野生型p53基因蛋白在氨肽酶抑制剂诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡的实验研究

目的研究野生型p53基因蛋白对国产氨肽酶抑制剂乌苯美司(ubenimex)诱导人白血病细胞凋亡的影响及其作用机制。方法真核转导试剂FuGEMNETM6转导入K562细胞,免疫组化法检测细胞p53蛋白的表达,DNA片段原位末端标记及流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Rhodamin(Rh)123染色后,FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果p53基因cDNA转导的细胞p53蛋白表达增加;p53基因转导能促进ubenimex诱导K562细胞凋亡并增加ubenimex诱导的K562细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)的下降。结论野生型p53基因转导能促进ubenimex诱导K562细胞凋亡,并可能参与线粒体信号传导通路的调控。

乌苯美司在犬体内的药动学和绝对生物利用度

建立了RP-HPLC法在258nm测定犬血浆中乌苯美司的浓度,方法定量限为0．625μg／ml,日内、日间差小于5．0％, 平均同收率大于95．0％。采用双周期自身交叉设计,在7条Beagle犬中进行口服及静脉给药的药物动力学研究,清洗期为 8d。Beagle犬静注乌苯美司200mg后的药-时曲线符合三室模型,口服给药的C_(max)为(31．54±5．164)μg/ml,T_(max)为(1．50 ±0．41)h,T_(1/2)为(1．53±0．48)h,AUC_o→t为(92．85±10．74)μg·ml^(1-)·h。平均绝对生物利用度为(67．61±11．75)％。

乌苯美司联合化疗对晚期肺癌患者临床疗效和免疫功能的影响

目的评价乌苯美司联合紫杉醇和顺铂（TP）方案治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床疗效和免疫功能。方法经病理学证实为Ⅲb~Ⅳ期初治NSCLC 59例患者随机分成2组,治疗组30例,采用TP方案化疗基础上加服6个月乌苯美司;对照组29例,采用TP方案单纯化疗,所有患者至少完成2个周期化疗,观察患者近期疗效、免疫功能和不良反应。结果治疗组较对照组外周血中CD3＋、CD4＋T淋巴细胞数量和NK细胞活性高,以及CD4＋/CD8＋比值显著增高,有统计学意义（P〈0.05）;KPS评分和体质量变化的稳定率治疗组较对照组高,有统计学差异（P〈0.05）;2组客观疗效（CR＋PR）分别为46.7%和41.4%,无统计学差异（P〉0.05）;中位无进展生存期（PFS）分别为6.5月和5.2月,有统计学差异（P〈0.05）;Ⅲ~Ⅳ度白细胞减少发生率治疗组较对照组显著下降,有统计学意义（P〈0.05）。结论乌苯美司联合化疗可提高晚期NSCLC患者机体免疫功能、改善生活质量、减轻化疗毒性反应,可作为化疗的辅助性用药。

乌苯美司对肺鳞癌化疗患者免疫功能的影响

目的 评价乌苯美司对肺鳞癌化疗患者免疫功能的影响。方法 将 5 6例未手术肺鳞癌患者按3∶2的比例随机分入试验组 ( 34例 )及对照组 ( 2 2例 ) ,患者均接受CAP方案化疗 ,每 2 1天为 1周期 ,共 3个周期 ;试验组加服乌苯美司 30mg ,每日 1次 ,共 6个月。分析化疗疗效 ,观察治疗前、治疗后 3、6个月淋巴细胞绝对计数 (LC)、OKT4/T8、NK细胞活性、血清IL 2、SIL 2R水平的变化情况。结果 在可评价的 5 2例 (试验组32例 ,对照组 2 0例 )患者中 ,两组间近期化疗疗效无统计学差异 (P >0 .0 5 )。治疗后 3、6个月 ,试验组OKT4/T8比值、NK细胞活性及IL 2水平均较治疗前明显提高 (P <0 .0 5 ) ,但前二项指标与对照组比较无统计学差异(P >0 .0 5 ) ,而后一项则有明显统计学差异 (P <0 .0 5 ) ;治疗后 3、6个月 ,试验组患者血清SIL 2R水平均较治疗前降低 (P <0 .0 5 ) ,但组间比较无统计学意义 ,而对照组除治疗后 6月SIL 2R水平较治疗前明显降低外 (P<0 .0 5 ) ,其余各项指标与治疗前比较均无显著性差异。结论 乌苯美司对肺鳞癌化疗患者OKT4/T8比值、NK细胞活性、血清IL 2和SIL 2R有一定程度的改善作用 ,但其临床应用价值仍需进一步观察确定。

