基于UPLC-TOF-MS结合网络药理学探究大黄甘草汤通便止呕作用机制

目的探究大黄甘草汤(DG)通便止呕的作用机制。方法运用UPLC-TOF-MS对DG化学成分进行定性分析,结合网络药理学探讨DG发挥通便止呕功效的潜在作用机制和物质基础,并运用分子对接技术进行验证。结果UPLC-TOF-MS法采用正负离子扫描模式,根据数据库比对和文献数据从DG水煎液中共鉴定27个化合物。网络药理学分析表明DG通便止呕功效的关键成分可能为木犀草素、圣草酚、甘草次酸、大黄素等;关键靶点可能为AKT1、IL6、IL1B、TP53、TNF、EGFR;关键通路可能为胃癌、结直肠癌、IL-17、TNF、HIF-1等信号通路。有效成分与核心靶点分子对接结果良好。结论该研究较全面地阐明了DG水煎液的化学成分,明确了DG通过减轻炎症状态、促进肠道运动等作用发挥通便止呕的功效,可为DG的进一步质量评价和临床研究提供参考。

UPLC-TOF-MS、GC-MS结合网络药理学探讨炙甘草抗心律失常的作用机理

目的将炙甘草的化学成分与网络药理学相结合,探讨炙甘草抗心律失常的作用机理。方法运用UPLC-TOF-MS、GC-MS技术分析炙甘草的化学成分。利用TCMSP数据库筛选活性成分,通过Swiss Target Prediction数据库和Gene Cards数据库搜集药物作用靶点和疾病靶点,借助Cytoscape 3.8.2软件筛选核心靶点,对核心靶点进行蛋白互作网络分析,GO和KEGG富集分析,使用Cytoscape 3.8.2构建药物-关键成分-核心靶点-通路图,分子对接验证由Autodocking vina 1.2.0软件完成。结果共分析出289种化学成分,其中异甘草素、酪氨酸等16个成分为抗心律失常的关键成分;蛋白互作网络共筛选出ALB、AKT1、VEGFA、EGFR等55个核心靶点,GO富集共获得476个条目,KEGG共得到130条通路。分子对接结果表明,异甘草素、黄豆黄素、蜜桔黄素与核心靶点对接活性较好。结论炙甘草可能通过调节ALB、AKT1、VEGFA、EGFR等多个靶点,以及参与癌症通路、癌症中的蛋白聚糖、内分泌耐药、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路发挥抗心律失常的作用。

基于UPLC-TOF-MS分析人参麦冬配伍后皂苷类成分的变化

利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-TOF-MS)分析人参麦冬药对配伍后人参皂苷的变化,从化学成分层次阐释其配伍机制。采用Acquity BEH C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液梯度洗脱,电喷雾电离离子源V模式检测,建立基于UPLC-TOF-MS的人参麦冬药对配伍的化学指纹图谱,数据分析采用MassLynx 4.1软件通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析药对配伍在合煎过程中人参皂苷的成分变化,找出差异变化显著的化学成分。结果表明:人参麦冬药对合煎液与合并液相比,8种皂苷成分发生显著变化,其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb1的含量减少,而人参皂苷Rb3、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb2、丙二酸甲酰基人参皂苷Rc、人参皂苷Rf的含量增加,说明麦冬与人参配伍改变了人参皂苷成分的含量,这可能是麦冬配伍人参作用的物质基础。

UPLC-TOF-MS与网络药理学联合探讨人参改善胰岛素抵抗的作用机制

目的运用网络药理学研究人参改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的多成分、多靶标、多途径作用机制。方法通过超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用(Ultra performance liquid chromatography quadrupole-time-of-flight hybrid mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)分析人参中的主要化学成分,使用DAVID数据库进行基因本体论(Gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析,并运用Cytoscape 3.6.1软件绘制网络互作图,image GP工具绘制GO气泡图,使用Vina软件进行分子对接预测。结果研究得到人参改善IR作用的41个关键活性成分和26个关键靶点,GO、KEGG通路富集和Vina分子对接分析发现,人参可能主要通过人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参二酮和25-羟基原人参二醇等活性成分,作用于MAPK1、VEGFA、PIK3R1、NR3C1靶点,调节m TOR信号通路、Toll样信号通路、胰岛素通路等信号通路发挥改善IR作用。结论人参改善IR体现了多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步研究人参改善IR作用药效物质基础和作用机制提供了新的思路和方法。

