基于UPLC-TOF/MS的苍耳子不同部位化学成分研究

目的:建立测定苍耳子不同部位化学成分的UPLC-TOF/MS分析方法。方法:运用UPLC-TOF/MS分析技术,进行梯度洗脱分离,洗脱液不经紫外检测器直接导入质谱系统,采用ESI离子源,进行正负离子扫描,采集两种模式下的UPLC-MS图谱,通过MasslynxV4.1数据分析软件,进行色谱峰的提取和匹配,依据元素组成分析参数确定分子式。结果:从苍耳子的水提取物中确定了33个离子峰,通过对照品比对和元素组成分析检索,对其中11个离子峰进行化学成分的归属。同时对苍耳子各离子峰进行了药材部位归属,22个来源于苍耳子刺,31个来源于去刺苍耳子,其中20个为共有的离子峰。结论:该研究建立的UPLC-MS法简便、准确、专属性强,同时对苍耳子中的各化学成分进行了药材部位归属,明确其来源,为苍耳子中的有毒化学成分以及临床安全用药提供科学依据。

基于UPLC-TOF/MS和脑内微透析技术的异嗪皮啶在帕金森病模型大鼠脑内药动学研究

目的:研究异嗪皮啶在帕金森病模型大鼠脑内的药动学特征。方法:使用鱼藤酮制作帕金森病模型大鼠,并通过行为学测试及免疫组化实验对模型进行验证。采用脑内微透析取样技术,在给予10 mg·kg-1和20 mg·kg-1异嗪皮啶后,以5、10、15、20、30、40、50、60 min为时间点进行采样,经回收率校正后,使用Winnolin 6.1计算相应药动学参数。结果:行为学测试及免疫组化实验证明模型制作成功。在给予相关模型大鼠异嗪皮啶10 mg·kg-1和20 mg·kg-1后,相应的药动学参数分别为,t1/2=17.63±1.49 min、18.69±1.67 min,Cmax=626.38±89.69 ng·mL-1、1471.30±163.10 ng·mL-1,tmax=15 min、15 min,AUC0-t=14014.95±2927.21 ng·min·mL-1、35431.86±5303.36 ng·min·mL-1,AUC0-∞=16245.54±3446.15 ng·min·mL-1、41395.40±6180.62 ng·min·mL-1,MRT0-t=23.52±0.76 min、23.53±0.40 min,MRT0-∞=30.81±2.10min、32.68±2.39 min。结论:该方法可用于测定病理状态下口服异嗪皮啶后大鼠脑内的药动学主要参数,为临床用药提供参考。

基于UPLC-TOF/MS的小细胞肺癌患者血清代谢组学研究

目的探索小细胞肺癌患者与健康人血清代谢组学差异,为小细胞肺癌的鉴定与分期寻找血清潜在生物标志物。方法利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用仪(UPLC-TOF/MS)建立小细胞肺癌血清代谢图谱,采用EZinfo2.0软件进行主成分分析(Principal component analysis,PCA)、正交隐变量投影判别分析(Orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)分析病例组和正常对照组之间的代谢差异。通过聚类分析并利用HMDB和METLIN数据库搜索差异物的精确质荷比,对一些具有显著性差异的物质进行初步的成分鉴别。结果通过质谱分析和数据库检索筛选并鉴定出溶血性磷脂酰胆碱等10种差异性代谢产物,不同分期的小细胞肺癌患者轮廓分析存在甘氨胆酸等10种差异性物质。结论小细胞肺癌患者与健康对照人群在血清代谢水平上具有明显差异,差异代谢物的发现为小细胞肺癌的鉴定以及分期寻找潜在标志物提供实验依据。

