复合诱变选育高产虾青素的红法夫酵母菌株

以红法夫酵母野生型菌株(Phaffia rhodozyma 02)为原始出发菌株,依次进行2轮紫外(UV)-氯化锂(LiCl)和60Co-γ射线诱变,以40μmol/L二苯胺为抗性筛选剂,筛选得到1株遗传稳定的高产虾青素红法夫酵母突变菌株H4-4,命名为HSC-125,虾青素产量为25.36 mg/L,是原始出发菌株P.rhodozyma 02(4.75 mg/L)的5.34倍。采用2轮UV-LiCl和60Co-γ射线复合诱变结合二苯胺作为抗性筛选剂,选育得到的高产虾青素的红法夫酵母突变株,其遗传性质稳定,展现良好效果。

米曲霉孢子原生质体复合诱变及高活力蛋白酶菌株选育

以沪酿3.042米曲霉的孢子原生质体为诱变对象,经溶菌酶2%+蜗牛酶2%+纤维素酶2%,33℃水浴酶解时间5h的孢子原生质体最佳制备条件作用后,对其进行紫外线-氯化锂,NTG复合诱变,并利用酪蛋白平板初筛和固体发酵测定中性蛋白酶活力复筛,筛选了8株高产中性蛋白酶突变株群,为后续的细胞融合、基因组改组等实验提供了优良的候选文库。其中最高产菌株UN97,经37℃培养40h产酶活力为6834U/g(干基),为原菌株的1.62倍,传代培养8次,遗传性能稳定。

氯化锂-紫外-离子束复合诱变红霉素高产菌株研究

以红霉素生产菌红色链霉菌为研究对象,探讨了氯化锂、紫外、离子束3种不同诱变方式对红色链霉菌的影响,根据后代的存活率和突变率选定合适的诱变条件:氯化锂的最优诱变浓度1.2%,紫外的最优诱变时间120s,离子束的最优诱变注量200×1014 cm-2,然后将3种方式结合起来进行复合诱变。经复合诱变后筛选获得高产突变株E0317-1-7-26,该菌株摇瓶效价达7 126μg/mL,较出发菌株E03提高了20.3%;经多次传代分离实验表明,该突变株遗传稳定性较好。

紫外线与氯化锂复合诱变选育L-组氨酸产生菌

以一株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)S6为出发菌株,利用氯化锂、紫外线进行诱变,通过实验证明氯化锂诱变剂量在1.2%时致死率达到82.4%,紫外线在照射30s时致死率达到81.8%。利用氯化锂诱变谷氨酸棒杆菌S6,所得菌株D3的L-组氨酸产量为243mg/L,比出发菌株提高10.5%;以紫外线做诱变S6,所得高产菌株U1产量256mg/L,比出发菌株提高8.5%;以紫外线、氯化锂复合诱变S6,所得菌株N1产量为251mg/L,比出发菌株提高13.6%,结果显示,经紫外线与氯化锂复合诱变后的菌株N1产L-组氨酸的产量最高,比氯化锂诱变后的菌株产L-组氨酸量提高3.1%,比紫外线诱变后的菌株产L-组氨酸量提高5.1%。

快速发酵面包酵母菌株的选育

对出发菌株进行紫外-氯化锂复合诱变,通过初筛、复筛选育出高麦芽糖发酵力、低葡萄糖阻遏的面包酵母菌株BM-72,该菌株在不加糖、低糖面团中均表现出较好的发酵力,分别高于出发菌株19.4%和7.3%。

一株高产核酸酶P1菌株的诱变选育

以一株核酸酶P1产生菌桔青霉050421作为出发菌株,经过紫外线(UV)诱变处理,得到菌株050421-A,其产酶活力比出发菌株提高了约68.1%;将此菌株再经过化学试剂LiCl处理,得到遗传稳定性较好的菌株050421-A-AB,产酶活力在UV诱变基础上提高了40.05%,比原始出发菌株050421提高了约138.88%.

恩拉霉素高产菌株的筛选

从原始生产菌BKSFJ06出发,对其进行了紫外诱变、氯化锂与紫外复合诱变、亚硝基胍诱变和亚硝基胍与紫外的复合诱变及恩拉霉素抗性筛选工作,用HPLC检测方法,以恩拉霉素的产量为指标,筛选高产菌株。最终筛选出的最优突变菌株ERS42-101108产量提高了50%,且该菌株具有良好的遗传稳定性。通过实验内容可以看出,通过亚硝基胍和紫外复合诱变的方法,抗自身产物定向筛选出的突变株具有较优良的性质。

诱变选育D-泛解酸内酯水解酶高产菌及发酵条件优化

该文以实验室筛选得到的一株具有D-泛解酸内酯水解酶活力的镰孢霉菌(酶活力为1.42 U/mL)为出发菌株,先后利用常温室压等离子(atmospheric room temperature plasma,ARTP)和紫外-氯化锂(UV-LiCl)技术,对其进行了4轮递进诱变选育,以筛选得到高活性D-泛解酸内酯水解酶菌株。实验得到ARTP诱变的最佳处理时间为80 s,UV-LiCl诱变的最佳处理时间为80 s(6 g/L LiCl)。通过变色圈大小初筛和摇瓶复筛,最终筛选得到一株酶活力达3.46 U/mL的菌株4-80-6,酶活力较出发菌株提高了143.66%,并且通过8次传代培养,该菌株遗传性较为稳定。以20%的底物浓度催化反应时,突变株4-80-6水解率由原始菌11.6%提高到17.1%,光学纯度由93.5%提高到98.3%。对突变株4-80-6菌株进行发酵条件优化,得到最佳产酶条件为:培养温度25℃,培养基初始pH 8.5,接种量10.5%,培养时间48 h,该条件下酶活力为4.33 U/mL,比优化前提高了25.14%。研究结果为DL-泛解酸内酯酶法拆分的工业应用提供了一种有效策略。

