性、准确度等方面进行了验证。本研究为透骨草的整体质量控制提供了潜在的方法。

UPLC-QTOF-MS/MS对痛安注射液指纹图谱中生物碱类化学成分的研究

目的：采用液相与四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）对指纹图谱中色谱峰进行研究,对痛安注射液中的生物碱类化学成分进行定性鉴别。方法：采用Agilent SBC18RRHD（3 mm×100 mm,1.8μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 m L·min-1,柱温为25℃,进样量为2μL。检测质谱采用电喷雾离子源（ESI）的飞行时间质谱,正离子模式下采集数据,一级质谱质荷比扫描范围m/z 100~1500,二级质谱质荷比扫描范围m/z30~500。结果：痛安注射液的指纹图谱色谱峰中共鉴别出12个成分。结论：本方法快速、准确地鉴定了痛安注射液的指纹图谱中的主要成分,为痛安注射液质量标准的完善提供依据。

应用UPLC-QTOF-MS/MS技术测定肝细胞癌患者血清代谢组

目的通过比较肝细胞癌(HCC)和肝硬化(LC)患者血清代谢物,研究HCC代谢谱变化,为寻找HCC早期诊断标志物及治疗新靶点和策略提供依据。方法收集HCC和LC患者血清各50例,应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)对血清代谢物进行鉴定和定量。液相色谱分离采用反相色谱(RPLC)和亲水色谱(HILIC)2种模式,质谱采集包括正、负2种离子化方式。应用Progenesis QI软件进行数据处理,应用EZinfo软件进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多元统计分析并筛选差异代谢物。代谢物鉴定通过检索人代谢组数据库(HMDB)和Metlin数据库实现。应用MetaboAnalyst 4.0对差异代谢物进行代谢通路分析。结果应用UPLC-QTOF-MS/MS技术,共检测到87610个特征代谢峰,鉴定出7848种代谢物。通过P<0.05,变量重要性投影指标(VIP)值≥1及HCC与LC比较的差异倍数≥1.5或≤0.67等3个条件筛选出差异代谢物438个,主要包括磷脂、胆汁酸、游离脂肪酸、小肽和氨基酸等,涉及12个代谢通路的变化。结论与LC患者比较,HCC患者的血清代谢组发生显著变化,共有438种差异代谢物参与12个代谢通路的变化,这有助于发现早期诊断标志物和药物靶标。其中50个差异代谢物具有较高的临床诊断价值,值得进一步验证。另外,本研究近8000个代谢物的鉴定表明,所采用的RPLC结合HILIC分离的UPLC-QTOF-MS/MS技术显著提高了代谢物的鉴定覆盖率,可广泛应用于多领域的代谢组学研究。

基于UPLC-QTOF-MS和HPLC-QQQ-MS技术的鹰嘴豆酚类化合物定性、定量分析及其抗氧化能力研究

鹰嘴豆为一种高营养豆类植物。为深入了解其营养价值,用80%甲醇溶液提取酚类物质,对提取物中不同存在形态的酚类化合物及其抗氧化活性进行测定,并对其提取物进行酚类的定性及定量分析。结果表明,酚酸含量最高部分为糖苷键合态酚类物质(0.81 mg/g),黄酮含量最高部分为游离态酚类物质(0.26 mg/g),不同存在形式酚类物质含量及抗氧化能力不同;80%甲醇提取物通过UPLC-QTOF-MS定性分析,对其24种化合物进行鉴定,包括12种黄酮、4种酚酸;HPLC-QQQ-MS定量分析表明:对羟基苯甲酸、香豆酸、原儿茶酸类化合物含量丰富。

基于UPLC-QTOF-MS/MS的藏药翼首草不同提取物化学成分比较研究

应用UPLC-QTOF-MS/MS鉴定翼首草化学成分,对其水提取物和醇提取物中差异性化合物进行辨识并进行半定量评价。从4批翼首草药材中共鉴定出48个化合物,其中5个化合物首次在翼首草发现。75%乙醇提取物及水提取物整体化学轮廓差异较大,从中辨识16个差异性化合物,其中4个(rivularicin等)化合物为醇提液中所特有。水提取物中neochlorogenic acid等4个化合物含量较高;75%乙醇提取物中sylvestroside III等8个化合物含量较高。该含量差异是否会对其药效产生影响仍有待进一步研究。