Rapid and Sensitive Assay of the Main Components in Shuanghuanglian Preparations by UPLC-TOF-MS

1 Introduction As already known, complex prescription has been the outstanding feature of traditional Chinese medicine（TCM）. This fact therefore brings complicated formula with multicomponents from multimaterals, which produces some difficulties to detect the components and to control the quality. Shuanghuanglian preparations（SHLs）, including oral liquid, injection powder, capsule, and tablet, belong to a family of refined traditional Chinese patent medicine and a combined herbal remedy comprised of three herbs：

UPLC-TOF-MS/MS在医药分析检测中的应用研究进展

超高效液相色谱串联飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS/MS)检测技术分析效率高、灵敏度高、重现性好,可一次完成多种成分、复杂样品的在线分析,具备高效、快捷等优势。综述了近年来UPLC-TOFMS/MS分析检测的研究进展,重点介绍了其在原料药、中药材、中成药、生物标志物、其它应用等5大方面的应用研究,报道了近期的研究成果,旨在为UPLC-TOF-MS/MS检测方法的开发与优化提供借鉴意义。

阿莫西林原料药中有关物质的UPLC-TOF-MS/MS鉴定

目的快速鉴定阿莫西林原料药中的有关物质。方法采用UPLC-TOF-MS/MS法测定。Waters Acquity UPLCTM BEH色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙酸铵体系;体积流量0.5 m L/min;检测波长254 nm;柱温30℃;进样量10μL。电喷雾电离源;正离子检测;毛细管电压3.0 k V;离子源温度120℃;雾化气温度500℃;雾化气体积流量700 L/h;锥孔气体积流量50 L/h。结果推测了阿莫西林原料药中6个杂质的化学结构及其裂解规律,同时与欧洲药典中的杂质进行了比对归属。结论建立的UPLC-TOF-MS/MS的方法和实验数据可为阿莫西林原料药的质量控制提供了重要依据。

UPLC-TOF-MS法鉴定胀果甘草药渣中黄酮类成分

目的建立胀果甘草药渣中黄酮类成分的超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)定性分析方法。方法 AgilentSB-C18柱(100mm×4.6mm,1.8μm);流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量0.4mL/min;柱温25℃;检测波长254nm。ESI离子源,飞行时间质谱检测器。对比自制对照品进行鉴别。结果共鉴定出8个黄酮类成分,分别为2',4,4'-三羟基查耳酮、甘草查耳酮D、甘草查耳酮甲、4'-羟基-2'',2''-二甲基吡喃[5'',6'',6,7]黄酮、甘草黄酮C、光甘草酮、甘草黄酮B和kanzonolE。结论建立了一种简单、可靠的UPLC-TOF-MS方法对胀果甘草药渣中黄酮类成分进行了鉴定,对胀果甘草药渣综合利用有一定参考价值。

海岸桐茎和果实的化学成分

采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对海岸桐(Guettarda speciosa Linn.)茎和果实的化学成分进行分析。结果显示:海岸桐茎中有35个化合物,包括三萜类12个、环烯醚萜类7个、酚酸及其苷类12个、强心苷类2个、黄酮类1个、苦木素类1个。海岸桐果实中有40个化合物,包括三萜类10个、环烯醚萜类8个、酚酸及其苷类8个、黄酮类8个、甾体类3个、脂肪酸类2个、二萜类1个。海岸桐茎和果实中共有成分18个,包括三萜类7个、环烯醚萜类6个、酚酸类及其苷类4个、黄酮类1个。综上所述,海岸桐茎中富含鞣质类酚酸成分,生态学意义较强;果实含有环烯醚萜类等活性物质,开发利用价值较高。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS联合网络药理学及分子对接研究五味清浊颗粒治疗腹泻药效物质基础和作用机制