乌苯美司对人白血病细胞生长抑制及其机制探讨

目的 :研究国产氨肽酶 N抑制剂乌苯美司 ( U benim ex)对人白血病细胞的作用及其机理。方法 :应用MTT比色法观察 U benim ex对细胞的生长抑制作用 ,光学显微镜观察细胞形态结构的改变 ,DN A凝胶电泳、DNA片段原位末端标记及流式细胞仪 ( FCM)检测 ,分析细胞凋亡。结果 :1U benim ex明显抑制 H L6 0细胞的生长 ,半数抑制浓度 ( IC5 0 )为 13.0 3μg/m l;而 K 56 2细胞的敏感性较差。其抑制作用均呈剂量效应关系。 2典型的细胞形态改变 ,DN A片段化 ,DNA末端原位标记的检出及流式细胞仪结果 ,均证实 U benim ex能诱导白血病细胞的凋亡。 310μg/m l U benimex作用 12 h即可明显诱导 H L6 0细胞 DNA断裂 ,K56 2细胞的凋亡敏感性显著低于 H L6 0细胞 ;两者凋亡率均呈剂量和时间依赖性 ,经 U benim ex处理后 ,HL6 0细胞出现 G1期阻滞。结论 :U benim ex能抑制 K56 2 ,HL6 0细胞生长 ,诱导细胞凋亡是其机制之一。

乌苯美司对小鼠脾脏天然杀伤细胞活性的增强作用

探讨乌苯美司（１）对天然杀伤（ＮＫ）细胞活性的影响。小鼠ｉｇｌ５ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）×７ｄ使ＮＫ细胞活性显著升高。对腹腔注射环磷酰胺２００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）×１ｄ所致小鼠ＮＫ细胞活性明显降低，同时ｉｇ１，可使ＮＫ细胞活性恢复。１１０～１００μｇ／ｍｌ与小鼠脾细胞体外保温４８ｈ能显著增强其ＮＫ细胞活性。

乌苯美司对肺鳞癌化疗病人免疫功能的影响

目的 :评价乌苯美司对肺鳞癌化疗病人免疫功能的影响及其在抗肿瘤治疗中的辅助作用。方法 :5 6例未手术肺鳞癌病人分为试验组 3 4例及对照组 2 2例 ,2组病人均行CAP方案化疗 ,试验组加服乌苯美司 3 0mg每日 1次共 6mo。观察治疗前、治疗后 3和 6mo化疗疗效和病人淋巴细胞绝对计数 ,OKT4/OKT8,NK细胞活性 ,血清IL 2 ,SIL 2R水平的变化情况。结果 :近期化疗疗效及免疫综合疗效 2组间无统计学差异。治疗 3 ,6mo后 ,试验组OKT4/OKT8和NK细胞胞活性均较治疗前明显提高。NK细胞活性 ,2组间比较差异有显著意义。治疗后 6mo ,2组病人血清SIL 2R水平均较治疗前降低。结论 :乌苯美司对肺鳞癌化疗病人的免疫功能有一定程度的改善作用。

乌苯美司对体外人白细胞介素－2生成及受体表达的促进作用

乌苯美司（乌比美克）１０～１００μｇ／ｍｌ能促进人外周血淋巴细胞分泌ＩＬ－２；而０．０１～０．１μｇ／ｍｌ则能增强人外周血淋巴细胞表达ＩＬ－２受体以及对ＩＬ－２发生反应的能力；在０．０１～１００μｇ／ｍｌ范围内，乌苯美司对人血清中ＩＬ－２抑制物活性无明显影响。

