ubiquilin3基因在小鼠组织中的表达及意义

目的探讨ubiquilin3基因在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠、大肠、睾丸、卵巢、子宫等多种组织及不同周龄小鼠睾丸组织的表达及其意义。方法分别利用PCR、Western、Northern等方法,观察ubiquilin3基因在小鼠多种组织、不同周龄的小鼠睾丸组织,mRNA和蛋白水平的表达。结果在mRNA和蛋白水平上,ubiquilin3基因在其他组织中均没有表达,而在小鼠睾丸组织中特异性表达;在不同周龄的小鼠睾丸组织中,从2周龄的小鼠睾丸组织开始表达,3周表达量逐渐增加,至4周小鼠中表达量达最高,且在成熟小鼠中持续表达。结论 ubiquilin3基因在小鼠睾丸组织特异表达,在成熟小鼠中表达量达到最高值,推测其与小鼠精子生成及精子成熟过程相关。

Ubiquilin在内质网应激中的作用及相关蛋白

内质网是调节细胞生理及病理活动的重要细胞器,它有四个主要的生理功能：合成膜蛋白和分泌蛋白,折叠蛋白质,储存钙,参与合成脂质和胆固醇。当细胞受到缺氧、重金属、能源物质缺乏等刺激或干扰内质网生理功能的物质,如Ca2＋-ATPase抑制剂、衣霉素的作用时,内质网稳态被破坏,激活一系列信号通路,引起相应的细胞反应,以恢复内质网稳态,对细胞产生保护性作用。

Overexpression of Ubiquilin4 is associated with poor prognosis in patients with cervical cancer

BACKGROUND Ubiquilins(UBQLNs)are important factors for cell proteostasis maintenance.UBQLNs are involved in the modulation of the cell cycle,as well as in apoptosis,membrane receptors regulation,DNA repair,epithelial-mesenchymal transition,and mi RNA activities.They also affect the selection of double-strand break repair pathways.Abnormal UBQLNs expression can lead to many diseases,including cancer.Studies have found that the expression of Ubiquilin4(UBQLN4)is associated with the development of several tumor types.However,the association between UBQLN4 and cervical cancer has not been examined yet.AIM To investigate the expression of UBQLN4 in cervical cancer and to evaluate its correlation with disease prognosis.METHODS Immunohistochemistry was performed to examine the expression of UBQLN4 in 117 cervical cancer tissues and 32 matching pericervical tissues.Paired t-test(twotailed)was used to compare the differences between groups.We collected patients’clinical characteristics,including age,histological grade,pathologic type,lymph node metastasis,and FIGO stage(2018)and compared them by chi-square test.All patients were followed for 5.5 to 6.8 years.Kaplan-Meier method and logrank test were used to compare the differences in the overall survival(OS)and progression-free survival(PFS)among the different groups.RESULTS Overexpression of UBQLN4 was observed in 70.9%(83/117)of all cervical cancer tissues and in 15.6%(5/32)of the paired parauterine tissues.The expression of UBQLN4 was associated with lymph node metastasis,poor differentiation,and advanced stage,but the difference was not significant.Kaplan-Meier and log-rank test results suggested the high expression of UBQLN4 was associated with short OS and PFS.Regardless of UBQLN4 expression,the patient age and FIGO stage were also associated with disease prognosis.The statistically significant variables obtained from univariate the Kaplan-Meier analysis were subjected to Cox multivariate survival regression analysis,which showed that,in addition to the FIGO stage and age,UBQLN4 was also an independent prognostic marker for OS and PFS(P=0.011 and P=0.024,respectively).CONCLUSION The overexpression of UBQLN4 was associated with poor prognosis in cervical cancer.Our study proposed a novel prognostic factor and improved the existing understanding of the pathogenesis of cervical cancer.

肺腺癌Ubiquilin 1蛋白的表达与临床病理关系的研究

目的探讨肺腺癌组织中Ubiquilin 1蛋白的表达与临床病理特征的关系。方法选取90例肺腺癌患者,应用免疫组化组织芯片,评估癌组织中Ubiquilin 1蛋白高表达与临床病理关系,评估癌及癌旁组织中的表达及与远期生存的关系。结果肺腺癌组织中Ubiquilin 1蛋白的表达高于配对的癌旁组织,差异有统计学意义(Z=-5.831,P<0.01)。肺腺癌高表达与配对癌旁高表达相关(χ2=17.222,P<0.01),与5年生存率相关(χ2=25.989,P<0.01)。TNM分期、性别、肺癌中高表达、癌旁中高表达是回归模型筛选出来的有统计学意义的预后因子(P<0.05),Kaplan-Meier生存率曲线提示高表达与不良预后有关(P<0.01)。结论 Ubiquilin 1蛋白可以作为预测肺腺癌临床及预后的指标,对筛选肺腺癌手术后高危患者有重要的临床意义。