基于UPLC-TOF-MS结合网络药理学探究大黄甘草汤通便止呕作用机制

目的探究大黄甘草汤(DG)通便止呕的作用机制。方法运用UPLC-TOF-MS对DG化学成分进行定性分析,结合网络药理学探讨DG发挥通便止呕功效的潜在作用机制和物质基础,并运用分子对接技术进行验证。结果UPLC-TOF-MS法采用正负离子扫描模式,根据数据库比对和文献数据从DG水煎液中共鉴定27个化合物。网络药理学分析表明DG通便止呕功效的关键成分可能为木犀草素、圣草酚、甘草次酸、大黄素等;关键靶点可能为AKT1、IL6、IL1B、TP53、TNF、EGFR;关键通路可能为胃癌、结直肠癌、IL-17、TNF、HIF-1等信号通路。有效成分与核心靶点分子对接结果良好。结论该研究较全面地阐明了DG水煎液的化学成分,明确了DG通过减轻炎症状态、促进肠道运动等作用发挥通便止呕的功效,可为DG的进一步质量评价和临床研究提供参考。

基于UPLC-TOF-MS研究益经汤颗粒对卵巢早衰小鼠血清代谢组学的影响

目的通过超高效液相色谱串联飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)技术,探究益经汤颗粒对卵巢早衰小鼠血清代谢组学的影响。方法将实验小鼠随机分为模型组、阳性对照组、益经汤低、高剂量组和空白组,每组6只。使用环磷酰胺诱导卵巢早衰小鼠模型,灌胃给药进行干预,每日1次,共30 d。通过UPLC-TOF-MS技术,分析小鼠血清样本中内源代谢物变化,应用主成分分析(PCA)以及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法,通过变量投影重要性值(VIP)和t检验结果对潜在差异代谢物进行筛选,并借助MetaboAnalyst平台进行代谢通路富集分析。结果代谢组学分析得到模型组较空白组相比存在潜在差异代谢物74个,益经汤高剂量组较模型组相比共有潜在差异代谢物130个。经再次筛选鉴定得到25个与益经汤治疗主要相关的差异代谢物,共富集分析得到KEGG通路11条,其中主要代谢通路有组氨酸代谢、柠檬酸循环、氨基糖和核苷酸糖代谢通路、果糖和甘露糖代谢以及赖氨酸降解等。结论益经汤颗粒对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠发挥治疗作用,其机制可能与改善血清中差异代谢物水平以及调节组氨酸、柠檬酸循环、果糖和甘露糖、赖氨酸代谢有关。

基于UPLC-TOF-MS分析人参麦冬配伍后皂苷类成分的变化

利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-TOF-MS)分析人参麦冬药对配伍后人参皂苷的变化,从化学成分层次阐释其配伍机制。采用Acquity BEH C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液梯度洗脱,电喷雾电离离子源V模式检测,建立基于UPLC-TOF-MS的人参麦冬药对配伍的化学指纹图谱,数据分析采用MassLynx 4.1软件通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析药对配伍在合煎过程中人参皂苷的成分变化,找出差异变化显著的化学成分。结果表明:人参麦冬药对合煎液与合并液相比,8种皂苷成分发生显著变化,其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb1的含量减少,而人参皂苷Rb3、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb2、丙二酸甲酰基人参皂苷Rc、人参皂苷Rf的含量增加,说明麦冬与人参配伍改变了人参皂苷成分的含量,这可能是麦冬配伍人参作用的物质基础。

蓝莓提取物中花青素和黄酮类活性成分的UPLC-TOF MS联用分析

使用超高效液相色谱/飞行时间质谱,分别在TOF/MS全扫描和Q-TOF/MS碎片扫描两种模式下分析不同厂家生产的蓝莓提取物中的的花青素和黄酮类活性成分。首先依据高分辨精确质量在"待筛查化合物数据表"中查出可能的化合物,再结合二级质谱的子离子碎裂特征对化合物进行定性分析,结合参考文献,从蓝莓提取物中共鉴定出19个花青素类化合物、8个黄酮类化合物。同时,本文还对蓝莓提取物中的花青素苷和黄酮苷的质谱裂解规律进行了探讨。这一分析方法方便快捷、灵敏度高、准确性好,可将其推广至其它天然活性成分的无对照品筛查研究之中。