乌苯美司联合TMP方案治疗多发性骨髓瘤的疗效观察

目的探讨乌苯美司联合TMP方案治疗多发性骨髓瘤(MM)的有效性及安全性。方法将2010年1月至2015年5月在本院治疗的60例MM患者按随机数字表法分为2组,每组30例,A组给予沙利度胺+马法兰+强的松(TMP)方案化疗,B组在TMP方案的基础上加乌苯美司30 mg·d-1,持续治疗6个月,比较两组的治疗效果。结果治疗后B组Ig G、Ig A及骨髓瘤细胞均显著低于A组(P<0.05)。A组ORR为63.33%,B组为86.67%;A组PFS为(14.35±0.47)月,B组为(16.45±0.71)月,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B组骨髓抑制发生率显著低于A组(P<0.05),两组其余毒副反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但B组3~4级毒副反应发生率均显著低于A组(P<0.05)。结论对多发性骨髓瘤患者在TMP化疗的基础上加用乌苯美司,可提高患者缓解程度,延长无进展生存期,减少骨髓抑制发生率,并减轻毒副反应程度。

乌苯美司联合化疗用于恶性肿瘤的系统评价

目的:系统评价乌苯美司联合化疗用于恶性肿瘤的疗效和安全性,为临床提供循证参考。方法:计算机检索Central、PubMed、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、万方数据库,收集乌苯美司联合化疗(试验组)对比单纯化疗(对照组)用于恶性肿瘤的随机对照试验(RCT),筛选文献、提取资料并采用Cochrane系统评价员手册5.1.0提供的偏倚风险评价标准评价纳入研究质量,采用Rev Man 5.3统计软件进行Meta分析。结果:共纳入12项RCT,包括762例患者。Meta分析结果显示,试验组患者近期有效率[RR=1.24,95%CI(1.08,1.43),P=0.002]、生存质量(KPS)评分改善率[RR=1.69,95%CI(1.46,1.95),P<0.001]显著高于对照组,胃肠道毒性发生率[RR=0.74,95%CI(0.57,0.94),P=0.02]和白细胞抑制发生率[Ⅰ°～Ⅳ°(用药≤3个月):RR=0.54,95%CI(0.37,0.79),P=0.002;Ⅲ°～Ⅳ°:RR=0.44,95%CI(0.29,0.68),P<0.001]显著低于对照组,差异均有统计学意义。结论:乌苯美司联合化疗用于恶性肿瘤,可以提高患者的近期疗效,改善生存质量,降低胃肠道毒性和骨髓毒性。

CD13抑制剂乌苯美司对A549细胞顺铂敏感性的影响及其机制

目的:检测CD13抑制剂乌苯美司联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖;流式细胞Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot方法检测p53、PARP-1、Bcl-2、Bcl2-xL和Caspase蛋白水平;酶活性底物法检测CD13活性;Hoechst33342染色联合流式细胞术检测侧群细胞。结果:乌苯美司单药对A549细胞增殖无显著影响(P>0.05),乌苯美司(100μg/mL)联合顺铂作用A549细胞24、48、72 h后,乌苯美司可显著增强8、16μmol/L顺铂对A549细胞的增殖抑制(P<0.05),并呈时间依赖性,72h时,8、16μmol/L顺铂组和顺铂联合组的细胞增殖率分别为(62.06±7.60)%vs.(27.92±5.84)%和(19.22±1.57)%vs.(0.67±0.42)%(P<0.05);但对64μmol/L顺铂的细胞增殖率无明显影响(P>0.05)。16μmol/L顺铂联合组细胞凋亡的比例明显增加(P<0.05)。乌苯美司对P53、PARP-1、Bcl-2、Bcl2-xL及Capsize蛋白水平无明显影响,但显著抑制A549细胞CD13活性和降低A549侧群细胞比例(P<0.05)。结论:CD13抑制剂乌苯美司体外条件下显著提高低剂量顺铂对A549细胞的抑制作用,可能成为CD13阳性非小细胞肺癌患者顺铂的增敏剂。

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的:观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法:应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0.5g/L、1g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SK-OV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果:乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0.412,r=0.339,P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0.753,P均=0.000)关系。5g/L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论:乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。

