基于脾脏代谢组学方法研究低聚硒化氨基多糖对黑鲷的免疫调节作用

以冷冻甲醇提取,C18色谱柱和HILIC色谱柱分别分离黑鲷脾脏中的内源性代谢物,采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-TOF-MS)的非靶向代谢组学研究方法,分析了黑鲷饲喂低聚硒化氨基多糖后脾脏中内源性代谢物的变化差异,揭示了低聚硒化氨基多糖调节黑鲷免疫功能的潜在机制。采用XCMS^plus软件结合高分辨二级质谱数据库处理质谱原始数据,筛选出潜在生物标志物,并通过Metabo Analyst 4.0网站分析相关代谢通路。结果表明,黑鲷饲喂低聚硒化氨基多糖后脾脏中的36个代谢物发生显著变化;低聚硒化氨基多糖可通过9条代谢通路增强黑鲷的免疫机能。该研究结果为阐明低聚硒化氨基多糖的免疫增强机制提供了科学依据。

肥胖2型糖尿病前期肝脏脂肪异位沉积的脂质代谢研究

目的:从脂质组层面揭示肝脏脂肪异位沉积对肥胖2型糖尿病前期胰岛素抵抗(IR)的影响。方法:将雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组和模型对照组各6只,分别供应普通饲料和高脂饲料16 w,通过检测大鼠空腹血糖和空腹胰岛素含量、计算IR指数,建立肥胖2型糖尿病前期模型;油红O染色法观察肝组织病理结构性变化;ELISA法测定肝组织炎症因子及氧化指标;采用UPLC-Q-TOF/MS技术对样本进行检测,对正常对照组、模型对照组的结果进行主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)分析,筛选VIP值>1及采用GraphPad Prism 8.0进行t检验(P<0.05)筛选差异代谢物;通过HMDB数据库对差异代谢物进行鉴定;应用MetaboAnalyst 5.0对已鉴定到的生物标志物进行通路分析;在Hiplot网站使用简单相关性热图将鉴定出的脂质代谢物与炎症因子及氧化指标做相关性分析。结果:经过高脂饲料喂养,与正常对照组比较,模型对照组的血糖和IR指数明显升高(P<0.05),空腹血糖处于糖尿病前期(血糖均值为6.4 mmol/L);肝脏油红O染色结果显示,模型对照组的肝组织中存在较多的脂质;血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)含量明显升高(P<0.05或P<0.01),IL-10、超氧化物歧化酶(SOD)含量明显降低(P<0.05或P<0.01);模型对照组共鉴定出36种脂类潜在性生物标志物,有3种磷脂酰胆碱(PC)、3种磷脂酰乙醇胺(PE)、三酰甘油(TG)等水平显著升高(P<0.01),6种PC,10种PE、Squalene(角鲨烯)、磷脂酰丝氨酸(PS)等水平显著下降(P<0.01)。经鉴定,这些潜在生物标志物主要调节甘油磷脂代谢、鞘脂代谢、类固醇生物合成、甘油酯代谢、糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定生物合成、α-亚麻酸代谢、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢途径;结合肥胖2型糖尿病前期空腹血糖,胰岛素浓度,IR指数与IL-1β、TNF-α、IL-10、SOD、MDA的相关性分析,发现肥胖2型糖尿病前期的IR指数与IL-1β、TNF-α、MDA含量呈正相关,与SOD、IL-10含量呈负相关。肥胖2型糖尿病前期肝脏脂肪异位沉积中脂质代谢物中有3种PC、3种PE、TG、GlcCer、DG、等与IL-1β、TNF-α、MDA呈正相关,与SOD、IL-10含量呈负相关;有6种PC、10种PE、PS等与IL-1β、TNF-α、MDA含量呈负相关,与SOD、IL-10含量呈正相关。结论:高脂饲料诱导的肥胖2型糖尿病前期IR的发生与肝脏甘油磷脂、鞘脂代谢和类固醇生物合成代谢等多条代谢通路密切相关。

固相萃取富集-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定源水和自来水中的40种多类别抗生素

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时检测水源水和自来水中的磺胺类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类40种抗生素,同时建立超高效液相色谱-三重四级杆飞行时间质谱的确认方法。方法水样经离心沉淀除去颗粒物,盐酸调至p H=3,经HLB固相萃取小柱富集、净化,甲醇洗脱,洗脱液浓缩后进超高效液相色谱-串联质谱分析。高含量样品通过进一步浓缩,采用三重四级杆飞行时间质谱进行确认。结果 40种抗生素在0.5 ng/ml^20 ng/ml时,线性关系较好,相关系数(r)≥0.997,检出限为1 ng/L^5 ng/L,定量限为3 ng/L^10 ng/L。在低(10 ng/L)、中(50 ng/L)、高(100 ng/L)3种加标浓度下,40种抗生素的回收率为40.28%~120.50%,相对标准偏差(RSD)为1.25%~13.22%。同时,高含量样品经三重四级杆飞行时间质谱得到进一步验证,确保了结果的准确性。结论该方法简单、快速、准确,适用于水源水和自来水中抗生素的多残留检测。

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法定性筛查52种减肥类非法食品添加物

【目的】建立超高效液相色谱⁃四极杆飞行时间质谱定性测定食品中52种减肥类非法食品添加物的方法。【方法】以甲醇超声提取样品,采用Waters CORTECS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7µm),以0.1%甲酸溶液⁃乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子(ESI)源,Q⁃TOF⁃MS作检测器,正、负离子模式检测。以标准品建立标准谱库,供试品与标准谱库中各化合物的保留时间、母离子及碎片离子精确相对分子质量进行比对,准确定性。【结果】该方法专属性好,空白基质无干扰;重复性好,一式6份均可检出;52种化合物在5种基质中检出限为1~100 mg‧kg^(−1)。方法已应用于实际样品测定中,246批样品中共检出16种化合物。【结论】该方法定性准确、专属灵敏,可有效打击减肥类食品中的非法添加行为。