UPLC-TOF/MS测定苦荞中的γ-氨基丁酸

目的采用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用(UPLC-TOF/MS)测定苦荞中γ-氨基丁酸(GABA)的含量。方法 GABA与盐酸正丁醇衍生化反应形成γ-氨基丁酸丁酯的衍生物。色谱柱为BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈-甲醇-0.01 mol·L-1乙酸铵溶液(45∶35∶30);流速0.2 mL·min-1;柱温30℃;采用飞行时间质谱仪电喷雾电离源(ESI)、正离子(V模式)方式检测。结果 GABA在0.4831～4.8312μg范围内制备的衍生物进样,平均加样回收率为97.28%(r=0.9996)。结论本法简便、准确、重现性好,可用于苦荞中GABA的含量测定。

UPLC-TOF-MS与网络药理学联合探讨人参改善胰岛素抵抗的作用机制

目的运用网络药理学研究人参改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的多成分、多靶标、多途径作用机制。方法通过超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用(Ultra performance liquid chromatography quadrupole-time-of-flight hybrid mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)分析人参中的主要化学成分,使用DAVID数据库进行基因本体论(Gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析,并运用Cytoscape 3.6.1软件绘制网络互作图,image GP工具绘制GO气泡图,使用Vina软件进行分子对接预测。结果研究得到人参改善IR作用的41个关键活性成分和26个关键靶点,GO、KEGG通路富集和Vina分子对接分析发现,人参可能主要通过人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参二酮和25-羟基原人参二醇等活性成分,作用于MAPK1、VEGFA、PIK3R1、NR3C1靶点,调节m TOR信号通路、Toll样信号通路、胰岛素通路等信号通路发挥改善IR作用。结论人参改善IR体现了多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步研究人参改善IR作用药效物质基础和作用机制提供了新的思路和方法。

UPLC-TOF-MS、GC-MS结合网络药理学探讨炙甘草抗心律失常的作用机理

目的将炙甘草的化学成分与网络药理学相结合,探讨炙甘草抗心律失常的作用机理。方法运用UPLC-TOF-MS、GC-MS技术分析炙甘草的化学成分。利用TCMSP数据库筛选活性成分,通过Swiss Target Prediction数据库和Gene Cards数据库搜集药物作用靶点和疾病靶点,借助Cytoscape 3.8.2软件筛选核心靶点,对核心靶点进行蛋白互作网络分析,GO和KEGG富集分析,使用Cytoscape 3.8.2构建药物-关键成分-核心靶点-通路图,分子对接验证由Autodocking vina 1.2.0软件完成。结果共分析出289种化学成分,其中异甘草素、酪氨酸等16个成分为抗心律失常的关键成分;蛋白互作网络共筛选出ALB、AKT1、VEGFA、EGFR等55个核心靶点,GO富集共获得476个条目,KEGG共得到130条通路。分子对接结果表明,异甘草素、黄豆黄素、蜜桔黄素与核心靶点对接活性较好。结论炙甘草可能通过调节ALB、AKT1、VEGFA、EGFR等多个靶点,以及参与癌症通路、癌症中的蛋白聚糖、内分泌耐药、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路发挥抗心律失常的作用。

Fru-Gly化合物含量的UPLC-TOF MS-MS方法学研究

采用UPLC-TOF MS-MS建立测定葡萄糖和甘氨酸反应体系中Fru-Gly化合物浓度的方法。以葡萄糖和甘氨酸为原料,在80℃水浴中回流1h,反应液经纯化,以Shim-pack GIST C18(2.1×75mm,2μm)为色谱柱,乙腈(含0.1%甲酸):水(含0.1%甲酸)为流动相,流速为0.2mL·min-1,采用电喷雾正离子(ESI+)模式测定,用于定性定量分析的离子对m/z为76/88。经方法学验证,Fru-Gly化合物在0.05~1μg·mL-1浓度范围内,均具有良好的相关性,相关系数为0.9997,加标回收率为96.84%~102.84%,RSD为1.93%,重复性和精密度的RSD均小于3.0%。结果表明,UPLC-TOF MS-MS法重复性好,精密度高,适用于测定葡萄糖和甘氨酸反应体系中Fru-Gly化合物的浓度。

