UPLC-FLR测定长效人红细胞生长刺激素中唾液酸含量

目的建立超高效液相色谱-荧光检测法(UPLC-FLR)用于测定长效人红细胞生长刺激素中两种唾液酸组分N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸。方法将长效人红细胞生长刺激素原液经乙酸水解,4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺盐酸盐试剂标记前处理,采用Acclaim RSLC 120 C_(18)色谱柱和流动相(甲醇:乙腈:超纯水=7:9:84)洗脱分离,采用荧光检测器测定各组分的荧光。使用唾液酸标准品外标法进行定量分析。结果此法专属性较强,N-乙酰神经氨酸准确度回收率为89.6%~95.1%,RSD为2.5%,N-羟乙酰神经氨酸回收率为90.9%~97.4%,RSD为2.9%;6份样品重复性RSD<1.0%。线性相关系数(r^(2))均>0.99,线性良好。12 h进样品回收率RSD<1.0%。结论此法可对长效人红细胞生长刺激素唾液酸N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸的含量进行准确分析。

超高效液相色谱-荧光法检测烟丝中的苯并[a]芘残留

建立了一种准确、快速、简便的烟丝中苯并[a]芘残留的超高效液相色谱-荧光(UPLC-FLR)测定方法。将烟末用环己烷超声提取40 min后过滤,滤液旋蒸浓缩至干再用甲醇-丙酮(V甲醇∶V丙酮=10∶1)反萃后定容于容量瓶中,经0.2μm的滤膜过滤后检测。荧光检测器激发波长365 nm,发射波长410 nm。流动相为乙腈-水(V乙腈∶V水=85∶15),流速为0.2 mL/min,色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm i.d.×50 mm,1.7μm),外标法定量。苯并[a]芘在浓度为0.43～43.20 ng/mL范围内呈线性,线性方程为y=6E+07x+18601,相关系数为0.9998。样品回收率在94.9%～101.0%之间,相对标准偏差为3.2%。方法检测限为0.11ng/g,定量限为0.37ng/g。结果表明该法前处理简便、检测限低、灵敏度高,适用于烟丝中苯并[a]芘分析。

纸基食品接触材料中4-肉桂苯酚和水杨酸对叔丁基苯酯向干性食品模拟物Tenax TA的迁移

以纸基食品接触材料中的4-肉桂苯酚(CP)和水杨酸对叔丁基苯酯(TBS)为模拟迁移物,对其向干性食品模拟物Tenax TA中的迁移规律采用超高效液相色谱结合荧光检测(UPLC-FLR)方法进行了研究。在不同温度下对CP和TBS的迁移动力学进行了考察,并对其在封闭环境和敞开环境下的迁移率进行对比研究。通过设计不同质量的Tenax TA接触直径为3.5 cm圆片样品的迁移试验,探索了迁移试验中合适的模拟物质量/接触材料面积比条件。系列试验结果表明,迁移物迁移时间越长,迁移温度越高,相应的迁移率就越高;在高的迁移温度下,迁移物在Tenax TA上的解吸会导致迁移率的下降;在封闭条件下CP和TBS的迁移率要高于敞开条件下的迁移率;迁移试验中,4.16 g/dm2的模拟物质量/接触材料面积比是利用干性食品模拟物进行食品接触材料暴露评估的合适的迁移试验条件。密闭条件下市售的8种食品接触材料干性食品模拟物迁移实验研究表明,TBS存在于用于包装坚果类食品的包装纸中,含量为15.54 mg/kg。

超高效液相色谱法同时测定纺织品中18种荧光增白剂

建立了同时测定纺织品中18种荧光增白剂(FWAs)的超高效液相色谱-荧光检测(UPLC-FLR)法。试样由三氯甲烷-乙醇(6∶4,v/v)超声提取,以ACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)为分离色谱柱进行分析,以5 mmol/L乙酸铵水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 m L/min,荧光激发波长为350 nm,发射波长为430 nm,外标法定量。18种FWAs在各自范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)均≥0.999 2;方法的定量限(LOQs,S/N=10)为0.002~0.1 mg/L。样品的平均加标回收率为88.3%~104.5%,相对标准偏差(RSD)为2.0%~5.5%(n=6)。该方法灵敏度高,精密度好,准确度高,适用于各种纺织品中FWAs的测定。

超高效液相色谱荧光法检测卷烟主流烟气中的挥发酚

建立了快速测定卷烟主流烟气中(邻、间、对)-苯二酚、(邻、间、对)-甲基苯酚和苯酚的超高效液相色谱荧光检测法(UPLC-FLR).采用1%的醋酸水溶液对剑桥滤片进行超声提取后,经0.2μm滤膜过滤直接进行UPLC分析.利用FLR检测器分别对7种挥发酚进行定性定量,且(间、对)甲基苯酚可以完全分开.该法检测卷烟主流烟气中挥发酚相对标准偏差为0.73%～4.62%,回收率为86.62%～96.88%.方法具有前处理简便、分析时间短、重现性好等优点,适合卷烟主流烟气中酚类物质的批量快速检测.