目的基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定五味清浊颗粒中的化学成分,联合网络药理学、分子对接技术探讨其治疗腹泻药效物质基础和作用机制。方法采用Eclipsepius C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.4 mL·min^(-1)。质谱采用电喷雾离子源(ESI)正、负离子模式,扫描范围m/z 50~2000条件下采集多级质谱碎片信息。应用网络药理学构建“核心成分-作用靶点-通路”的网络,对其潜在药效物质基础进行预测。利用AutoDock Vina进行分子对接验证。结果共鉴定出86个主要化学成分,包括生物碱类25个、黄酮类23个、有机酸类12个、鞣质类16个、苯丙素类2个、其他类化合物8个。网络药理学分析结果显示,槲皮素、木犀草素、鞣花酸、胡椒碱、山柰酚、荜茇宁主要作用于IL-6、TNF、EGFR、IFNG、IL-10、IL-8等核心靶点,调节PI3K-Akt、HIF-1、JAK-STAT等关键信号通路来发挥治疗腹泻作用。分子对接结果显示核心成分与核心靶点间具有良好的结合性能。结论该研究成功采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对五味清浊颗粒化学成分进行全面分析鉴定,初步阐明其治疗腹泻的作用机制,为其药效物质基础和质量控制奠定基础。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术快速分析红景天叶的化学成分

目的:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,对红景天叶中的主要酚类、鞣质和黄酮类成分进行分析鉴定。方法:80%甲醇提取物分离采用WatersBEH C_(18)(2.1×100mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-乙睛(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离,流速0.3mL/min,检测波长为280nm,负离子模式下采集数据,依据高分辨质谱提供的分子离子峰和二级碎片离子,并与文献或对照品比对,确定化合物可能的结构。结果:从红景天叶中鉴定出54个化学成分,包括11个酚酸类、25个鞣质类、18个黄酮类化合物,这是首次系统研究了红景天叶中的功能成分。结论:该方法可为红景天叶的化学成分质谱裂解规律和药效物质基础提供科学依据。

基于LC/GC-MS和网络药理学探讨大黄-桃仁药对逐瘀泻热的作用机制

目的 分析大黄-桃仁药对水煎液的化学成分,探讨其逐瘀泻热的药效物质及作用机制。方法 采用UPLC-TOF-MS、GC-MS对大黄-桃仁药对水煎液进行成分分析,结合网络药理学方法构建大黄-桃仁药对逐瘀泻热的“疾病-成分-靶点”网络,筛选目标信号通路。采用间隔24 h两次大鼠尾静脉注射内毒素脂多糖复制“瘀热”大鼠模型,通过大鼠体温变化,血液流变、凝血四项(TT、PT、APTT、FIB)、炎症因子水平、氧化应激水平等的测定对大黄-桃仁药对逐瘀泻热进行药效评价。通过分子对接技术、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)对预测的核心靶点进行验证。结果 从大黄-桃仁药对水煎液中鉴定得到化合物64个,网络药理学分析结果表明大黄-桃仁药对中芦荟大黄素、圣草酚、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素等核心成分,通过作用于AKT1、PTGS2、SRC、IL1B、TNF等核心靶点,调控VEGF、MAPK、IL-17、TNF等通路达到逐瘀泻热的目的。动物实验结果表明,大黄-桃仁药对给药后,模型大鼠的氧化应激(NO、SOD、MDA)、凝血四项、血液流变、体温等指标均向正常回调,大黄-桃仁药对能够降低炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α含量以及核心靶点AKT1、SRC、MYC、EGFR、PTGS2、TP53 mRNA表达。结论 圣草酚、芦荟大黄素、原花青素、没食子酸儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯等化合物为大黄-桃仁药对逐瘀泻热的药效物质。大黄-桃仁药对通过多靶点,多通路调控机体炎症、氧化应激、血管生成、血管内皮等方面发挥逐瘀泻热作用。