基于UPLC-QTOF-MS/MS法的茅苍术与北苍术化学成分分析

目的:建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用方法,对茅苍术与北苍术的75%甲醇提取物中的化学成分进行定性分析。方法:采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18(2.1 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,柱温25℃,进样体积1μL;检测质谱采用四极杆-飞行时间串联质谱系统(电喷雾离子源ESI),正、负离子模式下采集数据,全扫描的质量扫描范围m/z 50~1500。结果:根据UPLC-QTOF-MS/MS提供的各成分的液相色谱保留时间、精确分子质量和特征碎片离子信息,并结合对照品及相关文献数据比对,从茅苍术与北苍术中均鉴定出78个化学成分,包括16个萜类化合物、10个聚乙烯炔类化合物、25个有机酸类化合物、17个糖苷类化合物、10个其它类化合物。结论:该方法可以快速、准确地对苍术药材中的化学成分进行定性表征,可为苍术的物质基础研究和质量控制提供实验依据。

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的]探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法]使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果]GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论]灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。

UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱炮制前后差异的研究

目的通过UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱进行鉴别和表征,并考察不同炮制方法对其影响。方法采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm),柱温40℃;流动相甲醇-水,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,正离子模式下MSE(全信息串联质谱技术)扫描采集,分析生品及炮制品中阿朴菲类生物碱类化合物。结果共鉴别出36种阿朴菲类生物碱。与生乌药比较,经炒制后,阿朴菲类生物碱相对含量下降18个,增加9个;经醋制后,相对含量下降21个,增加6个;经酒制后,相对含量下降21个,增加6个;经盐制后,相对含量下降23个,增加7个。结论炮制后乌药中大多数阿朴菲类生物碱的含量变化显著,可为乌药炮制后功效变化物质基础提供依据。

UPLC-QTOF-MS/MS快速筛查抗鼻炎类制剂中非法添加3种咪唑啉类化合物

目的:建立抗鼻炎类制剂中3种咪唑啉类化合物(盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸赛洛唑啉)的超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱的快速筛查方法。方法:滴鼻液、鼻炎喷剂、鼻炎膏等不同类型样品经提取过滤后,通过AgilentZORBAXExtendC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.8μm)在5min内完成有效分离后,采用电喷雾四级杆飞行时间质谱进行筛查分析。结果:3种化合物的检出限为10.0~26.3ng·mL^-1,在低、中、高3个浓度的平均加标回收率为92.6%~104.0%,相对标准偏差1.68%~4.65%。结论:该方法快速、简便、准确,为抗鼻炎类制剂的高通量快速筛查提供了可靠实用的技术手段。

Development of a validated UPLC-qTOF-MS/MS method for determination of bioactive constituent from Glycyrrhiza glabra

An ultra-performance liquid chromatography quadrupole time of flight mass spectrometry （UPLC-qTOF-MS/MS） method was developed and validated for the simultaneous determination of glycyrrhizin and glycyrrhetic acid. These analytes were separated on a reverse phase C18 column using a mobile phase of acetonitrile：2% acetic acid in water （75：25, v/v） with a flow rate of 200 μL/min. The qTOF-MS was operated under multiple reaction monitoring （MRM） mode using the electrospray ionization （ESI） technique with positive ion polarity. A comparison of three different extraction techniques i.e. accelerated solvent extraction （ASE）, extraction under ultrasonic waves （USW） and the classical extraction by percolation （CE） method was done and quantification of these extracts was also carried out by the proposed method.

Separation, Identification, Isolation and Characterization of Degradation Product of Osimertinib Tablets by UPLC-QTOF-MS/MS and NMR: Evaluation of <i>In-Silico</i>Safety Assessment for Osimertinib (OSM) and Degradation Product (DP)

The present work encompasses identification and characterization of major degradation product (DP) of OSM observed in base hydrolytic stress study. The separation of DP was carried out on a non-polar stationary phase by using high-performance liquid chromatography system (HPLC). Using waters X-bridge (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) C18 column with gradient elution program. For the characterization study, stress samples were subjected to HPLC and UPLC-QTOF-MS/MS and based on mass fragmentation pattern, plausible structure was deduced. Further, the DP was isolated using semi-prepara- tive liquid chromatography and concentrated the fractions using lyophilization. The isolated DP was subjected to extensive 1D (1H, 13C, and DEPT-135) and 2D (COSY, HSQC and HMBC) nuclear magnetic resonance (NMR) studies to authenticate the structure. The impurity was unambiguously named as N-(2-((2-(dimethylamino)ethyl)(methyl)amino)-4-metho-xy-5-((4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-methoxypropanamide. Add- itionally, the In-Silico structure activity relation (QSAR) assessed through statistical based software’s DEREK NexusTM, and MultiCASE, Case UltraTM widely accepted and respected software’s for DP and OSM.