乌苯美司对放射治疗的鼻咽癌患者宿主免疫机能的影响及辅助治疗作用

评价乌苯美司对鼻咽癌宿主免疫机能的影响及其治疗作用。71例鼻咽癌患者随机分为试验组：放射治疗加乌苯美司（30mg／d，口服，连用6月）；对照组：单纯放射治疗。其中试验组43例，对照组28例。结果可供评价的67例中，试验组40例，对照组27例。放疗后3月及6月，试验组免疫综合疗效好于对照组，其中放疗后6个月，有统计学差异（P＜0，05）;试验组IL2水平、NK细胞活力及OKT4／T8比值较治疗前显著提高（P＜0.05），而对照组上述各指标既IL2外，与治疗前比较均无明显改善，两组比较有统计学意义（P＜0．05）。试验组SIL－2R水平较治疗前显著降低（P＜0．05），与对照组比较有显著差异。实验表明乌苯美司有可能作为一种新的免疫调节剂用于鼻咽癌的综合治疗．但仍需扩大观察并作较长期的随访。

乌苯美司胶囊联合DP方案治疗非小细胞肺癌临床观察

目的评价乌苯美司胶囊联合多西紫杉醇和顺铂(DP)方案治疗晚期非小细胞肺癌患者临床疗效和不良反应。方法经病理证实为Ⅲ_b～Ⅳ期非小细胞肺癌60例患者随机分成两组,对照组予DP方案化疗,试验组DP方案化疗基础上加服3个月乌苯美司胶囊,每位患者完成至少3个周期化疗,观察两组外周血有核细胞CD4/CD8、总生存时间、化疗的不良反应。结果试验组在服用乌苯美司胶囊后较对照组CD4/CD8比值显著提高(P<0.05)。两组客观疗效(CR+PR)无显著性差异(P>0.05),分别为36.0%和43.3%;总生存时间试验组较对照组显著延长(P均<0.05)。白细胞减少的发生率试验组较对照组有显著下降(P<0.05)。结论非小细胞肺癌DP方案化疗患者服用乌苯美司胶囊后虽客观疗效无显著差异,但可显著提高机体免疫功能,延长总生存时间,降低化疗不良反应。

乌苯美司胶囊对晚期胃癌化疗患者影响的临床研究

目的评价乌苯美司胶囊对晚期胃癌化疗患者生活质量、不良反应及免疫功能的影响。方法 63例晚期胃癌患者随机分为治疗组(32例)和对照组(31例),所有患者均给予DCF方案化疗2个周期:多西他赛40mg/m^2静脉滴注,d1、8;顺铂15mg/m^2静脉滴注,d1～5天;替加氟600mg/m^2静脉滴注,d1～5天。治疗组在化疗开始时给予乌苯美司胶囊30mg每日清晨顿服,连用8周。观察治疗前、后患者KPS评分,体重变化,血白细胞、血红蛋白、血小板变化及淋巴细胞免疫功能变化。结果治疗组化疗后KPS评分及体重与化疗前相比稳定率达65.6%和68.8%;对照组均为35.5%(P<0.05)。治疗组化疗后血白细胞、血红蛋白、血小板降低程度小于对照组(P<0.05)。两组T抑制、杀伤淋巴细胞(CD3^+、CD8^+)变化无统计学意义。治疗组T淋巴细胞(CD3^+),T辅助、诱导淋巴细胞(CD3^+、CD4^+),NK细胞(CD16^+、CD56^+)水平均较用药前有所提高,而对照组均较化疗前下降,两组相比有统计学意义(P<0.05)。结论乌苯美司胶囊有提高肿瘤患者免疫功能的作用,同时还能减轻化疗不良反应,改善化疗患者的生活质量。

乌苯美司联合放化疗对恶性肿瘤患者免疫功能影响的Meta分析

目的系统评价乌苯美司联合放化疗对恶性肿瘤患者的免疫功能影响。方法计算机检索Pub Med、EMBase、Cochrane临床对照试验资料库、中国期刊全文数据库,中文科技期刊全文数据库(维普)和万方数字化期刊全文库,并手工检索相关文献,收集评价乌苯美司联合放化疗对恶性肿瘤患者免疫影响的的中、英文随机对照试验,对符合纳入标准的临床研究进行质量评价和资料提取后,采用Rev Man 5.2统计软件进行Meta分析。结果共纳入9个符合标准的RCT,810例患者。结果显示:与单纯放、化疗相比,联用乌苯美司可显著提高恶性肿瘤患者NK细胞活性、T4/T8比值、白细胞介素-2水平,两组比较差异有统计学意义〔均数差=3.15,95%可信区间(2.35,3.95),P<0.000 01;均数差=0.28,95%可信区间(0.24,0.33),P<0.000 01;均数差=1.38,95%可信区间(0.72,2.05),P<0.0001〕,并显著降低患者可溶性白细胞介素-2受体水平,差异有统计学意义〔均数差=-64.01,95%可信区间(-93.22,-34.80),P<0.0001〕。结论在放、化疗基础上联用乌苯美司可显著改善恶性肿瘤患者的免疫功能,且不良反应较低,受恶性肿瘤患者本身生存状态及时间限制,尚未证实可延长肿瘤患者的生存时长,因此有待更多大样本、高质量研究加以验证。