辅酶Q10高产菌株的诱变选育

以豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum 1.1723)为出发菌株,利用紫外-LiCl和超声波进行诱变,以期获得高产辅酶Q10菌株。结果表明:1g/L LiCl诱变能显著提高菌株的正突变率,超声波诱变会引起细胞壁结构与构成发生改变。通过罗红霉素初筛和摇床复筛,获得辅酶Q10突变株C40-05,胞内辅酶Q10产量为1.198mg/g干菌,比出发菌株(0.389mg/g)提高了208%。菌株经5次传代培养,胞内辅酶Q10产量下降了2.67%,突变株遗传形状稳定,可作为辅酶Q10生产菌株。

紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株

以枯草芽孢杆菌BL01为出发菌株,采用紫外-氯化锂复合诱变选育高产α-淀粉酶菌株,确定最佳紫外照射时间为150s、最佳氯化锂浓度为0.3%。采用透明圈法进行初筛,比较HC值(透明圈直径与菌落直径之比);对HC值较大的菌株进行复筛,测发酵上清液α-淀粉酶的酶活,得到高产α-淀粉酶菌株BL01-13,其产α-淀粉酶活性是出发菌株的2.02倍;且该菌株能稳定性遗传,传代5代后,α-淀粉酶酶活稳定在(357.73±4.06)U·mL-1范围内。

高产虾青素红法夫酵母的紫外线诱变

虾青素(3,3'-二羟基-β,β'-胡萝卜素-4,4'-二酮)是一种类胡萝卜、素类物质,具有巨大的开发价值。本文通过单一紫外线、紫外线-氯化锂复合处理,结合选择性平板的筛选作用,对菌株G26进行诱变育种。实验结果表明:紫外线照射3～9min,法夫酵母的死亡率在70%～95%之间;当死亡率为78.57%时,正变率达到最大值71.43%。经多次单独紫外线处理,以及紫外线-氯化锂复合诱变,获得稳定高产突变株G49,虾青素产量达到10 321μg/L,含量为713.8μg/g DCW,较出发菌株G26分别提高31.48%和20.47%。

紫外-氯化锂复合诱变选育泰妙菌素高产菌株

对泰妙菌素生产菌TMⅡ09-003经紫外线(UV)照射180 s后,将菌悬液均匀地涂布于加有0.8%的氯化锂平板上,在避光条件下于温度26℃～27℃、相对湿度60%～65%的环境下培养13～14 d后,挑取单菌落,进行初筛、复筛,用HPLC法测定含量。结果表明,UV照射180 s后,氯化锂加量为0.8%剂量对菌株的致死率为88.6%。对该剂量处理获得的诱变菌株进行了筛选,最终获得4支高产菌株,分别为TMⅡ09-236、TMⅡ09-253、TMⅡ09-441和TMⅡ09-447。

恩拉霉素高产菌株的快速选育

为筛选恩拉霉素高产菌株,降低生产成本,以生产用Streptomyces-483为出发菌株,进行紫外-氯化锂复合诱变。以金黄色葡萄球菌为指示菌,用琼脂块法测定抑菌圈大小,筛选出84株突变株,经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证,最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。

核糖霉素高产菌株的选育

目的选育核糖霉素高产菌株,提高其生产发酵水平。方法以核糖苷链霉菌03-8为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合处理后,再采用微波诱变,筛选自身产物抗性解除反馈调节突变株,同时结合单菌落自然分离纯化法进行选育。结果获得了稳定高产菌株563-44,比出发菌株产量提高201.1%,其生产能力在5吨发酵罐试验中得到验证。结论变异株563-44确实是1株高产的工业生产菌种。

复合诱变选育5-ALA高产菌株及发酵条件优化

以类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)为出发菌株,通过紫外-氯化锂复合诱变,筛选出高产5-ALA的菌株,并通过单因素试验对其发酵产5-ALA条件进行优化。结果表明,在紫外照射80 s、氯化锂浓度0.6%的最适诱变条件下,突变菌落形态大小与产5-ALA能力呈正相关,单菌落直径越大,产5-ALA能力越强,筛选出1株高产5-ALA菌株H80110,其5-ALA产量达24.56 mg/L,较初发菌株提高97.14%。其最佳发酵条件为初始pH 6.6、接种量20%、装液量100 mL/250 mL,且发酵周期缩短为3 d,该菌株具有良好的遗传稳定性。

紫外-氯化锂复合诱变选育高产维生素K_(2)(MK-7)菌株

作为一种新兴的功能性保健食品,维生素K_(2)受到人们越来越多的关注。传统的诱变育种技术是国内外提高菌种产量和性能的重要手段。以本实验室一株产维生素K_(2)(MK-7)的纳豆芽孢杆菌KVK-09为出发菌株,通过对紫外和氯化锂诱变致死率和正突变率的考察,确定紫外-氯化锂复合诱变的最佳诱变条件为紫外照射30s,氯化锂浓度为0.4%。紫外-氯化锂复合诱变后经过摇瓶初筛和复筛,采用高效液相色谱(HPLC)进行检测并筛选突变株。筛选得到一株维生素K_(2)(MK-7)高产菌株KVK-2694,摇瓶发酵水平达到78μg/mL,是出发菌株(43μg/mL)的1.81倍。采用紫外-氯化锂复合诱变,提高了诱变菌株的正突变率,可以有效提高维生素K_(2)(MK-7)的产量,突变菌株KVK-2694遗传稳定性良好,为工业化生产和应用奠定了良好基础。