紫金锭提取物的UHPLC/QTOF-MS分析

目的应用UHPLC/QTOF-MS对紫金锭提取物中的化学成分进行鉴定。方法色谱分离采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(100mm×2.1mm,3.5μm),0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱分析采用电喷雾离子源,负离子模式检测。结果通过二级质谱裂解分析以及文献信息比对,从紫金锭中鉴定出了没食子酸、间二没食子酸、没食子酸甲酯、七叶内酯、柚皮苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、1,4-二4-(葡萄糖氧)苄基-2-异丁基苹果酸酯、淫羊藿糖甙、Sarcogenin,大豆苷元、乌索酸等11个化合物。结论本法为紫金锭的化学成分鉴定提供快速和准确方法。

GC-MS和UPLC-QTOF-MS测定生物药用预充式注射笔中的可提取物

采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)和气相色谱串联四极杆质谱(GC-MS)技术,对3种生物药用预充式注射笔中的可提取物进行了非靶向筛查。基于注射笔的实际使用情况,在70 ℃、4 d的条件下,用4种提取剂对其进行组件整体提取。通过设置分析评估阈值(AET),并利用药品包装材料可提取物数据库结合人工谱库解析进行定性分析,最终共检出29种有机物,包括抗氧剂、增塑剂、润滑剂等成分。其中,使用普通卤化丁基活塞的注射笔检出27种物质,使用覆膜活塞的注射笔中检出4种可提取物。该研究所得的可提取物清单可以为开展后续的相容性研究提供数据参考。

HPLC-QTOF-MS联用技术在药物杂质分析中的应用

HPLC-QTOF-MS联用技术是一种新型的药物杂质分析技术,与传统的药物杂质分析技术技术相比,该联用技术具有高分辨率、高灵敏度。并且在药品定性和药品定量上表现出较大的优势。针对HPLC-QTOF-MS联用技术应用进行研究,以头孢拉定原料药中的杂质辨别为分析对象,推测出杂质可能的来源,为药物生产监管提供依据。

地五养肝方对非酒精性脂肪肝小鼠循环外泌体溶血甘油磷脂的调控作用

目的研究地五养肝方对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠循环外泌体溶血甘油磷脂(Lyso-GPLs)的调控作用。方法采用尺寸排阻色谱法分离血液中循环外泌体,运用透射电镜观察外泌体的外观、粒径仪检测外泌体直径分布、Western blotting法检测外泌体表面特异性蛋白CD9,CD63及TSG101的表达;将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、模型组和复方给药组,8只/组,正常组给予标准饲料,模型组和复方给药组饲喂高脂饲料,喂养1周后,各给药组小鼠按剂量给予地五养肝胶囊内容物,正常组和模型组给予等量生理盐水,灌胃给药4周。末次给药后,各小鼠麻醉后取血分离血清,检测总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),观察其对NAFLD的改善作用并提取血清中循环外泌体;同时,结合多元统计分析,筛选NAFLD小鼠循环外泌体中Lyso-GPLs类成分生物标志物,观察地五养肝方对标志物的调控作用。结果透射电镜结果显示外泌体大小在100 nm左右,形状为典型的具有清晰双层膜的茶托样结构;粒径结果显示循环外泌体粒径分布均匀,平均粒径为137.5 nm;Western blotting检测结果表明外泌体表面特异性蛋白CD9,CD63及TSG101的存在;模型组小鼠血清中TC、HDL-C、LDL-C和AST水平显著高于正常组(P<0.01),经地五养肝方治疗后,TC、LDL-C、AST、ALT水平显著回调(P<0.01),并筛选出43个经地五养肝方治疗后呈现显著回调趋势(P<0.01)的Lyso-GPLs标志物成分。结论地五养肝方防治NAFLD的作用机制涉及对循坏外泌体溶血甘油磷脂的改善和调控作用,为其防治慢性肝病的作用机制研究提供了新的科学视角。