基于UPLC-Triple-TOF-MS技术初步分析雅安产道地中药材川牛膝中生物碱成分

采用乙醇提取、成盐、二氯甲烷萃取等方法初步富集川牛膝总生物碱,确定最优提取分离工艺;通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法,采用Waters XSelect CSH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,测试波长254 nm,柱温为50℃,进样量为3μL,采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100~1500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得信息对川牛膝中生物碱类化学成分进行快速鉴定,通过对比分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy数据库及相关文献,推测出两种生物碱成分。研究建立的生物碱类化学成分提取与分析方法,为提高雅安产道地中药材川牛膝的质量控制水平及后续阐明药效物质基础提供了实验依据。

炒菟丝子在大鼠胆汁中的化学成分分析

运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术研究炒菟丝子在大鼠胆汁中的原型成分及其代谢产物,并明确其在胆汁中的代谢转化规律.采用Agilent ZORBAX HPLC Eclipse Plus C 18(100 mm×3 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^(-1),进样量3μL,柱温30℃.运用电喷雾离子源(ESI),扫描范围m/z 50~1200,正、负离子模式下采集胆汁样品谱图信息.结合相关文献信息自建库,从含药胆汁中共鉴定出28种化学成分,其中原型成分4种,代谢产物24种,炒菟丝子在胆汁中发生代谢转化类型有甲基化、葡萄糖醛酸化、氧化脱氢等.就炒菟丝子在大鼠胆汁的化学成分进行分析和代谢过程研究,可为后期炒菟丝子的体内代谢过程及其药效物质基础研究提供依据和参考.

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS结合网络药理学及分子对接探究桑叶清肺润燥的潜在药效成分和作用机制

目的本研究以中医药理论中桑椹滋阴补血的功效为依据,利用超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS/MS)技术结合网络药理学探讨桑叶清肺润燥的潜在药效成分和作用机制。方法利用UPLC-TOF-MS/MS技术结合SwissADME鉴定桑叶的主要活性成分,使用PharmMapper数据库、Swiss Target Prediction数据库预测桑叶活性成分的靶点,在GeneCards数据库、SymMap数据库中筛选肺热咳嗽和肺燥咳嗽的潜在作用靶点。将成分靶点与症状群靶点取交集后,导入STRING数据库构建PPI网络获得核心靶点,最后对核心靶点基因做GO生物过程分析和KEEG通路富集分析。结果结果显示桑椹有效药效成分有55个,靶点261个,与肺热咳嗽、肺燥咳嗽证候相关的核心靶点分别为15和27个。四个证候群的GO生物过程和KEGG通路分析结果存在共性和特性,HIF1x信号通路、白细胞跨内皮迁移是桑叶清肺润燥的主要途径。结论因此桑叶通过多成分、多靶点、多通路的协同作用发挥清肺润燥作用,为进一步研究探讨桑椹滋阴补血的药效成分及作用机制研究提供了理论依据。

影响月季花瓣呈色的理化因子及花色苷组分分析

【目的】通过对影响月季花瓣呈色的各理化因子的定量评价及其相关性分析,探讨月季花色的形成机理,可为花色育种提供理论参考和受体品种,对于探究花色形成机理和种质创新具有重要意义。【方法】以8个不同花色的月季品种为试验材料,分别对其花瓣颜色参数、细胞液pH值、金属离子含量、总花色苷含量、总黄酮含量和总叶绿素含量等理化指标进行测定和比较,并对花色苷组分进行定量分析。【结果】(1)不同花色月季的理化因子间存在显著差异,其中细胞液pH值、Fe^(3+)、Ca^(2+)、Al^(3+)含量以及总花色苷、总黄酮含量等因子与花瓣颜色的形成密切相关,总花色苷含量和总黄酮含量的变化起直接作用,金属离子及细胞液pH值等因素通过改变花色素结构来影响花色。(2)不同花色月季花瓣中所含有的花色苷组分不同。其中,矢车菊素-3,5-葡萄糖苷在月季中占主体地位,主要调控紫红色花朵的形成;其次是天竺葵素-3,5-葡萄糖苷,其主要调控橙色、红色花朵的形成。黄色花朵中花色苷含量很少,主要受类胡萝卜素的调控;橙色花朵受花色苷和类胡萝卜素的双重调控;白色花朵中几乎不含有花色苷。芦丁在8个月季品种中均大量存在,但与花瓣形成无显著相关关系。(3)对8种月季花瓣中花色苷组分进行聚类分析时发现,粉紫色品种‘薰衣草花环’以极高的芦丁含量和少量的花色苷含量始终单独聚为一类。【结论】花色苷的种类和含量直接影响月季的花色,黄酮类物质则辅助花色苷的形成,而细胞液pH值、Fe^(3+)、Ca^(2+)、Al^(3+)含量等因子间接影响花色。在8个月季品种中,粉紫色品种‘薰衣草花环’以其优异的花色苷组分及较高的细胞液pH成为最适合进行花色改良的受体品种。