乌苯美司抑制胃癌患者术后复发转移临床研究

目的评价乌苯美司对胃癌患者术后免疫功能及远处复发转移的影响。方法60例经术后病理证实为Ⅲ期和Ⅳ期胃癌患者随机分成3组,均行术后常规辅助化疗,A、B两组分别加服6个月、12个月乌苯美司,对照C组不服乌苯美司。观察3组的CD4/CD8、NK细胞活性,以及无病生存期、中位生存时间。结果在可评价的60例患者中,A、B组两组在服用乌苯美司后CD4/CD8比值及NK细胞活性,均较治疗前自身对照组及C组明显提高(P<0.05),B组CD4/CD8比值及NK细胞活性高于A组但无统计学差异(P>0.05);A、B两治疗组的无病生存期和中位生存时间较对照C组时间延长(P<0.05),B组的无病生存期和中位生存时间较A组延长但无统计学差异(P>0.05)。结论胃癌术后辅助化疗患者,服用乌苯美司可显著改善CD4/CD8比值、NK细胞活性,延长无病生存期和中位生存时间,抑制肿瘤的复发及远处转移。乌苯美司是否通过提高患者免疫力、抑制CD13的活性进而抑制肿瘤转移的作用机制仍需要进一步研究。

乳腺癌术后辅助化疗联合乌苯美司治疗对免疫功能及骨髓抑制的影响

目的:探讨乳腺癌术后辅助化疗联合乌苯美司治疗对患者免疫功能、骨髓抑制的影响。方法:对30例乳腺癌术后患者行化疗联合乌苯美司辅助治疗和30例单用化疗治疗的乳腺癌术后患者外周血中T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)进行检测。结果:治疗后化疗联合乌苯美司治疗组患者外周血中CD3、CD4 T淋巴细胞和NK细胞所占比例明显高于单用化疗(对照组),T3与T4比值差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乌苯美司能有效提高化疗后患者机体免疫功能,减轻化疗骨髓抑制,提高生活质量。

乌苯美司体外对人单核细胞功能的活化作用

观察了国产乌苯美司（乌比美克）体外对人单核细胞功能的影响：①０．０１～１００μｇ／ｍｌ乌苯美司能直接诱导人单核细胞生成ＩＬ－１；②经０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司作用４ｈ后，人单核细胞即开始分泌ＩＬ－１，２４ｈ达到高峰，以后逐渐下降；③经１０～１００μｇ／ｍｌ乌苯美司预处理，单核细胞可促进ＮＫ细胞活性，而经０．０１～０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司处理，单核细胞则抑制ＮＫ细胞活性．

乌苯美司对树突状细胞免疫表型影响的体外研究

目的研究乌苯美司对树突状细胞免疫表型的影响。方法采用rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)组合在体外诱导人外周血单核细胞为DC,用流式细胞仪检测树突状细胞特异性的表面分子表达。结果与对照组相比,乌苯美司处理组DC膜表面CD 80、CD 86、CD 1a、CD 83、HLA-DR的表达均上调,其中CD 80+为(79.88±4.09)%vs(88.18±3.59)%、CD 86+为(76.56±2.54)%vs(86.39±1.71)%、HLA-DR+为(81.26±1.31)%vs(96.78±2.71)%、CD 1a+为(84.19±1.46)%vs(93.60±2.71)%、CD 83+为(66.83±1.11)%vs(78.29±2.14)%。结论乌苯美司能够使树突状细胞部分抗原递呈相关分子表达上调,从而可能通过增强树突状细胞的抗原递呈功能而促进T细胞的激活,增强抗肿瘤免疫功能。