Rapid and Sensitive Assay of the Main Components in Shuanghuanglian Preparations by UPLC-TOF-MS

1 Introduction As already known, complex prescription has been the outstanding feature of traditional Chinese medicine（TCM）. This fact therefore brings complicated formula with multicomponents from multimaterals, which produces some difficulties to detect the components and to control the quality. Shuanghuanglian preparations（SHLs）, including oral liquid, injection powder, capsule, and tablet, belong to a family of refined traditional Chinese patent medicine and a combined herbal remedy comprised of three herbs：

UPLC-TOF-MS/MS在医药分析检测中的应用研究进展

超高效液相色谱串联飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS/MS)检测技术分析效率高、灵敏度高、重现性好,可一次完成多种成分、复杂样品的在线分析,具备高效、快捷等优势。综述了近年来UPLC-TOFMS/MS分析检测的研究进展,重点介绍了其在原料药、中药材、中成药、生物标志物、其它应用等5大方面的应用研究,报道了近期的研究成果,旨在为UPLC-TOF-MS/MS检测方法的开发与优化提供借鉴意义。

UPLC-TOF结合多元数学统计方法建立五加参蛤蚧精中蛤蚧的鉴别方法

目的建立五加参蛤蚧精中蛤蚧的定性鉴别方法,为判定五加参蛤蚧精中是否投料正品蛤蚧提供参考。方法取样品至1.5 mL离心管中,离心(12000 r·min^(-1),5 min),取上清液,即得;色谱分析采用Waters BEH C_(18)色谱柱(2.1×50 mm,1.7μm),柱温35℃,流速为0.5 mL·min^(-1),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱。质谱测定采用电喷雾离子源(ESI)的飞行时间质谱(TOF/MS);正负离子模式下采集MSE数据;质量扫描范围m/z100~1200。结果分别对8个不同厂家的五加参蛤蚧精中的蛤蚧定性离子用多元数学统计方法进行比较、拟合,最终决定对样品采取未酶解的前处理方式,采集了ESI(正和负)的MSE数据,将162.1136、482.3709、508.3879这3个正离子特征离子和514.2794、353.2299、407.2765这3个负离子特征离子做为蛤蚧鉴别的6个特征离子。8个厂家中有一个厂家未检出这6个特征离子,怀疑为蛤蚧伪品投料。结论所建立的蛤蚧鉴别方法可作为规范五加参蛤蚧精中蛤蚧真伪判定的质量控制手段。

海岸桐茎和果实的化学成分

采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对海岸桐(Guettarda speciosa Linn.)茎和果实的化学成分进行分析。结果显示:海岸桐茎中有35个化合物,包括三萜类12个、环烯醚萜类7个、酚酸及其苷类12个、强心苷类2个、黄酮类1个、苦木素类1个。海岸桐果实中有40个化合物,包括三萜类10个、环烯醚萜类8个、酚酸及其苷类8个、黄酮类8个、甾体类3个、脂肪酸类2个、二萜类1个。海岸桐茎和果实中共有成分18个,包括三萜类7个、环烯醚萜类6个、酚酸类及其苷类4个、黄酮类1个。综上所述,海岸桐茎中富含鞣质类酚酸成分,生态学意义较强;果实含有环烯醚萜类等活性物质,开发利用价值较高。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS联合网络药理学及分子对接研究五味清浊颗粒治疗腹泻药效物质基础和作用机制