ubiquilin 4相互作用蛋白的鉴定

目的筛选、鉴定与ubiquilin 4相互作用的蛋白,探讨ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制。方法利用细胞免疫荧光技术,确定外源及内源ubiquilin 4在MKN45细胞中的定位;构建含有UBQLN4和GST标签的原核表达载体p GEX-UBQLN4,将其转化至大肠杆菌中,6 h后收集蛋白。运用标签纯化ubiquilin 4,利用GST-pull down技术寻找差异条带,再进一步应用蛋白质谱技术鉴定蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证。结果免疫荧光显微镜显示,外源及内源ubiquilin 4均主要定位于细胞核和细胞质。通过纯化及蛋白质谱分析技术鉴定发现,MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用。结论 MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用,可能为阐明ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制提供重要的依据。

宫颈癌预后与泛素蛋白1及免疫细胞群表达特征的关联性

目的研究宫颈癌患者外周血免疫细胞群及癌组织内泛素蛋白1(UBQLN1)表达水平与其预后的关系。方法将2018年6月至2020年1月在晋城大医院行宫颈癌根治术联合术后规范化治疗的98例宫颈癌患者纳为观察组,同时将同期于同一医院行健康体检的60例同年龄段女性纳为对照组。术前采集2组研究对象外周静脉血,检测CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞以及CD28^(+)T细胞表达水平,并于术中收集观察组患者宫颈癌及癌旁组织,采用免疫组化法检测UBQLN1表达水平。随访至2022年1月,统计观察组患者宫颈癌复发率。分析外周血免疫细胞群及宫颈癌组织内BUQLN1表达水平与其临床病理特征及预后之间的关系。结果观察组外周血CD8^(+)T细胞占比高于对照组,CD4^(+)/CD8^(+)比值低于对照组,观察组宫颈癌组织内UBUQLN1阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌临床分期为ⅡA期的患者外周血CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值低于Ⅰ期,CD8^(+)T细胞占比低于Ⅰ期,宫颈癌淋巴转移者CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值低于无淋巴转移者,CD8^(+)T细胞占比水平高于无淋巴转移者,宫颈癌病灶直径≥4 cm者的外周血CD4^(+)T细胞占比及CD4^(+)/CD8^(+)比值均低于<4 cm者,低分化者癌灶组织内UBQLN1阳性检出率高于中高分化者,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访至2022年1月,共29例宫颈癌患者确诊为复发,复发者外周血CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值均低于未复发者,CD8^(+)T细胞占比以及UBQLN1阳性检出率均高于未复发者,差异有统计学意义(P<0.05)。绘制受试者操作特征(ROC)曲线提示,外周血免疫细胞群CD4^(+)/CD8^(+)比值在预测宫颈癌术后复发中的效能最高,其曲线下面积(area under curve,AUC)=0.951,95%CI(0.905~0.997),CD4^(+)、CD8^(+)、CD28^(+)T细胞单独应用时在预测宫颈癌术后复发时,CD4^(+)效能最高,其AUC=0.829,95%CI(0.746~0.912)。癌变组织内UBQLN1阳性表达在预测宫颈癌术后复发中的AUC=0.880,95%CI(0.784~0.935)。结论宫颈癌患者外周血免疫细胞群水平及癌灶组织内UBQLN1阳性表达对预测患者术后复发情况具有一定价值,可作为宫颈癌术后复发预测的潜在指标。

灰毡毛忍冬内参基因筛选和Mads-box家族基因AGL15的时空表达分析

目的筛选灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides基因表达分析的内参基因,研究其Mads-box基因家族AGL15基因(Lm AGL15)的时空表达特性。方法克隆灰毡毛忍冬内参基因18 S r RNA、Ubiquilin、Actin和Efl-β的基因片段,评价了4个基因在不同部位叶、茎和花蕾,以及4个基因在灰毡毛忍冬生长不同时期的稳定性,筛选内参基因,分析Lm AGL15基因的时空表达特性。结果 18 S r RNA表达最稳定,适宜作为内参基因,叶片、茎的Lm AGL15基因相对表达量较低,花蕾相对表达量较高。花蕾不同发育时期,Lm AGL15的相对表达量呈现逐渐降低的变化,20 d后Lm AGL15的相对表达量最低,然后依次是花蕾初期(15 d)、青绿色花蕾期(10 d)、绿白色花蕾期(5 d)。结论 18 S r RNA是适宜的内参基因。叶片、茎和花蕾中,Lm AGL15的相对表达量差异明显。花蕾发育不同时期,Lm AGL15的相对表达量呈逐渐降低的变化,与花蕾开放变化规律相似。