基于UPLC-Q-TOF-MS法分析陈皮中的化学成分

利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)结合数据分析平台在线分析陈皮中71种化学成分,包括黄酮类、生物碱、香豆素和脂类等9类。通过主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)发现不同陈化年份陈皮中的化学成分具有明显差异,并筛选出17种特征性成分,随着陈化年份的延长,异甘草苷、山奈酚-3-O-β-D-槐糖苷、百蕊草素Ⅰ含量增加,脱水红花黄色素B、补骨脂查尔酮含量减少。此方法可用于区分陈化3,5,10,15,20年的陈皮。该研究了解了陈皮中化学组成并阐明了不同陈化年份陈皮间化学成分存在的差异,对合理开发陈皮的食用和药用价值具有指导意义,为不同陈化年份陈皮的鉴别提供了科学依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术建立银花抗病毒口服液的指纹图谱及多指标含量测定

目的建立银花抗病毒口服液的UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱,对其主要化学成分进行分析鉴定,并测定6个化学成分的含量。方法采用UPLC-Q-TOF-MS技术,正、负离子模式,Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以水相(A,含0.1%甲酸)和有机相乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),进样量为1μL。建立12批银花抗病毒口服液的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析,通过一级、二级质谱及对照品比对鉴别共有峰的化学成分。结果在正、负离子模式下共鉴定了12批银花抗病毒口服液的指纹图谱,确定共有峰32个,指纹图谱相似度均≥0.978,通过聚类分析将样品各分为4类、3类,与主成分分析一致,筛选出汉黄芩苷、千层纸素A苷、连翘酯苷I、异绿原酸B等8个成分是导致不同批次样品差异的标志性化合物。结论所建立的指纹图谱结合多指标含量测定方法稳定、重复性好、特征性强,可为银花抗病毒口服液的质量评价和临床应用提供有效参考。

基于特征图谱及化学模式识别的当归补血汤质量评价研究

目的:建立当归补血汤超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的特征图谱,综合评价其质量。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量2μL;使用电离子喷雾源(ESI),负离子模式扫描。并以指纹图谱相似度评价软件结合聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)对11批当归补血汤进行评价。结果:通过对照品比对及软件预测,从当归补血汤中鉴别出24种成分。图谱标定出41个共有峰,指认出6个色谱峰,分别为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、芒柄花素。HCA、PCA和PLS-DA3种方法均将11批样品分为3类,对黄芪统货、选货和精品饮片进行了明显区分,说明当归补血汤的特征图谱与原药材的质量和等级具有强相关性。结论:构建的高分辨质谱的特征图谱结合化学模式识别方法快速高效全面,适用于当归补血汤整体质量的评价,同时也为中药复方质量标准建立与全程质量控制提供了重要支撑。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的江西特产中药茶芎化学成分研究

茶芎是江西省九江地区的特产中药材之一,其药效物质基础尚不明确,故采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对茶芎的化学成分进行快速分析及鉴定。采用Titank C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,进样量为3μL;选择电喷雾离子源分别在正、负离子模式下扫描分析,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,对所得成分的主要色谱峰进行鉴定。结果显示从茶芎中共鉴定出72个化学成分,主要包括苯酞类成分33个,有机酸类成分32个,生物碱类成分5个,其他类成分2个。该研究建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法可以快速准确且较全面地分析鉴定茶芎中的化学成分,可为其质量控制及药效物质基础研究提供科学依据。