目的基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定五味清浊颗粒中的化学成分,联合网络药理学、分子对接技术探讨其治疗腹泻药效物质基础和作用机制。方法采用Eclipsepius C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.4 mL·min^(-1)。质谱采用电喷雾离子源(ESI)正、负离子模式,扫描范围m/z 50~2000条件下采集多级质谱碎片信息。应用网络药理学构建“核心成分-作用靶点-通路”的网络,对其潜在药效物质基础进行预测。利用AutoDock Vina进行分子对接验证。结果共鉴定出86个主要化学成分,包括生物碱类25个、黄酮类23个、有机酸类12个、鞣质类16个、苯丙素类2个、其他类化合物8个。网络药理学分析结果显示,槲皮素、木犀草素、鞣花酸、胡椒碱、山柰酚、荜茇宁主要作用于IL-6、TNF、EGFR、IFNG、IL-10、IL-8等核心靶点,调节PI3K-Akt、HIF-1、JAK-STAT等关键信号通路来发挥治疗腹泻作用。分子对接结果显示核心成分与核心靶点间具有良好的结合性能。结论该研究成功采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对五味清浊颗粒化学成分进行全面分析鉴定,初步阐明其治疗腹泻的作用机制,为其药效物质基础和质量控制奠定基础。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术快速分析红景天叶的化学成分

目的:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,对红景天叶中的主要酚类、鞣质和黄酮类成分进行分析鉴定。方法:80%甲醇提取物分离采用WatersBEH C_(18)(2.1×100mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-乙睛(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离,流速0.3mL/min,检测波长为280nm,负离子模式下采集数据,依据高分辨质谱提供的分子离子峰和二级碎片离子,并与文献或对照品比对,确定化合物可能的结构。结果:从红景天叶中鉴定出54个化学成分,包括11个酚酸类、25个鞣质类、18个黄酮类化合物,这是首次系统研究了红景天叶中的功能成分。结论:该方法可为红景天叶的化学成分质谱裂解规律和药效物质基础提供科学依据。

基于UPLC-Triple-TOF-MS技术初步分析雅安产道地中药材川牛膝中生物碱成分

采用乙醇提取、成盐、二氯甲烷萃取等方法初步富集川牛膝总生物碱,确定最优提取分离工艺;通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法,采用Waters XSelect CSH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,测试波长254 nm,柱温为50℃,进样量为3μL,采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100~1500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得信息对川牛膝中生物碱类化学成分进行快速鉴定,通过对比分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy数据库及相关文献,推测出两种生物碱成分。研究建立的生物碱类化学成分提取与分析方法,为提高雅安产道地中药材川牛膝的质量控制水平及后续阐明药效物质基础提供了实验依据。

炒菟丝子在大鼠胆汁中的化学成分分析

运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术研究炒菟丝子在大鼠胆汁中的原型成分及其代谢产物,并明确其在胆汁中的代谢转化规律.采用Agilent ZORBAX HPLC Eclipse Plus C 18(100 mm×3 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^(-1),进样量3μL,柱温30℃.运用电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 50~1200,正、负离子模式下采集胆汁样品谱图信息.结合相关文献信息自建库,从含药胆汁中共鉴定出28种化学成分,其中原型成分4种,代谢产物24种,炒菟丝子在胆汁中发生代谢转化类型有甲基化、葡萄糖醛酸化、氧化脱氢等.就炒菟丝子在大鼠胆汁的化学成分进行分析和代谢过程研究,可为后期炒菟丝子的体内代谢过程及其药效物质基础研究提供依据和参考.

基于特征图谱及化学模式识别的当归补血汤质量评价研究

目的:建立当归补血汤超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的特征图谱,综合评价其质量。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量2μL;使用电离子喷雾源(ESI),负离子模式扫描。并以指纹图谱相似度评价软件结合聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)对11批当归补血汤进行评价。结果:通过对照品比对及软件预测,从当归补血汤中鉴别出24种成分。图谱标定出41个共有峰,指认出6个色谱峰,分别为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、芒柄花素。HCA、PCA和PLS-DA3种方法均将11批样品分为3类,对黄芪统货、选货和精品饮片进行了明显区分,说明当归补血汤的特征图谱与原药材的质量和等级具有强相关性。结论:构建的高分辨质谱的特征图谱结合化学模式识别方法快速高效全面,适用于当归补血汤整体质量的评价,同时也为中药复方质量标准建立与全程质量控制提供了重要支撑。