中国药典黄曲霉毒素检测过程有关问题分析

目的探讨中药材黄曲霉毒素检验过程中的影响因素,比较现行方法与超高效液相色谱荧光检测器无衍生法。方法比较不同的碘浓度和流速对衍生效果的影响,不同的基质条件下不同品牌免疫亲和柱的回收率;用超高效液相色谱-荧光检测器无衍生快速测定柏子仁药材中4种黄曲霉毒素的含量。结果最终确定衍生方式为衍生溶液为0.01%碘溶液,衍生化泵流速0.4 m L/min;不同品牌的免疫亲和柱上的回收率差异较大;采用UPLC-FLR方法 AFB1与AFG1在0.2~20 ng/m L范围内、AFB2与AFG2在0.1~6.0 ng/m L范围内线性关系均良好,r〉0.999 9;4种黄曲霉毒素回收率在85.0%~99.0%之间。结论采用碘衍生测定黄曲霉毒素时可适当降低碘衍生溶液的浓度;采用UPLC-FLR方法检验黄曲霉毒素,方法快速、准确。

超高效液相色谱-荧光法测定丹参饮片中黄曲霉毒素

目的建立超高效液相色谱-荧光法测定丹参饮片中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)。方法样品经70%甲醇提取,通过免疫亲和柱净化后,用超高效液相色谱-荧光法进行分析测定,WatersAcquityUPLC BEHC_(18)色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流动相为甲醇-乙腈(1∶1)、水,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温30℃;荧光检测器激发波长365 nm;发射波长456 nm;进样量2μL。结果黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)分别在0.1201~1.9208、0.0361~0.5772、0.1221~1.9540、0.0421~0.6732 ng/mL内线性关系良好,r均大于0.99;定量限分别为0.10、0.03、0.39、0.03 ng/mL;黄曲霉毒素B_(1)的回收率为107%,RSD为6%;黄曲霉毒素总含量的回收率为80%,RSD为9%。专属性、重复性、精密度、稳定性试验均符合检测要求。结论所建立的方法准确、可靠、专属性强,可准确地测定丹参饮片中黄曲霉毒素的含量。

超高效液相-荧光色谱法测定食品中的甘素

建立了超高效液相-荧光色谱法(UPLC-FLR)测定食品中甘素的分析方法。样品采用5.0 mM醋酸/醋酸铵(pH6.0)缓冲溶液超声提取,Waters Oasis HLB固相萃取柱进行净化。采用Waters ACQUITY UPLCRBEH C18(100 mm×2.1 mm,i.d,1.7 um)色谱柱,以乙腈、5.0 mM醋酸/醋酸铵(pH 6.0)缓冲溶液为流动相梯度洗脱,在7.9 ng/mL^1000 ng/mL线性范围内,线性相关系数r2为0.999 9,检出限(LOD)为0.341 5 ug/kg,最低定量限(LOQ)为2.49 ug/kg。空白样品中添加三个浓度水平(1.25 ug/g,2.50 ug/g和3.75 ug/g),平均回收率为77.33%~100.06%,相对标准偏差在1.146%~1.940%之间,此方法运行时间仅5 min,且灵敏,快速准确,完全能满足食品中甘素的快速,高灵敏度的要求。

质谱方法实现抗体类药物糖链修饰的鉴定与定量研究

目的：基于液质联用的串联质谱技术,建立基于完整糖肽水平的抗体药糖型定性定量分析方法,并用于生物仿制药糖型研究。方法：基于液相色谱质谱技术,从完整糖肽水平对糖型进行定性定量分析,同时与传统超高效液相荧光检测（ultra performance liquid chromatography_fluorescence detection,UPLC-FLR）结果比较,获得最优分析策略,并用于曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定性定量分析。结果：UPLC-FLR方法定量分析了贝伐单抗7种糖型;液质联用方法定量19种糖型;经亲水相互作用色谱（hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC）富集后,定量22种糖型。曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定量结果显示良好的一致性。结论：基于液质联用的方法,具有速度快、灵敏度高、检测糖型种类多等优势,有望作为一种稳定的抗体药物糖蛋白位点特异性定量分析策略。

液质联用(LC／MS)技术在单克隆抗体(曲妥珠单抗)结构表征上的应用

目的:应用LC/MS(液质联用)和LC/MSE方法(液相色谱/非数据依赖二级质谱数据采集方法,等频率切换高与低碰撞能量进行质谱数据扫描)对单克隆抗体(曲妥珠单抗,人源化单克隆免疫球蛋白IgG1)的结构进行深度表征。方法:先用LC/MS对曲妥珠单抗完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量进行测定;然后用多种酶(胰蛋白酶和AspN)酶解蛋白并用LC/MSE肽图分析法对曲妥珠单抗的氨基酸全序列进行解析和确定,同时对可能发生的翻译后修饰(PTMs)进行定性和定量分析。再通过PNGase F酶来释放抗体上的糖链并应用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法对其糖基化修饰进行结构分析及确认。结果:对曲妥珠单抗的完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量测定得到良好的质量准确度,由此可判定特定蛋白修饰在轻链和重链上的分布。通过对曲妥珠单抗酶解后的氨基酸全序列确认,可对其翻译后修饰以及可能的错误氨基酸序列进行解析。该抗体肽图分析的氨基酸序列覆盖率是100%。糖基化分析是通过对游离的N-链接寡糖进行2-AB荧光标记后再用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法来进行的。联合使用这些分析方法,能够有效地对不同批号和不同工艺的抗体药物进行常规质量检测和深度表征,控制药物质量,为患者提供安全可靠的生物治疗药品。结论:结合液质联用(LC/MS和LC/MSE)技术,通过完整蛋白相对分子质量的测量,肽图分析测定氨基酸序列以及翻译后修饰的定性和定量分析,结合游离N-链接寡糖的分析表征,对单克隆抗体曲妥珠单抗进行了全面的结构表征,并建立了一套单克隆抗体结构表征的平台化方案。