山茶各部位黄酮提取工艺优化及提取物成分分析

目的:优化山茶花瓣、叶和花蕊三部位的黄酮提取量,比较抗氧化活性并分析其化学成分。方法:以总黄酮提取量为评价指标,通过单因素实验和正交试验优化超声波辅助酶解法黄酮提取工艺。采用DPPH、ABTS+自由基清除实验和还原力实验评价优化后总黄酮提取物的抗氧化能力。通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)分析各部位的化学成分。结果:在最优提取工艺下,山茶各部位总黄酮提取量依次为叶(63.14 RE mg/g)>花蕊(58.77 RE mg/g)>花瓣(20.26 RE mg/g)。抗氧化活性测定结果表明,花瓣、叶、花蕊中黄酮清除DPPH自由基的IC_(50)值分别为7.28、2.51、1.15 mg/mL,清除ABTS+自由基的IC_(50)值分别为2.85、0.95、0.59 mg/mL,还原力分别为63.25、214.11、475.90 Trolox mg/g,其抗氧化强弱顺序为:花蕊>叶>花瓣。通过UPLC-QTOF-MS/MS从花瓣、叶、花蕊三部位共鉴定出29种化合物,且B型原花青素二聚体、表儿茶素、槲皮素-3-O-半乳糖苷等黄酮单体化合物在三个部位中的分布规律与总黄酮提取量一致。结论:超声波辅助酶法能够有效提高黄酮类化合物的提取量,且山茶的叶和花蕊部位具有较高黄酮含量及抗氧化活性。

基于UPLC-四极杆-静电场/轨道阱高分辨质谱法快速筛查蔬菜中的氟虫腈及其代谢物残留

目的建立适用于蔬菜中氟虫腈及其代谢物的UPLC-四级杆-静电场/轨道阱质谱法。方法将蔬菜样品均质后,加乙腈超声提取,再加氯化钠和无水硫酸钠除水,最后加N-甲基己二胺粉末、C18粉末以及无水硫酸钠去除杂质,净化样品。选用Thermo Syncronis C1(8 100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱对待测物进行色谱分离,在Q-Exactive高分辨质谱Full MS-ddms2扫描模式下采集数据进行定性定量分析。结果氟虫腈及其代谢物在0.1~5.0μg/L浓度范围内线性良好,相关系数r^2均>0.9900。各组分的平均加标回收率在95.4%~108.6%,RSD值为0.769%~5.563%,24 h内RSD为1.531%~4.959%。结论本法操作简便、快速、重现性好、稳定性好、灵敏度高,适用于蔬菜中氟虫腈及其代谢物的快速定性定量筛查。

基于UPLC-QTOF/MS技术鉴定雷公藤多苷片中的化学成分

目的:使用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱联用(UPLC-QTOF/MS)技术对雷公藤多苷片中所含的化学成分进行表征。方法:采用电喷雾(ESI)正离子模式对雷公藤多苷片化学成分进行扫描,基于所获得的各化合物高分辨质谱信息,结合文献报道对雷公藤多苷片的化学成分结构及其裂解规律进行分析。结果:在雷公藤多苷片中共鉴定出36个化合物,包括14种生物碱,10种二萜类及其内酯,11种三萜类及其内酯,1种烃类。结论:采用高分辨质谱法可以快速全面地对雷公藤多苷片的化学成分进行定性分析,研究结果为该制剂的药效物质基础和质量控制深入研究提供了有益的参考。

UPLC-四极杆-静电场/轨道阱高分辨质谱法测定畜禽肉类食品中双酚A和双酚S

目的 建立UPLC-四极杆-静电场/轨道阱质谱法测定畜禽肉类食品中的双酚A和双酚S。方法 将畜禽肉类样品均质后,加同位素内标BPA-D8和BPS- 13 C 12 后提取,采用Waters Oasis HLB固相萃取柱富集样品,以甲醇水为流动相,用C 18 柱色谱柱进行分离,经Q-Exactive高分辨质谱Full MS/t-SIM扫描模式下采集据进行定性定量分析。结果 双酚A在1~50μg·L -1 浓度范围内线性良好,相关系数r 2为0.9978,加标回收率在81.7%~89.3%,RSD值为2.83%~4.77%,检出限为0.3μg·kg -1 。BPS在0.2~10μg·L -1 浓度范围内线性良好,相关系数r 2为0.9996,加标回收率在92.6%~104.3%,RSD值为2.05%~5.89%,检出限为0.05μg·kg-1 。结论 本方法操作简便、快速、灵敏度高,适用于畜禽肉类中BPA、BPS的快速定性定量筛查。